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POR ORDENES DE 30 DE NOVIEMBRE DE 1976 ("BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO" DE 4 DE ENERO DE 1977) Y DE 31 DE ENERO DE 1977 ("BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO" DE 14 DE JULIO) SE ESTABLECIERON DIVERSOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS, CONTEMPLANDO EN EL APARTADO SEGUNDO LA POSIBILIDAD DE SU AMPLIACION A MEDIDA QUE LOS CORRESPONDIENTES GRUPOS DE TRABAJO AVANCEN EN EL ESTUDIO DE NUEVOS METODOS. POR OTRA PARTE EL CONTINUO PROGRESO DE LAS TECNICAS DE ANALISIS ACONSEJAN LA REVISION PERIODICA DE ESTOS METODOS MODIFICANDOLOS, COMPLETANDOLOS O SUSTITUYENDOLOS.

EN CONSECUENCIA, A PROPUESTA DE LOS MINISTROS DE DEFENSA, DE HACIENDA, DE ADMINISTRACION TERRITORIAL, DE SANIDAD Y SEGURIDAD SOCIAL, DE INDUSTRIA Y ENERGIA, DE COMERCIO Y TURISMO Y DE AGRICULTURA, ESTA PRESIDENCIA DEL GOBIERNO DISPONE:

PRIMERO.- SE APRUEBAN COMO OFICIALES LOS METODOS DE ANALISIS DE ACEITES Y GRASAS, PRODUCTOS CARNICOS, CEREALES Y DERIVADOS, FERTILIZANTES, PRODUCTOS FITOSANITARIOS, PRODUCTOS LACTEOS, PIENSOS, AGUAS Y PRODUCTOS DERIVADOS DE LA UVA, QUE SE CITAN RESPECTIVAMENTE EN LOS ANEJOS DEL I AL IX.

SEGUNDO.- CUANDO NO EXISTAN METODOS OFICIALES PARA DETERMINADOS ANALISIS Y HASTA QUE SEAN ESTUDIADOS POR EL GRUPO DE TRABAJO CORRESPONDIENTE, PODRAN SER UTILIZADOS LOS ADOPTADOS POR ORGANISMOS NACIONALES O INTERNACIONALES DE RECONOCIDA SOLVENCIA.

TERCERO.- QUEDAN DEROGADAS LAS DISPOSICIONES DE IGUAL O INFERIOR RANGO QUE SE OPONGAN A LA PRESENTE ORDEN.

CUARTO.- LA PRESENTE DISPOSICION ENTRARA EN VIGOR A LOS TREINTA DIAS DE SU PUBLICACION EN EL "BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO".

MADRID, 31 DE JULIO DE 1979.- PEREZ-LLORCA Y RODRIGO.

ANEJO I

METODOS DE ANALISIS DE ACEITES Y GRASAS

10 (B) INDICE DE ACIDEZ

(METODO POTENCIOMETRICO)

10 (B).1. PRINCIPIO.

LA DETERMINACION DE LA ACIDEZ LIBRE SE EFECTUARA POR VOLUMETRIA, UTILIZANDO INDICADOR POTENCIOMETRICO, SIENDO ESTE EL METODO APLICABLE CUANDO LA VALORACION INTENSA DE LA SOLUCION O SU TURBIDEZ DIFICULTAN LA APRECIACION DEL VIRAJE DEL INDICADOR COLOREADO.

1O (B).2. MATERIAL Y APARATOS.

10 (B).2.1. EQUIPO DE VALORACION POTENCIOMETRICA EQUIPADO CON ELECTRODOS DE VIDRIO/CALOMELANO O DE WOLFRAMIO/CALOMELANO.

10 (B).2.2. AGITADOR MAGNETICO.

10 (B).2.3. BURETA DE 25 ML, DIVIDIDA EN DECIMAS DE ML.

10 (B).2.4. MATRAZ AFORADO DE 1.000 ML.

10 (B).2.5. PROBETA GRADUADA DE 50 ML.

10 (B).2.6. VASOS DE PRECIPITADO DE 150 ML, FORMA ALTA.

10 (B).3. REACTIVOS.

10 (B).3.1. ISOBUTIL-METIL-CETONA (FORMULA OMITIDA)

10 (B).3.2. ISOPROPANOL.

10 (B).3.3. HIDROXIDO POTASICO.

10 (B).3.4. ACIDO BENZOICO.

10 (B). 3.5. DISOLUCION O,1 N DE HIDROXIDO POTASICO EN ISOPROPANOL.

PESAR 7 G. DE HIDROXIDO POTASICO, EN LENTEJAS, E INTRODUCIRLAS EN UN MATRAZ AFORADO DE UN LITRO. ADICIONAR ALCOHOL ISOPROPILICO, AGITAR CON AGITADOR MAGNETICO HASTA CONSEGUIR UNA DISOLUCION COMPLETA Y ENRASAR. ESTA DISOLUCION SE VALORA CON ACIDO BENZOICO.

10 (B).4. PROCEDIMIENTO.

10 (B).4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

LA MUESTRA DEBERA ESTAR SECA Y LIBRE DE MATERIAS EXTRAÑAS EN SUSPENSION. EN CASO CONTRARIO, ANTES DE PROCEDER A LA PESADA, DEBERA DECANTARSE EL AGUA SI HUBIESE LUGAR A ELLO; Y, EN TODO CASO, FILTRAR CON PAPEL DE FILTRO, EFECTUANDOSE ESTA OPERACION A UNA TEMPERATURA LIGERAMENTE SUPERIOR A LA DEL PUNTO DE FUSION DE LA GRASA.

LAS GRASAS QUE CONTENGAN ACIDOS GRASOS VOLATILES NO PODRAN CALENTARSE, DEBIDO AL RIESGO DE VOLATILIZACION DE ACIDOS LIBRES. EN ESTOS CASOS, SE PROCEDERA A LA DETERMINACION DE LA ACIDEZ DIRECTAMENTE, REFIRIENDOSE A MUESTRA SECA Y EXENTA DE IMPUREZAS INSOLUBLES, BASANDOSE EN LAS DETERMINACIONES REALIZADAS SOBRE MUESTRAS INDEPENDIENTES.

10 (B).4.2. DETERMINACION.

PESAR DE 5 A 10 G. DE MATERIA GRASA EN UN VASO DE 150 ML. Y AGREGAR 50 ML. DE REACTIVO 10 (B).3.1. A CONTINUACION INTRODUCIR LOS ELECTRODOS Y PROCEDER A LA VALORACION CON LA DISOLUCION DE HIDROXIDO POTASICO.

10 (B).5. CALCULOS.

CALCULAR EL INDICE DE ACIDEZ APLICANDO LA SIGUIENTE FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

10 (B).6. OBSERVACIONES.

CUANDO SE UTILICEN ELECTRODOS SIMPLES LA UNION ENTRE LA DISOLUCION SATURADA DE CLORURO POTASICO Y LA DISOLUCION DE MEDIDA ES CONVENIENTE HACERLA A TRAVES DE UNA ESPIGA DE PORCELANA POROSA DE UNOS 3 CM. DE LONGITUD O POR CUALQUIER OTRO SISTEMA QUE IMPIDA UNA DIFUSION APRECIABLE ENTRE AMBAS DISOLUCIONES DURANTE EL TIEMPO QUE DURA LA VALORACION.

10 (B).7. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO NACIONAL DE RACIONALIZACION Y NORMALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA 55.063.

11 (B). INDICE DE SAPONIFICACION

(METODO POTENCIOMETRICO)

11 (B). 1. PRINCIPIO.

SE DENOMINA INDICE DE SAPONIFICACION EL PESO EN MG. DE HIDROXIDOS POTASICO NECESARIO PARA SAPONIFICAR 1 G. DE MATERIA GRASA.

LA DETERMINACION SE REALIZA SAPONIFICANDO LA MUESTRA CON UNA DISOLUCION PREVIAMENTE VALORADA DE HIDROXIDO POTASICO, DETERMINANDO POR VOLUMETRIA EL EXCESO DE HIDROXIDO POTASICO, UTILIZANDO INDICADOR POTENCIOMETRICO. ESTE METODO DEBE APLICARSE CUANDO LA COLORACION INTENSA DE LA SOLUCION O TURBIDEZ DIFICULTEN LA APRECIACION DEL VIRAJE DEL INDICADOR COLOREADO.

11 (B).2. MATERIAL Y APARATOS.

11 (B).2.1. EQUIPO DE VALORACION POTENCIOMETRICA EQUIPADO CON ELECTRODOS DE VIDRIO/CALOMELANO O WOLFRAMIO/CALOMELANO.

11 (B).2.2. AGITADOR MAGNETICO.

11 (B).2.3. BURETA DE 25 ML. DIVIDIDA EN DECIMAS DE ML.

11 (B).2.4. PIPETA AFORADA DE 25 ML.

11 (B).2.5. MATRAZ AFORADO DE 1.000 ML.

11 (B).2.6. PROBETA GRADUADA DE 50 ML.

11 (B).2.7. MATRACES REDONDOS DE 100 ML. PROVISTOS DE TUBO DE REFLUJO, DE UN METRO DE LONGITUD, CON AJUSTE NORMALIZADO 14/23.

11 (B).2.8. VASOS DE PRECIPITADO DE 150 ML, FORMA ALTA.

11 (B).3. REACTIVOS.

11 (B).3.1. ISOPROPANOL.

11 (B).3.2. ETILENGLICOL. INDICE DE REFRACCION A 20 GRADOS C: 1,4274-1,4292.

11 (B).3.3. ACIDO CLORHIDRICO D= 1,18.

11 (B).3.4. HIDROXIDO POTASICO.

11 (B).3.5. TRIS-(HIDROXI-METIL)-AMINOMETANO (CH2OH)3ONH4 DE CALIDAD UTILIZADA PARA LA PREPARACION DE SOLUCIONES PATRON, PESO EQUIVALENTE 121,14.

11 (B).3.6. DISOLUCION 0,5N DE HIDROXIDO POTASICO EN ISOPROPANOL. PESAR 35 G. DE HIDROXIDO POTASICO, EN LENTEJAS, E INTRODUCIR EN UN MATRAZ AFORADO DE UN LITRO. ADICIONAR ALCOHOL Y SOPROPILICO, AGITAR CON AGITADOR MAGNETICO HASTA CONGEGUIR LA DISOLUCION COMPLETA Y ENRASAR.

11 (B).3.7. DISOLUCION 0,5N DE ACIDO CLORHIDRICO EN ISOPROPANOL. MEDIR CON PROBETA 42 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y VERTERLOS EN UN MATRAZ AFORADO DE 1.000 ML, COMPLETANDO EL VOLUMEN HASTA EL ENRASE CON ISOPROPANOL. PARA VALORAR ESTA DISOLUCION PESAR, EN VIDRIO DE RELOJ Y CON PRECISION DE 0,2 MG, APROXIMADAMENTE, 1,2 G. DE TRIS-(HIDROXI-METIL)-AMINOMETANO, PASANDOLO A UN VASO DE 150 ML, FORMA ALTA. DISOLVER EL 20 ML. DE ISOPROPANOL, ADICIONANDOSE 20 ML DE ETANODIOL, EFECTUANDOSE SEGUIDAMENTE LA VALORACION CON LA DISOLUCION CLORHIDRICA, SEGUN SE DESCRIBE EN 11 (B).4.2. LA VALORACION TAMBIEN SE PUEDE REALIZAR UTILIZANDO INDICADOR COLOREADO, ADICIONANDOSE PARA ELLO 2 GOTAS DE DISOLUCION AZUL DE TIMOL AL 1 POR 100 EN ISOPROPANOL, ACUSANDOSE EL PUNTO DE EQUIVALENCIA POR UN VIRAJE BRUSCO DEL AMARILLO AL ROSA. SEAN P LOS GRAMOS DE THMAM PESADOS Y V LOS MILILITROS DE ACIDO CLORHIDRIDO CONSUMIDOS EN LA VALORACION:

(FORMULA OMITIDA)

11. (B).4. PROCEDIMIENTO.

11. (B).4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

LA MUESTRA DEBERA ESTAR SECA Y LIBRE DE MATERIAS EXTRAÑAS EN SUSPENSION. EN CASO CONTRARIO, ANTES DE PROCEDER A LA PESADA, DEBERA DECANTARSE EL AGUA, SI HUBIERE LUGAR A ELLO, Y, EN TODO CASO, FILTRAR POR PAPEL DE FILTRO, EFECTUANDOSE ESTA OPERCION A UNA TEMPERATURA LIGERAMENTE SUPERIOR A LA DEL PUNTO DE FUSION DE LA GRASA.

LAS GRASAS QUE CONTENGAN ACIDOS GRASOS VOLATILES NO PODRAN CALENTARSE, DEBIDO AL RIESGO DE VOLATILIZACION DE ACIDOS LIBRES. EN ESTOS CASOS, SE PROCEDERA A LA DETERMINACION DE LA ACIDEZ DIRECTAMENTE, REFIRIENDOSE A MUESTRA SECA Y EXENTA DE IMPUREZAS INSOLUBLES, BASANDOSE EN LAS DETERMINACIONES REALIZADAS SOBRE MUESTRAS INDEPENDIENTES.

11 (B).4.2. DETERMINACION.

PESAR EN UN MATRAZ REDONDO DE 100 ML, APROXIMADAMENTE, 2 G. DE LA MUESTRA. ADICIONAR SEGUIDAMENTE CON PIPETA 25 ML, DE LA DISOLUCION O,5 N DE 11 (B) 3.6. AJUSTAR EL TUBO DE REFLUJO Y CALENTAR HASTA EBULLICION, MANTENIENDOLA DURANTE MEDIA HORA O MAS SI FUERA NECESARIO HASTA CONSEGUIR LA SAPONIFICACION COMPLETA. RETIRAR EL MATRAZ Y DEJAR ENFRIAR. ANTES DE QUE SE ENFRIE COMPLETAMENTE TRANSVASAR EL CONTENIDO A UN VASO DE PRECIPITADO DE 150 ML, LAVANDO EL MATRAZ CON 30 ML DE ETILENGLICOL ADICIONADO EN PORCIONES SUCESIVAS. COMPLETAR EL LAVADO CON 5 ML DE ISOPROPANOL. PARALELAMENTE SE REALIZA UNA PRUEBA EN BLANCO CON 25 ML. DE LA DISOLUCION DE HIDROXIDO POTASICO 0,5 N. AL TERMINAR EL PERIODO DE EBULLICION ENFRIAR Y TRANSVASAR A UN VASO DE 150 ML, COMO ANTERIORMENTE. A CONTINUACION INTRODUCIR LOS ELECTRODOS Y PROCEDER A LA VALORACION CON LA DISOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO. VER 11. (B).6.

11 (B).5. CALCULOS.

CALCULAR EL INDICE DE SAPONIFICACION APLICANDO LA SIGUIENTE FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

11 (B).6. OBSERVACIONES.

CUANDO SE UTILICEN ELECTRODOS SIMPLES LA UNION ENTRE LA DISOLUCION SATURADA DE CLORURO POTASICO Y LA DISOLUCION DE MEDIDA SE HARA A TRAVES DE UNA ESPIGA DE PORCELANA POROSA DE UNOS 3 CM. DE LONGITUD O POR CUALQUIER OTRO SISTEMA QUE IMPIDA UNA DIFUSION APRECIABLE ENTRE AMBAS DISOLUCIONES DURANTE EL TIEMPO QUE DURE LA VALORACION.

11 (B).7. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO DE RACIONALIZACION Y NORMALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA 55 064.

41. DETERMINACION DE ACIDOS GRASOS POR CROMATOGRAFIA GASEOSA

41.1. PRINCIPIO.

EL METODO ESTA BASADO EN LA SEPARACION Y DETERMINACION POR CROMATOGRAFIA GASEOSA DE LOS ESTERES METILICOS DE LOS ACIDOS GRASOS.

ES APLICABLE A ACEITES Y GRASAS TANTO VEGETALES COMO ANIMALES, QUE CIRCULAN NORMALMENTE EN EL COMERCIO, CONTENIENDO ACIDOS GRASOS DE 12 A 24 ATOMOS DE CARBONO. EN EL CASO DE LA MANTEQUILLA Y DE OTRAS GRASAS QUE CONTEGAN ACIDOS GRASOS INFERIORES, DEBERA UTILIZARSE UN METODO ADECUADO PARA LA PREPARACION DE LOS ESTERES METILICOS O AISLAMIENTO DE LOS ACIDOS LIBRES DE PEQUEÑA LONGITUD DE CADENA, SIENDO NECESARIO PARA LA SEPARACION Y DETERMINACION DE ESTOS ULTIMOS, EFECTUAR LA CROMATOGRAFIA EN CONDICIONES DISTINTAS DE LAS QUE SE DESCRIBEN EN ESTA NORMA.

LAS CONDICIONES QUE SE ESPECIFICAN NO SON ADECUADAS PARA LA DETERMINACION DE ACIDOS GRASOS OXIDADOS Y EPOXIACIDOS, POR LO QUE LA PRESENCIA DE ESTOS ACIDOS DIFICULTA LA OPERACION, PUDIENDO LLEGAR A FALSEAR COMPLETAMENTE LOS RESULTADOS.

41.2. PREPARACION DE LOS ESTERES METILICOS.

41.2.1. MATERIAL NECESARIO.

41.2.1.1. MATRAZ REDONDO, FONDO PLANO, DE UNOS 50 ML. DE CAPACIDAD, CON BOCA ESMERILADA.

41.2.1.2. REFRIGERANTE DE AGUA ADAPTABLE AL MATRAZ ANTERIOR, PARA SU UTILIZACION COMO REFRIGERANTE DE REFLUJO.

41.2.1.3. AMPOLLA DE DECANTACION DE UNOS 500 ML. DE CAPACIDAD.

41.2.1.4. MATRAZ REDONDO, FONDO PLANO, DE UNOS 100 ML. DE CAPACIDAD.

41.2.1.5. MATRAZ, FONDO PLANO, DE UNOS 50 ML. DE CAPACIDAD, BOCA ESMERILADA, CUELLO DE 40 A 50 MM. DE LONGITUD Y 10 MILIMETROS DIAMETRO EXTERIOR.

41.2.2. REACTIVOS NECESARIOS.

41.2.2.1. METANOL ABSOLUTO (99,8 POR 100), CALIDAD REACTIVO PARA ANALISIS.

41.2.2.2. SODIO METALICO REACTIVO PARA ANALISIS.

41.2.2.3. DISOLUCION DE METILATO SODICO. SE DISUELVEN 5 G. DE SODIO METAL EN 1.000 ML. DE METANOL ABSOLUTO (0,2 N APROXIMADAMENTE).

41.2.2.4. ETER DE PETROLEO (P.E. 40 60 GRADOS C) O HEXANO DE CALIDAD ADECUADA PARA CROMATOGRAFIA.

41.2.2.5. DISOLUCION EN METANOL ABSOLUTO, DE ACIDO CLORHIDRICO ANHIDRO AL 3-4 POR 100. SE PUEDE OBTENER FACILMENTE EL ACIDO CLORHIDRICO GASEOSO HACIENDO CAER LENTAMENTE, EN APARATO ADECUADO, ACIDO SULFURICO (D=1,84), SOBRE UNA DISOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO (D=1,16); SE SECA EL GAS HACIENDOLO PASAR POR UN FRASCO LAVADOR CON ACIDO SULFURICO Y SE HACE LLEGAR AL METANOL ANHIDRO, CONTENIDO EN UN ERLENMEYER.

PESANDO EL ERLENMEYER CON EL METANOL AL COMIENZO DE LA OPERACION, POR PESADAS SUCESIVAS, SE DETERMINA LA CANTIDAD DISUELTA DE CLORHIDRICO, PROLONGADO LA OPERACION HASTA ALCANZAR UNA CONCENTRACION SUPERIOR A LA DESEADA. SE ADICIONA LA CANTIDAD DE METANOL PARA LOGRAR LA CONCENTRACION DEL 3-4 POR 100 (P/P).

41.2.2.6. CLORURO SODICO.

41.2.2.7. SULFATO SODICO ANHIDRO, CALIDAD REACTIVO PARA ANALISIS.

41.2.2.8. DISOLUCION DE FENOLFTALEINA AL 1 POR 100 EN METANOL.

41.2.2.9. DISOLUCION DE ROJO DE METILO AL 0,1 POR 100 EN METANOL AL 60 POR 100 (V/V).

41.2.2.10. GAS NITROGENO PURO, CON UN CONTENIDO MINIMO DEL 99,8 POR 100.

41.2.3. PROCEDIMIENTO OPERATORIO.

41.2.3.1. PREPARACION DE LOS ESTERES METILICOS.- LOS ESTERES METILICOS DE LOS ACIDOS GRASOS PUEDEN SER PREPARADOS POR INTERESTERIFICACION DIRECTA DE LA GRASA, SIGUIENDO EL METODO QUE SE DETALLA EN EL PARRAFO SIGUIENTE, EL CUAL TIENE UN CARACTER GENERAL, APLICABLE A UNA GRASA, CUALQUIERA QUE SEA SU ACIDEZ LIBRE Y SIEMRPE QUE NO TENGA UN CONTENIDO DE MATERIA INSAPONIFICABLE SUPERIOR AL 2 POR 100, COMO ES EL CASO DE LA INMENSA MAYORIA DE LAS MATERIAS GRASAS CORRIENTES.

PESAR 0,3 G. DE GRASA PERFECTAMENTE HOMOGENEIZADA EN EL MATRAZ DE 50 ML. (VER NOTA 41.5.1), Y SE AGREGAN 6 ML. DE LA DISOLUCION DE METILATO SODICO. SE COLOCA EL REFRIGERANTE AL MATRAZ, SE HIERVE HASTA OBTENCION DE UNA SOLA FASE Y, COMO MINIMO, 5 MIN. SE INTERRUMPE LA CALEFACCION.

SE AGREGAN AL MATRAZ 6 ML. DE LA DISOLUCION DE CLORHIDRICO EN METANOL Y SE VUELVE A CALENTAR, MANTENIENDO EN EBULLICION DURANTE 5 MIN. SE ENFRIA Y SE PROCEDE SEGUN SE INDICA EN EL APARTADO 41.2.3.2 (VER 41.5.3).

41.2.3.1.1. EN EL CASO DE MATERIAS GRASAS CON UNA ACIDEZ LIBRE NO SUPERIOR AL 0,3 POR 100, COMO SUCEDE NORMALMENTE EN ACEITES REFINADOS, SE PUEDE SIMPLIFICAR EL PROCEDIMIENTO OMITIENDO LA METANOLISIS EN MEDIO ACIDO. SE REALIZA LA METANOLISIS SEGUN SE INDICA EN EL APARTADO 41.2.3.1, Y, ESTANDO TODAVIA CALIENTE EL MATRAZ, SE AGREGA, POR LA PARTE SUPERIOR DEL REFRIGERANTE, UNA GOTA DE DISOLUCION INDICADORA DE FENOLFTALEINA Y, SEGUIDAMENTE, DISOLUCION DE CLORHIDRICO EN METANOL, EN UNA CUANTIA ALGO SUPERIOR A LA NECESARIA PARA NEUTRALIZAR EL METILATO, ACUSADO POR EL VIRAJE DE LA FENOLFTALEINA. SE DEJA ENFRIAR, PASANDOSE LA DISOLUCION CONTENIDA EN EL MATRAZ A LA AMPOLLA DE EXTRACCION, SIGUIENDOSE SEGUN SE INDICA EN EL APARTADO 41.2.3.2.

41.2.3.1.2. SI SE TRATA DE ACIDOS GRASOS LIBRES O MATERIAS GRASAS DE FUERTE ACIDEZ (80 POR 100 EN ACIDO OLEICO), SE PODRA OMITIR LA METANOLISIS ALCALINA, REDUCIENDO LA OPERACION A LA METANOLISIS EN MEDIO ACIDO. PARA ELLO, SE PESA, EN EL MATRAZ EN QUE SE VAYA A REALIZAR LA OPERACION 0,3 G. DE MUESTRA, PREVIAMENTE FILTRADA Y SECA. SE AGREGAN 6 ML. DE LA DISOLUCION DE CLORHIDRICO EN METANO, PROCEDIENDO COMO SE SEÑALA EN EL APARTADO 41.2.3.2.

41.2.3.1.3. EN EL CASO DE QUE SEA NECESARIO LA ELIMINACION PREVIA DE LA MATERIA INSAPONIFICABLE, SE PROCEDE SEGUN SE INDICA EN EL METODO 22 (A) "INSAPONIFICABLE. METODO ETER DE PETROLEO". LA DISOLUCION HIDROALCOHOLICA DE JABON SE CONCENTRA AL VACIO, PREFERIBLEMENTE EN EVAPORADOR ROTATORIO O BAJO CORRIENTE DE HIDROGENO, SI NO SE DISPUESIESE DE ESTE APARATO, HASTA ALCANZAR UNOS 50 ML APROXIMADAMENTE; SE PASA EL CONCENTRADO A UNA AMPOLLA DE EXTRACCION, ACIDIFICANDO CON ACIDO CLORHIDRICO 2 N HASTA REACCION ACIDA AL ROJO DE METILO. SE EXTRAE CON ETER DE PETROLEO O HEXANO, PROCEDIENDOSE DE FORMA ANALOGA A COMO SE INDICA EN EL APARTADO 41.2.3.1.2. PARA LA PREPARACION DE LOS ESTERES METILICOS.

41.2.3.2. EXTRACCION DE LOS ESTERES METILICOS.- PARA LA EXTRACCION DE LOS ESTERES METILICOS SE PROCEDE SEGUN UNO DE LOS METODOS QUE SE DESCRIBEN A CONTINUACION. EN LOS ANALISIS QUE INTERESE MUCHO LA RAPIDEZ Y SE OPERE CON ACEITES Y GRASAS DE TIPO NORMAL, ES PREFERIBLE EL METODO A). ESTE METODO TIENE, ADEMAS, LA VENTAJA DE NO EXIGIR LA EVAPORACION DEL DISOLVENTE Y, POR TANTO, SE DISMINUYE EL RIESGO DE PERDIDA DE ACIDOS GRASOS DE BAJO PESO MOLECULAR, CUANDO EXISTEN EN EL PROBLEMA. EL METODO B) ES UN PROCEDIMIENTO MAS SEGURO DE RECUPERACION CUANTITATIVA DE LOS ACIDOS GRASOS Y DEBE SER UTILIZADO COMO METODO DE REFERENCIA EN LOS LIMITES DE APLICACION DE ESTA NORMA. OPERANDO DE LA FORMA QUE SE INDICA EN EL APARTADO 41.2.3.2.2, HAY RIESGO DE PERDIDA DE ACIDOS GRASOS CON LONGITUD DE CADENA INFERIOR A C12.

41.2.3.2.1. METODO A).- SE PASA LA DISOLUCION CONTENIDA EN EL MATRAZ A OTRO DE UNOS 50 ML. DE CAPACIDAD, CON CUELLO ESTRECHO Y LARGO (41.2.1.5), ENJUAGANDO CON UNOS 6-8 ML. DE HEXANO O HEPTANO DE PUREZA ADECUADA PARA CROMATOGRAFIA GASEOSA, QUE SE VIERTEN TAMBIEN AL MATRAZ, CALENTANDOSE SUAVEMENTE SIN LLEGAR A HERVIR, MIENTRAS SE AGITA DANDO UN MOVIMIENTO DE ROTACION AL MATRAZ, DURANTE UNO O DOS MINUTOS. A CONTINUACION SE AGREGA DISOLUCION ACUOSA SATURADA DE CLORURO SODICO EN CANTIDAD SUFICIENTE PARA SITUAR LA CAPA DE HEXANO O HEPTANO EN EL CUELLO DEL MATRAZ. ESTA DISOLUCION, QUE CONTIENE LOS ESTERES METILICOS, DEBE ESTAR LIMPIA Y TRANSPARENTE, TOMANDOSE CON UNA PIPETA 2 O 3 ML., QUE SE PASAN A UN FRASQUITO O A UNA AMPOLLA PARA SU CONSERVACION, PUDIENDOSE INYECTAR DIRECTAMENTE ESTA DISOLUCION EN EL CROMATOGRAFO.

SI LA METILACION SE HUBIERA EFECTUADO EN ESTE MATRAZ, NO HARA FALTA EL TRANSVASE, ADICIONANDOSE DIRECTAMENTE 6-8 ML DE HEXANO O HEPTANO Y LA DISOLUCION DEL CLORURO SODICO.

41.2.3.2.2. METODO B).- SE PASA LA DISOLUCION CONTENIDA EN EL MATRAZ A UNA AMPOLLA DE EXTRACCION DE 500 ML, ENJUAGANDO CON UNOS 20 ML. DE ETER DE PETROLEO O HEXANO Y AÑADIENDO, A CONTINUACION, EN LA AMPOLLA 100 ML. DE AGUA DESTILADA. SE AGITA ENERGICAMENTE Y SE DEJA REPOSAR. SE DECANTA LA CAPA INFERIOR, QUE SE PASA A OTRA AMPOLLA DE EXTRACCION Y SE VUELVE A EXTRAER CON OTROS 20 ML DE ETER O HEXANO, REPITIENDOSE LA OPERACION UNA VEZ MAS. LOS TRES EXTRACTOS SE REUNEN EN UNA AMPOLLA DE EXTRACCION, Y SE LAVAN CON PORCIONES SUCESIVAS DE 10 ML. DE AGUA DESTILADA, HASTA ELIMINACION COMPLETA DEL ACIDO, ACUSADO CON LA DISOLUCION INDICADORA DE ROJO DE METILO. SE SECA LA DISOLUCION CON SULFATO SODICO ANHIDRO Y SE ELIMINA EL DISOLVENTE EN EL MATRAZ DE 100 ML, CALENTANDO EN UN BAÑO DE AGUA BAJO CORRIENTE DE NITROGENO. ESTA OPERACION SE DEBE REALIZAR, PREFERIBLEMENTE, EN UN EVAPORADOR ROTATORIO DE VACIO.

41.2.3.3. CONSERVACION DE LA DISOLUCION DE ESTERES METILICOS.

LOS ESTERES METILICOS OBTENIDOS POR UNO U OTRO PROCEDIMIENTO DEBEN SER UTILIZADOS EN EL ANALISIS TAN PRONTO COMO SEA POSIBLE.

PUEDEN CONSERVARSE DURANTE 24 HORAS EN UN FRASCO BIEN TAPADO; DESALOJANDO PREVIAMENTE EL AIRE CON NITROGENO Y GUARDANDO A BAJA TEMPERATURA. PARA ALMACENAMIENTO DURANTE PERIODOS DE TIEMPO MAS LARGOS ES NECESARIO CONSERVAR EN AMPOLLA CERRADA A LA LAMPARA, DE LA CUAL SE HA DESALOJADO PREVIAMENTE, EL AIRE CON UNA CORRIENTE DE NITROGENO. LA ELIMINACION DEL AIRE SE HACE BARBOTANDO EL NITROGENO EN LA DISOLUCION DE HEXANO.

41.3. PROCEDIMIENTO CROMATOGRAFICO.

41.3.1. MATERIAL NECESARIO.

41.3.1.1. CROMATOGRAFO.- UN CROMATOGRAFO APTO PARA LA SEPARACION DE LOS ESTERES METILICOS DE ACIDOS GRASOS, QUE DISPONGA DE UN HORNO CAPAZ DE SER CALENTADO A TEMPERATURA REGULADA HASTA 250-300 GRAD. C, SUPERIOR A LA TEMPERATURA DEL HORNO; UN SISTEMA DE DETECCION SENSIBLE, Y UN APARATO REGISTRADOR CONTINUO.

41.3.1.2. TUBO DE NITROGENO.- UN TUBO DE NITROGENO A PRESION, UTILIZABLE COMO GAS PORTADOR, DEBIENDO TENER UNA RIQUEZA MINIMA DEL 99,8 POR 100.

41.3.1.3. JERINGA.- UNA JERINGA PARA LA INYECCION DE LA MUESTRA, CON UNA CAPACIDAD DE 5 O 10 ul.

41.3.1.4. AIRE SECO Y PURO.

41.3.1.5. HIDROGENO CON UNA RIQUEZA MINIMA DEL 99,9 POR 100 Y SECO.

41.3.1.6. COLUMNA.

41.3.1.6.1. COLUMNA DE ACERO INOXIDABLE, ALUMINIO, O VIDRIO DE 2-4 MM. DE DIAMETRO INTERIOR Y 2 M. DE LONGITUD RELLENA DE CHROMOSORB G O W (80-100 MALLAS) CALITE 545 (80-100 MALLAS) O CUALQUIER OTRA COLUMNA QUE CUMPLA LAS CONDICIONES ESPECIFICADAS EN EL APARTADO 41.4.2.

41.3.1.6.2. PREPARACION DE LA COLUMNA.

41.3.1.6.2.1. PREPARACION DEL SOPORTE.- PARA LOS FINES PROPUESTOS EN ESTA NORMA SON RECOMENDABLES COMO SOPORTES EL CHROMOSORB G O W DE 80-100 MALLAS, AUNQUE SIN EXCLUIR LA POSIBILIDAD DE QUE PUEDAN SER UTILIZADOS OTROS PRODUCTOS ANALOGOS E EFICACIA COMPROBADA, QUE PUEDAN COMPORTARSE DE FORMA ANALOGA O, INCLUSO, SUPERIOR A LOS RECOMENDADOS.

EL SOPORTE ELEGIDO DEBERA HABER SIDO LAVADO CON ACIDO Y SOMETIDO A UN TRATAMIENTO DE SILANIZACION.

PARA CONSEGUIR UN COMPORTAMIENTO OPTIMO DE LA COLUMNA ES IMPORTANTE QUE EL RELLENO TENGA LA MAYOR HOMOGENEIDAD POSIBLE, SIENDO NECESARIO PARA ELLO QUE EL GRANEADO DEL SOPORTE SEA UNIFORME. EN CASO DE DUDA, DEBE PROCEDERSE A UN TAMIZADO DEL PRODUCTO LAVADO CON ACIDO Y SILANIZADO, SUMINISTRADO POR LA CASA FABRICANTE, RECOGIENDO UNICAMENTE LA PORCION QUE PASA POR EL TAMIZ 80 Y ES RETENIDO POR EL 100 DESECHANDO LOS GRUESOS Y FINOS (VER 41.5.3).

41.3.1.6.2.2. IMPREGNACION DEL SOPORTE.- SE PASA LA CANTIDAD DE SOPORTE QUE SE DESEE, INTRODUCIENDOLO EN UNA MATRAZ DE 100 A 200 ML. DE CAPACIDAD, AGREGANDO LA CANTIDAD NECESARIA DE CLORURO DE METILENO PARA CONSEGUIR UNA PAPILLA FLUIDA. SE HACE EL VACIO EN EL MATRAZ HASTA QUE CESE EL DESPRENDIMIENTO DEL AIRE OCLUIDO EN EL SOPORTE. A CONTINUACION SE AGREGA LA CANTIDAD DE FASE FIJA CORRESPONDIENTE AL 2,5 POR 100 DEL PESO DEL SOPORTE UTILIZADO, DISUELTA EN EL VOLUMEN NECESARIO DE CLORURO DE METILENO. SE HOMOGENIZA LA MEZCLA, HACIENDO NUEVAMENTE EL VACIO Y MANTENIENDOLO DURANTE 10-15 MINUTOS. TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO, SE TAPA EL MATRAZ, DEJANDOLO EN REPOSO DURANTE UNAS 10-12 HORAS.

SEGUIDAMENTE SE ELIMINA EL DISOLVENTE EN EVAPORADOR ROTATORIO, CON VACIO. UNA VEZ SECO EL RELLENO, SE INTRODUCE EL MATRAZ EN UNA ESTUFA CALENTADA A UNOS 150 GRADOS C, MANTENIENDOLO ASI DURANTE 4-6 HORAS.

TERMINADA ESTA OPERACION, EL RELLENO QUEDA LISTO PARA SU INTRODUCCION ENLA COLUMNA Y ACONDICIONAMIENTO, TAL COMO SE DESCRIBE EN LOS APARTADOS SIGUIENTES:

41.3.1.6.2.3. LLENADO DE LA COLUMNA.- INTRODUCIR EL SOPORTE IMPREGNADO CON FASE FIJA EN LA COLUMNA, HACIENDO VACIO POR UN EXTREMO Y VIBRANDOLA SUAVEMENTE POR PERCUSION O CON UN VIBRADOR MAGNETICO, HASTA SU LLENADO TOTAL. ES PRECISO QUE EL MATERIAL RELLENE LA COLUMNA HOMOGENEAMENTE, EVITANDO UN EMPAQUETAMIENTO HETEROGENEO QUE LE HARIA PERDER EFICACIA. OBTURAR LOS EXTREMOS CON TAPON DE LANA DE VIDRIO Y/O CILINDROS DE MALLAS METALICAS DE COBRE O ACERO INOXIDABLE.

41.3.1.6.2.4. ANTES DE EMPLEAR UNA COLUMNA NUEVA EN LA RESOLUCION DE PROBLEMAS ANALITICOS, DEBE SER ACONDICIONADA, MONTANDOLA EN EL CROMATOGRAFO DESCONECTADA DEL DETECTOR Y CALENTANDO A UNOS 10. POR ENCIMA DE LA TEMPERATURA MAXIMA A QUE VAYA A SER UTILIZADA; HACIENDO PASAR, AL MISMO TIEMPO, UNA CORRIENTE DE NITROGENO, QUE SE MANTIENE DURANTE VEINTICUATRO HORAS COMO MINIMO. LA COLUMNA ES APTA PARA SU UTILIZACION, SI LA LINEA BASE DIBUJADA POR EL REGISTRADOR ACUSA LA ESTABILIDAD DEL SISTEMA.

41.3.2. CONDICIONES OPERATORIAS.

41.3.2.1. SE AJUSTA EL FLUJO DEL GAS PORTADOR (NITROGENO), QUE DEBE SER EL ADECUADO PARA PERMITIR LA ELUCCION DEL LINOLENATO DE METILO EN UN TIEMPO MINIMO DE VEINTICINCO MINUTOS. LA PRESION DE ENTRADA Y EL FLUJO NECESARIO PARA CONSEGUIRLO VARIA SEGUN LA COLUMNA Y EL INSTRUMENTO UTILIZADO, PERO ES RELATIVAMENTE CONSTANTE PARA UN APARATO Y COLUMNA DETERMINADA. ES NECESARIO MANTENER UN FLUJO CONSTANTE DURANTE TODO EL ANALISIS. EL FLUJO GASEOSO SE MIDE CON UN MEDIDOR DE BURBUJA DE JABON Y OTRO DISPOSITIVO ADECUADO.

SE PONE EN MARCHA LA CALEFACCION DEL HORNO DE LA CAMARA DE INYECCION Y DEL DETECTOR. EL HORNO SE REGULA A UNA TEMPERATURA APROXIMADA DE 160-170 GRADOS C; LA CAMARA DE INYECCION, A UNA TEMPERATURA DE 50 GRADOS C SUPERIOR A LA TEMPERATURA DE LA COLUMNA, Y EL DETECTOR, A 25 GRADOS C POR ENCIMA DE LA TEMPERATURA DE LA COLUMNA.

EL DETECTOR, A 25 GRADOS C POR ENCIMA DE LA LAS CONDICIONES DE TRABAJO INDICADAS ANTERIORMENTE DEBEN CONSIDERARSE COMO ORIENTACION, YA QUE LA IMPOSIBILIDAD PRACTICA DE CONSEGUIR EL MISMO COMPORTAMIENTO EN COLUMNAS DIFERENTES Y LAS VARIACIONES QUE PRESENTAN EN SUS CARACTERISTICAS Y CONDICIONES OPERATIVAS LOS DIVERSOS APARATOS QUE SE ENCUENTRAN EN EL COMERCIO, HACE IMPOSIBLE FIJAR, A PRIORI, UNAS CONDICIONES INVARIABLES DE TRABAJO, APLICABLES A TODOS LOS CASOS Y EN TODAS LAS CIRCUNSTANCIAS.

LAS CONDICIONES OPERATIVAS MAS ADECUADAS DEBEN SER ESTABLECIDAS POR CADA OPERADOR, A LA VISTA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CON MEZCLAS PATRONES DE ESTERES METILICOS, SIGUIENDO LAS INSTRUCCIONES QUE SE DAN EN EL APARTADO 41.3.3. PARA TODOS LOS DEMAS DETALLES OPERATIVOS NO MENCIONADOS EN ESTA NORMA, SE DEBEN SEGUIR LAS INSTRUCCIONES DADAS POR LA CASA FABRICANTE DEL APARATO.

SE PREPARA UNA DISOLUCION DE LOS ESTERES METILICOS CON ACETONA O HEXANO, CUYA PUREZA HAYA SIDO PREVIAMENTE COMPROBADA Y, UTILIZANDO LA JERINGA, SE INYECTAN 0,4-0,6 ul. Y SE RETIRA RAPIDAMENTE LA AGUJA.

EL REGISTRO OBTENIDO DEBE SATISFACER LAS CONDICIONES QUE SE INDICAN A CONTINUACION; CASO CONTRARIO, SE REPITE LA INYECCION HASTA OBTENER UN CROMATOGRAMA SATISFACTORIO.

LOS REQUISITOS EXIGIBLES SON LOS SIGUIENTES:

A) EL AREA TOTAL DESCRITA EN CROMATOGRAMA, REFERIDA A LA SENSIBILIDAD MAXIMA UTILIZADA EN EL CURSO DE LA OPERACION, DEBE SER DE UN ORDEN APROXIMADO DE 2.000 MM, CUADRADOS, CON UNA VELOCIDAD DEL PAPEL, EN EL REGISTRADOR, DE 5 MM/MIN. DE ESTA FORMA, LOS COMPONENTES PRESENTES, EN UNA CUANTIA DEL 0,1 POR 100, DEBEN DAR UN PICO COMO MINIMO, DE 2 MM CUADRADOS, SIENDO, POR TANTO, PERFECTAMENTE RECONOCIBLES.

B) CON EL FIN DE CONSEGUIR QUE TODOS LOS PICOS CAIGAN DENTRO DEL PAPEL REGISTRADOR, SE UTILIZARA, EN CADA CASO, LA ATENUACION DE SENSIBILIDAD QUE SEA NECESARIA.

UNA VEZ CONSEGUIDO UN REGISTRO SATISFACTORIO, Y HABIENDO ALCANZADO NUEVAMENTE LA PLUMA LA LINEA BASE, SE INTERRUMPE EL FUNCIONAMIENTO DEL REGISTRADOR Y SE RETIRA EL PAPEL CON EL REGISTRO PARA LA IDENTIFICACION DE LOS PICOS CUANTITATIVOS.

41.3.3. IDENTIFICACION DE LOS PICOS.

41.3.3.1. CRITERIO BASADO EN LOS TIEMPOS DE RETENCION.- REFIRIENDONOS EXCLUSIVAMETE A LOS ACIDOS QUE ENTRAN NORMALMENTE EN LA COMPOSICION DE LAS GRASAS NATURALES, SUS ESTERES APARECEN EN EL CROMATOGRAMA EN ORDEN CRECIENTE DE SUS ATOMOS DE CARBONO Y A SU INSATURACION. ESTO ES, EL PALMITICO (C16) APARECE DELANTE DEL ESTEARICO (C18), Y LOS ESTERES EN C18 APARECEN EN ORDEN ESTEARATO, OLEATO, LINOLENATO. EL ESTER DEL ACIDO ARAQUICO (C20:0), USUALMENTE, APARECE ANTES DEL LINOLENICO (C18:3) PERO PUEDE OCURRIR LO CONTRARIO, EN ALGUNOS CASOS, DEPENDIENDO DEL TIPO DE COLUMNA Y DE LAS CONDICIONES DE SU UTILIZACION; O INCLUSO, SUPERPONERSE EL UNO AL OTRO.

OPERANDO EN CONDICIONES CONSTANTES, LOS TIEMPOS DE RETENCION SON REPRODUCIBLES EN CADA ESPECIE QUIMICA, SIENDO EL CRITERIO MAS FRECUENTE EMPLEADO PARA SU IDENTIFICACION.

EL TIEMPO DE RETENCION VIENE DADO POR LA DISTANCIA, MEDIDA EN EL CROMATOGRAMA, ENTRE EL MAXIMO DEL PICO DEL AIRE Y LA POSICION DEL MAXIMO DE LA BANDA. TRABAJANDO CON EL DETECTOR DE LLAMA DE HIDROGENO, LA SALIDA DEL AIRE NO SE DETECTA, PUDIENDOSE TOMAR, EN ESTE CASO, EL MOMENTO EN QUE SE INICIA LA SALIDA DEL DISOLVENTE, ACUSADA POR UNA FUERTE DESVIACION DE LA PLUMA DEL REGISTRADOR.

41.3.3.2. CRITERIO BASADO EN LOS TIEMPOS DE RETENCION RELATIVOS.- LOS TIEMPOS DE RETENCION RELATIVOS SON MAS REPRODUCIBLES. LAS RETENCIONES RELATIVAS VIENEN DETERMINADAS POR EL COCIENTE DE DIVIDIR EL TIEMPO DE RETENCION DE CADA PICO POR EL TIEMPO REGISTRADO PARA EL PICO DEL PALMITATO DE METILO. O BIEN POR OTRO ESTER QUE SE TOME COMO COMPROBACION, DETERMINADOS TODOS ELLOS SEGUN EL CRITERIO EXPUESTO EN EL APARTADO 41.3.3.1.

41.3.3.3. COMO EL COMPORTAMIENTO DE LA COLUMNA CAMBIA COMO CONSECUENCIA DE FACTORES MUY DIVERSOS, Y DURANTE SU UTILIZACION CONTINUADA EXPERIMENTA UN PROCESO DE ENVEJECIMIENTO QUE ALTERA SU CAPACIDAD DE RETENCION, ES CONVENIENTE COMPROBAR, PERIODICAMENTE, LA POSICION DE LOS DISTINTOS ESTERES EN EL CROMATOGRAMA, UTILIZANDO MEZCLAS PATRONES CONVENIENTEMENTE PREPARADAS, O BIEN ESTERES METILICOS DE UNA GRASA PREVIAMENTE ANALIZADA Y CONOCIDA. ESTO CONSTITUYE UNA DE LAS OPERACIONES DE COMPROBACION A QUE SE HACE REFERENCIA EN EL CAPITULO 41.4.

41.3.4. DETERMINACION CUANTITATIVA.

LA DETERMINACION CUANTITATIVA SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LOS PESOS DE CADA UNO DE LOS COMPONENETES SEPARADOS EN LA MEZCLA SON PROPORCIONALES A LAS AREAS COMPRENDIDAS DENTRO DE LOS TRIANGULOS DIBUJADOS DEBAJO DE CADA PICO. EL AREA DE CADA TRIANGULO SE OBTIENE TRAZANDO RECTAS TANGENTES A LOS PUNTOS DE INFLEXION DE CADA PICO, PROLONGANDOLAS HASTA SU INTERSECCION CON LA LINEA BASE Y MULTIPLICANDO LA ALTURA DEL TRIANGULO POR LA MITAD DE LA BASE. EN EL CASO DE HABER TRABAJADO CON ATENUACIONES DIFERENTES PARA CADA PICO, SE REFERIRAN TODAS LAS MEDIDAS A UNA MISMA SENSIBILIDAD DEL REGISTRADOR, MULTIPLICANDO LA ALTURA POR EL FACTOR DE ATENUACION CORRESPONDIENTE EN CADA CASO, Y EL VALOR DE LA ALTURA ASI CORREGIDA, POR LA MITAD DE LA BASE. SI NO ES NECESARIO EFECTUAR CORRECCION EN RELACION AL CAMBIO DE ATENUACION, COMO OCURRE EN LA MAYOR PARTE DE LOS ANALISIS DE RUTINA EN QUE SE TRABAJA CON UNA SOLA ATENUACION, LA MEDIDA DEL AREA SE REALIZA MAS COMODAMENTE MULTIPLICANDO LA ALTURA DEL PICO POR EL ANCHO A LA MITAD DE LA ALTURA. EL CONTENIDO DE CADA ACIDO EN LA MUESTRA VIENE DADO POR LA EXPRESION

(FORMULA OMITIDA)

41.4. OPERACIONES DE COMPROBACION.

41.4.1. REACTIVOS NECESARIOS:

LAURATO DE METILO.

PALMITATO DE METILO.

ESTEARATO DE METILO.

OLEATO DE METILO.

LINOLEATO DE METILO.

ESTOS CARACTERES METILICOS HAN DE SER PUROS, COMPROBADA SU PUREZA POR CROMATOGRAFIA GASEOSA, Y CONSERVADOS EN CONDICIONES QUE GARANTICEN SU INALTERABILIDAD Y COMERCIALES COMO SE INDICA EN 41.2.3.3.

41.4.2. PRUEBA DE COMPORTAMIENTO DEL INSTRUMENTO Y DE LA COLUMNA.

SE RALIZA DETERMINANDO LA RESOLUCION DE DOS PRODUCTOS CRITICOS, COMO SON EL OLEATO Y EL ESTEARATO DE METILO. LA RESOLUCION VIENE DETERMINADA POR LA EXPRESION

(FORMULA OMITIDA)

ESTOS VALORES DETERMINAN SOBRE EL CROMATOGRAMA OBTENIDO CON UNA MUESTRA QUE CONTENGA CANTIDADES APROXIMADAMENTE IGUALES DE ESTEARATO Y OLEATO DE METILO, INYECTANDO UNA CANTIDAD TAL QUE LA ALTURA DE ESTOS PICOS ALCANCE AL 25-50 POR 100 DEL ANCHO DEL PAPEL DE REGISTRO.

SI LA RESOLUCION CALCULADA ES IGUAL O MAYOR QUE 1,0, LA COLUMNA Y EL INSTRUMENTO SE ENCUENTRAN EN CONDICIONES SATISFACTORIAS. TODAS LAS COLUMNAS EN EL TRANSCURSO DE SU UTILIZACION, SUFREN UNA PERDIDA GRADUAL EN LA RESOLUCION DE LOS PICOS; CUANDO EL VALOR LLEGUE A SER INFERIOR A 1,0, DEBE INSTALARSE UNA NUEVA COLUMNA.

41.4.3. SITUACION DE LOS ESTERES EN EL CROMATOGRAMA.

UTILIZANDO LOS PRODUCTOS PATRONES A QUE SE HACE REFERENCIA EN EL APARTADO 41.4.1., SE PREPARA UNA MEZCLA QUE CONTENGA, PREFERIBLEMENTE, CANTIDADES DE UN ORDEN APROXIMADO AL EXISTENTE EN LA GRASA O GRASAS QUE SE TRATA DE ANALIZAR. SE REGISTRA EL CROMATOGRAMA DE LA FORMA USUAL, DETERMINANDO LOS TIEMPOS DE RETENCION ABSOLUTOS O RELATIVOS PARA CADA UNA DE LAS ESPECIES CONTENIDAS EN LA MEZCLA.

EN EL CASO DE TENER QUE IDENTIFICAR EN EL PROBLEMA ALGUN PICO QUE NO COINCIDE CON LOS ESTERES CONTENIDOS EN LA MEZCLA PATRON, ES DE SUMA UTILIDAD EFECTUAR, A APARTIR DE LOS DATOS OBTENIDOS CON LA MEZCLA PATRON, LA REPRESENTACION GRAFICA DE LA FUNCION QUE RELACIONA LOS LOGARITMOS DE LOS TIEMPOS DE RETENCION, CON EL NUMERO DE ATOMOS DE CARBONO DE CADA ACIDO; PARA LOS TERMINOS COMPRENDIDOS EN UNA MISMA SERIE HOMOLOGA, ESTA FUNCION ES LINEAL; POR TANTO, LOS TIEMPOS DE RETENCION DE LOS TERMINOS DE LA SERIE DE LOS QUE NO SE DISPONGA DE MUESTRA PATRON PUEDEN CALCULARSE POR INTERPOLACION O VICEVERSA.

41.4.4. CALIBRADO PARA APLICACION CUANTITATIVA.

UTILIZANDO LOS PRODUCTOS PATRONES A QUE SE HACE REFERENCIA EN EL APARTADO 41.4.1., SE PREPARA UNA MEZCLA QUE CONTENGA CANTIDADES EXACTAMENTE PESADAS DE CADA UNO DE LOS ESTERES, DEBIENDO TENER UNA COMPOSICION ANALOGA A LA DE LA MUESTRA PROBLEMA. SE REGISTRA EL CROMATOGRAMA DE LA FORMA USUAL, EFECTUANDOSE LOS CALCULOS CUANTITATIVOS SEGUN SE INDICA EN EL APARTADO 41.3.4.

LOS RESULTADOS REDUCIDOS DEL CROMATOGRAMA COINCIDEN, NORMALMENTE, CON LOS VALORES REALES DE LA MEZCLA PATRON. SIN EMBARGO, EN ALGUNOS CASOS, DEBIDO A DIVERSAS CAUSAS, SE OBSERVAN DISCREPANCIAS QUE PUEDEN SER CORREGIDAS APLICANDO FACTORES DE CORRECCION. ESTOS FACTORES DE CORRECCION NO SON APLICABLES MAS QUE EN LA PARTE LINEAL DE LA CURVA DE RESPUESTA DEL DETECTOR PARA CADA CONSTITUYENTE. POR CONSIGUIENTE, EL OPERADOR DEBE SER EXTREMADAMENTE PRUDENTE EN LO QUE RESPECTA A LA APLICACION DE ESTOS FACTORES, YA QUE ELLOS PUEDEN VARIAR EN FUNCION DE LA COMPOSICION DE LA MEZCLA A ANALIZAR, MODIFICACIONES EN EL DETECTOR Y EN EL AMPLIFICADOR, ALTERACION DE LA FASE FIJA, ETC. SI LA CANTIDAD ENCONTRADA PARA UN ACIDO GRASO CUALQUIERA DE LA MEZCLA PATRON DISCREPA EN MAS DE UN 10 POR 100 DE LA CANTIDAD CALCULADA, ESTE INDICA QUE EL APARATO NO FUNCIONA CORRECTAMENTE, SIENDO NECESARIO BUSCAR LA CAUSA.

EL FACTOR CORRECCION PARA CADA ACIDO SE CALCULA CON RELACION AL ACIDO PALMITICO, UTILIZANDO MEZCLAS PATRONES CON UNA COMPOSICION ANALOGA A LA DE LA MUESTRA PROBLEMA QUE SE TRATA DE ANALIZAR. SE PROCEDE DE LA FORMA SIGUIENTE: SE DIVIDE EL PORCENTAJE DE CADA ACIDO POR EL AREA DEL PICO CORRESPONDIENTE Y EL COCIENTE POR EL VALOR OBTENIDO PARA EL ACIDO PALMITICO:

(FORMULA OMITIDA)

PARA APLICAR ESTOS FACTORES A LA MEZCLA PROBLEMA SE MULTIPLICAN POR LA RELACION ENTRE EL AREA DEL PICO CORREPONDIENTE AL ACIDO PALMITICO; SE OBTIENE, PROCEDIENDO DE ESTA FORMA, LA RELACION ENTRE EL CONTENIDO DE CADA ACIDO Y EL PALMITICO, TOMADO COMO UNIDAD.

(FORMULA OMITIDA)

SI ESTAN COMPRENDIDAS EN EL CROMATOGRAMA TODOS LOS ACIDOS COMPONENTES DE LA MEZCLA PROBLEMA, A APARTIR DE LAS RELACIONES CALCULADAS SE PUEDE PASAR FACILMENTE A LA COMPOSICION CENTESIMAL.

41.5. NOTAS.

41.5.1. EN EL CASO DE UTILIZARSE EL METODO DE EXTRACCION A) (APARTADO 41.2.3.2.1.), LA PESADA Y METILACION DE LA MUESTRA SE EFECTUARA MAS COMODAMENTE EN EL MATRAZ DE CUELLO LARGO, DESCRITO EN EL APARTADO 41.2.1.5. EFECTUANDOSE EN EL MISMO RECIPIENTE, SIN NECESIDAD DE TRANSVASE, LA ADICION DE LA DISOLUCION SATURADA DE CLORURO SODICO.

41.5.2.

EN EL CASO DE QUE TUVIESE DIFICULTAD EN LA PREPARACION DE LA DISOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO, SE PODRIA SUSTITUIR CON UNA DISOLUCION DEL 5-6 POR 100 (P/P) DE ACIDO SULFURICO (D=104) EN METANOL ANHIDRO UTILIZABLE TAMBIEN EN LAS OPERACIONES DESCRITAS EN LOS APARTADOS 41.2.3.1.1 Y 41.2.3.1.2.

41.5.3. LA DESIGNACION DE LOS TAMICES CORRESPONDE A LA NOMENCLATURA DEL SISTEMA U.S., REFERIDA A NUMERO DE MALLAS POR PULGADA LINEAL: DE ACUERDO CON LA NORMA UNE 7050, LOS TAMICES DE 80 Y 100 MALLAS/PULGADA LINEAL (SISTEMA U.S.) SERIAN DESIGNADOS RESPECTIVAMENTE TAMIZ 0.177 UNE 7050 Y TAMIZ 0.149 UNE 7050 SIENDO LAS CIFRAS INDICADAS LAS ABERTURAS DE MALLA, EXPRESADAS EN MILIMETROS.

41.6. REFERENCIAS.

UNE 55.037 MATERIAS GRASAS. DETERMINACION DE ACIDOS GRASOS POR CROMATOGRAFIA GASEOSA.

43. RECONOCIMIENTO DE ESTERES NO GLICERIDOS EN GRASAS COMESTIBLES POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

43.1. PRINCIPIO.

DISOLUCION DE LA MUESTRA EN HEXANO Y POSTERIOR SEPARACION DE LOS TRIGLICERIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.

ES APLICABLE A TODOS LOS ACEITES VIRGENES O REFINADOS, UTILIZABLES DIRECTAMENTE EN LA ALIMENTACION HUMANA.

EL METODO HA SIDO ESTUDIADO CON ESTERES DE ACIDOS GRASOS Y LOS ALCOHOLES SIGUIENTES: METANOL, 1,2 Y 1,3 PROPILENGLICOL Y ETILENGLICOL.

LOS LIMITES DETECTADOS, SEGUN ENSAYO COLABORATIVO EN EL QUE HAN INTERVENIDO CINCO LABORATORIOS, OSCILA ENTRE O,7 POR 100 (P/P) Y 1 POR 100 (P/P).

43.2. MATERIAL Y APARATOS.

43.2.1. EQUIPO DE CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA, COMPUESTO DE PLACAS DE GEL DE SILICE G Y UN ESPESOR DE CAPA DE 0,25 MM O DE 0,40 MM EN CASO DE SER NECESARIA UNA MAYOR RESOLUCION.

43.2.2. PLACA CALEFACTORA ADECUADA PARA QUEMAR PLACAS QUE PERMITA ALCANZAR TEMPERATURAS DE 360 GRADOS C.

43.2.3. MICROJERINGA DE 10 MICROLITROS.

43.3. REACTIVOS.

43.3.1. HEXANO PARA CROMATOGRAFIA (FORMULA OMITIDA)

43.3.2. ETER ETILICO (FORMULA OMITIDA)

43.3.3. LIQUIDO DE DESARROLLO.

MEZCLAR 92 VOLUMENES DE HEXANO Y 8 VOLUMENES DE ETER ETILICO.

43.3.4. ACIDO SULFURICO AL 50 POR 100.

43.4. PROCEDIMIENTO.

DEPOSITAR CON UNA JERINGA 2 A 3 MICROLITROS DE LA DISOLUCION DE LA MUESTRA EN HEXANO AL 10 POR 100, APROXIMADAMENTE, SOBRE LA PLACA DE CROMATOGRAFIA, A UNA DISTANCIA APROXIMADA DE 1 CM DEL BORDE INFERIOR DE LA CAPA DE SILICE.

INTRODUCIR EN LA CUBETA CONTENIDA EL LIQUIDO DE DESARROLLO HEXANO-ETER ETILICO, ESPERANDO HASTA QUE EL FRENTE DE DISOLVENTE SE SITUE A UNOS 3 CM, APROXIMADAMENTE, DEL BORDE SUPERIOR DE LA PLACA. SACAR LA PLACA DE LA CUBETA Y DEJAR SACAR EL AIRE, LO CUAL SE CONSIGUE EN UNOS MINUTOS. CON EL FIN DE FACILITAR EL RECONOCIMIENTO DE LOS ESTERES MAS DIFICILMENTE SEPARABLES, ESA RECOMENDABLE Y ES NECESARIO EN ALGUNOS CASOS EFECTUAR DOS O TRES DESARROLLOS. PARA ELLO, TERMINADO EL PRIMER DESARROLLO Y UNA VEZ SECA LA PLACA, VOLVER A INTRODUCIR EN LA CUBETA MANTENIENDOLA HASTA QUE EL FRENTE DEL DISOLVENTE SE HAYA SITUADO A LA MISMA ALTURA ANTERIOR. REPETIR EL PROCESO UNA VEZ MAS SI ES NECESARIO. EN LOS CASOS DE DUDA SOBRE EL RESULTADO POSITIVO DE LA PRUEBA, DEBERA REPETIRSE LA CROMATOGRAFIA, SOMETIENDO LA PLACA A DOS O TRES DESARROLLOS.

PULVERIZAR LA PLACA SECA CON UNA DISOLUCION DE ACIDO SULFURICO AL 50 POR 100 Y QUEMAR LA PLACA CALEFACTORA A UNOS 300 GRADOS C.

43.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

A UN TERCIO, APROXIMADAMENTE, DEL BORDE INFERIOR DE LA PLACA APARECE UNA MANCHA INTENSA CORRESPONDIENTE A LOS TRIGLICERIDOS. EN ACEITES PUROS NO APARECE POR ENCIMA NINGUNA OTRA MANCHA PROXIMA A LA DE LOS TRIGLICERIDOS, A EXCEPCION DE ALGUNOS COMPONENTES DEL INSAPONIFICABLE QUE MANCHAN CON EL FRENTE DEL DISOLVENTE. UNA MANCHA, MAS O MENOS INTENSA, SITUADA POR ENCIMA, PROXIMA A LA DE LOS TRIGLICERIDOS, ACUSA LA PRESENCIA DE ESTERES EXTRAÑOS AL GLICEROL. LA DISTANCIA RELATIVA ENTRE ESTAS DOS MANCHAS DEPENDE, LOGICAMENTE, DEL ALCOHOL DE QUE SE TRATE; LOS ESTERES DE MONOALCOHOLES, TALES COMO EL METILICO O ETILICO, SE SITUAN MAS DISTANCIADOS DE COMO LO HACEN LOS ESTERES DE DIALCHOLES, TALES COMO EL ETILENGLICOL O PROPILENGLICOL.

43.6. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO DE RACIONALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA 55.085.

44. TEMPERATURA DE INFLAMACION

44.1. PRINCIPIO.

INFLAMACION MOMENTANEA DE LOS VAPORES DESPRENDIDOS DE LA MATERIA GRASA EN ENSAYO, EN CONTACTO CON EL AIRE, OPERANDO EN CONDICIONES DETERMINADAS.

44.2. MATERIAL Y APARATOS.

44.2.1. APARATO DE PENSKY-MARTENS EN TAZA CERRADA (FIG.44.1.) QUE CONSTA DE LOS ELEMENTOS SIGUIENTES:

(FIGURA OMITIDA)

44.2.1.1. TAZA CILINDRICA DE TALON O BRONCE O ALEACION SIMILAR NO OXIDABLE Y DE CONDUCTIVIDAD TERMICA EQUIVALENTE (FIG.44.2). DEBERA IR PROVISTAS DE UNA PESTAÑA A TODO SU ALREDEDOR PARA SU EJECUCION EN EL BAÑO DE CALEFACCION, DEBIENDO, ADEMAS, FIJARSE EN UNA POSICION DETERMINADA, IMPIDIENDO TODO MOVIMIENTO GIRATORIO UNA VEZ SITUADA DENTRO DEL BAÑO. LLEVARA UNA MARCA A CIRCULAR ALREDEDOR DE LA PARED INTERIOR, A UNA ALTURA DE 34 MILIMETROS DEL FONDO, INDICANDO LA CANTIDAD QUE DEBE TOMARSE DEL ACEITE A ENSAYAR. EL VOLUMEN NECESARIO PARA EL ENSAYO, SEÑALADO POR ESTA MARCA ES DE 70 ML. LLEVARA TAMBIEN UN MANGO CON EL AISLAMIENTO CONVENIENTE, QUE PERMITA EL MANEJO COMODO DE LA TAZA PARA SU COLOCACION Y RETIRADA DEL BLOQUE.

(FIGURA OMITIDA)

44.2.1.2. TAPA (FIG.44.3).

LA TAZA IRA PROVISTA DE UNA TAPA, LA CUAL ENCAJARA EN LA PARTE SUPERIOR, ESTANDO PROVISTA DE CUATRO ORIFICIOS CUYA SITUACION Y DIMENSIONES SON LAS INDICADAS EN LA FIGURA.

(FIGURA OMITIDA)

44.2.1.3. OBTURADOR (FIG. 44.4).

ENCIMA DE LA TAPA LLEVA UNA LAMINA QUE PUEDE GIRAR SOBRE EL EJE CENTRAL DEL APARATO, PUDIENDO EFECTUARSE ESTE GIRO ACCIONANDO MANUALMENTE UN MECANISMO QUE PERMITA EL DESPLAZAMIENTO DE LA LAMINA ENTRE DOS POSICIONES EXTREMAS UNA, QUE PUEDE DENOMINARSE POSICION DE REPOSO, Y OTRA, POSICION DE ENCENDIDO. EL MECANISMO IRA PROVISTO DE UN MUELLE QUE MANTENGA EL OBTURADOR EN POSICION DE REPOSO, SIENDO NECESARIO ACTUAR EN SENTIDO CONTRARIO PARA PASARLO A LA POSICION DE ENCENDIDO; DE LA PRESION MANUAL, EL OBTURADOR DEBERA RECOBRAR AUTOMATICAMENTE LA POSICION INICIAL.

EN LA POSICION DE REPOSO, LAS TRES ABERTURAS A, B Y C DE LA TAPA PERMANECEN CERRADAS POR EL OBTURADOR; AL GIRAR LA TAPA, ACCIONANDO EL MECANISMO ALUDIDO, Y LLEVARLA A LA POSICION OPUESTA, SE ABRIRAN LAS TRES ABERTURAS, HACIENDO POSIBLE, AL MISMO TIEMPO, LOS MOVIMIENTOS QUE SE INDICAN EN LOS DOS APARTADOS SIGUIENTES REFERENTES AL MICROMECHERO DE ENCENDIDO Y A LA AGITACION.

(FIGURA OMITIDA)

44.2.1.4. MICROMECHERO DE ENCENDIDO (FIG. 44.4).

ESTA CONSTITUIDO POR UN PEQUEÑO TUBO, CON UN ORIFICIO DE SALIDA DE 0,5 MILIMETROS DE DIAMETRO, PROVISTO DE UNA VALVULA ACCIONADA POR UN TORNILLO QUE PERMITE LA REGULACION DE LA LLAMA. PUEDE UTILIZARSE GAS CIUDAD O BUTANO.

EL MICROMECHERO VA MONTADO EN UN EJE TRANSVERSAL, QUE PERMITA UN MOVIMIENTO BASCULANTE, PUDIENDO INTRODUCIRSE LA PUNTA DEL MECHERO POR EL ORIFICIO A DE LA TAPA (FIG. 44.3) APOYANDOSE EN EL BORDE. SITUADO EN ESTA POSICION, QUEDARAN INTRODUCIDOS DOS MILIMETROS DE MECHERO Y EN UNA POSICION INCLINADA FORMANDO UN ANGULO DE 40 GRADOS CON LA VERTICAL.

44.2.1.5. MICROMECHERO PILOTO.

ES UN MECHERO DE CARACTERISTICAS ANALOGAS AL ANTERIOR, PERO CON UN ORIFICIO DE SALIDA DE 0,25 MILIMETROS Y SIN VALVULA DE REGULACION. ESTA SITUADO EN UNA POSICION HORIZONTAL, PERPENDICULARMENTE AL MECHERO DE ENCENDIDO, SEPARADO DOS MILIMETROS DE LA TAPA MOVIL DESIGNADO COMO OBTURADOR (FIG.44.4): EL OBJETO DE ESTE MICROMECHERO ES EL MANTENER ENCENDIDA UNA LLAMA PILOTO QUE, AL BASCULAR EL MICROMECHERO DE ENCENDIDO, E INMEDIATAMENTE ANTES DE PENETRAR EN LA ABERTURA A, SE ENCIENDA, PENETRANDO YA ENCENDIDO; AL VOLVER EL MECHERO A SU POSICION NORMAL HORIZONTAL DEBERA APAGARSE NUEVAMENTE.

44.2.1.6. AGITADOR.

LA TAPA DESCRITA ANTERIORMENTE IRA EQUIPADA CON UN AGITADOR (FIG. 44.1.) MONTADO EN EL CENTRO DE LA TAPA Y CONSTITUIDO POR DOS LAMINAS RECTANGULARES DE 15 MM DE LONGITUD Y 8 MM DE ANCHO, DISPUESTAS FORMANDO ENTRE SI UN ANGULO DE 90.; LA DISTANCIA ENTRE LOS EXTREMOS DE LAS LAMINAS SERA DE 40 MM Y LA DISTANCIA ENTRE LA CARA INTERIOR DE LA TAPA Y EL EXTREMO INTERIOR DEL AGITADOR SERA DE 50 MM. EN LA PARTE SUPERIOR DEL EJE Y EN LA POSICION QUE SE INDICA EN EL DIBUJO, LLEVARA UN SEGUNDO SISTEMA DE PLETAS, CON UN ANCHO DE 8 MM Y UNA DISTANCIA ENTRE LOS EXTREMOS DE LAS LAMINAS DE 18 MM. EL EJE CON LOS SISTEMAS DE LAS PALETA IRA CONECTADO A UN MOTOR ELECTRICO, VERIFICANDOSE ESTA CONEXION MEDIANTE UN CABLE FLEXIBLE QUE PUEDA CONECTARSE Y DESCONECTARSE A VOLUNTAD.

EL MANDO DE ACCIONAMIENTO DEL AGITADOR IRA UNIDO A UN SISTEMA MECANICO ADECUADO PARA QUE AL MISMO TIEMPO DE ACCIONAR EL OBTURADOR, DESCONECTE EL MOTOR DEL AGITADOR Y HAGA VASCULAR EL MICROMECHERO DE ENCENDIDO, PARA ENCENDER LA LLAMA E INTRODUCIRLA EN LA TAZA, TAL COMO SE HA EXPLICADO ANTERIORMENTE; AL DEJAR EN LIBERTAD EL MANDO DE ACCIONAMIENTO DEL OBTURADOR, SE ESTABLECERA LA SITUACION ANTERIOR, QUEDANDO APAGADO EL MICROMECHERO EN SU POSICION NORMAL, CERRADA LA TAZA Y RESTABLECIDO EL FUNCIONAMIENTO DEL MOTOR. EL CICLO COMPLETO DE ESTOS MOVIMIENTOS DEBERA REALIZARSE EN UN TIEMPO COMPRENDIDO ENTRE DOS Y TRES SEGUNDOS.

44.2.1.7. BAÑO DE CALENTAMIENTO.

ESTA CONSTITUIDO POR UN CILINDRO METALICO DE ALEACION ANALOGA A LA TAZA, PROVISTO DE UN SISTEMA DE CALEFACCION EN EL QUE PUEDE UTILIZARSE UNA LLAMA O CALENTAMIENTO ELECTRICO, LO CUAL ES PREFERIBLE. EN CUALQUIER CASO, EL SISTEMA UTILIZADO DARA LUGAR A UN CALENTAMIENTO UNIFORME DE TODA LA SUPERFICIE DEL BAÑO, TANTO EN EL FONDO COMO EN LAS PAREDES LATERALES, Y LA FUENTE DE CALEFACCION TENDRA POTENCIA SUFICIENTE PARA ELEVAR LA TEMPERATURA DEL BAÑO DE LA FORMA QUE SE ESPECIFICA MAS ADELANTE, PUDIENDO LLEVAR EL ACEITE CONTENIDO EN LA TAZA DEL ENSAYO A UNA TEMPERATURA DE 350 GRADOS C. EL BAÑO IRA PROVISTO, EN SU PARTE SUPERIOR, DE UNA PLACA CON UN ORIFICIO DE 54,5 MM DE DIAMETRO, POR EL QUE SE INTRODUCIRA LA TAZA CONTENIENDO EL ACEITE A ENSAYAR, HACIENDO DESCANSAR SOBRE LA PLACA LA PESTAÑA DE QUE VA PROVISTA LA TAZA (FIG. 44.2). LA POSICION DE LA TAZA SE FIJA EXACTAMENTE EN EL CENTRO DEL BAÑO MEDIANTE UNOS TORNILLOS QUE ENCAJAN EN UNAS MUESCAS SITUADAS EN LA PESTAÑA O UTILIZANDO CUALQUIER OTRO DISPOSITIVO DE FIJACION, QUEDANDO ESPACIO LIBRE ENTRE LA TAZA Y EL BAÑO DE CALENTAMIENTO, DE 4,5 MM, QUE DEBE MANTENERSE UNIFORME POR TODA LA SUPERFICIE (FONDO Y PAREDES LATERALES).

44.2.1.8. TERMOMETROS.

ADAPTABLES AL APARATO, CON INTERVALOS DE 1 GRADO C Y COMPRENDIENDO LOS LIMITES ENTRE LOS CUALES SE PRESUME SE HAN DE SITUAR LAS TEMPERATURAS A MEDIR. DEBERAN HABER SIDO DEBIDAMENTE CONTRASTADOS, CON UNA TOLERANCIA EN EL ERROR DE ESCALA DE +- 0,5 GRADOS CENTIGRADOS.

44.2.2. CENTRIFUGA DE CABEZA OSCILANTE, CON CAPACIDAD SUFICIENTE PARA CENTRIFUGAR, EN UNA SOLA OPERACION, UNOS 100 ML DE ACEITE.

44.3. REACTIVOS.

44.3.1. SULFATO CUPRICO ANHIDRO, QUIMICAMENTE PURO. PULVERIZAR EN UN MORTERO UNOS 50 G. DE (FORMULA OMITIDA).

QUIMICAMENTE PURO. PULVERIZAR EN UN MORTERO EL PRODUCTO PULVERIZADO SE COLOCA EN UNA CAPSULA QUE SEVERIZAR EN UN MORTERO MANTIENE EN UNA ESTUFA DOS HORAS A 150 GRADOS C.

44.4. PROCEDIMIENTO.

44.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

TOMAR APROXIMADAMENTE 100 G DE MUESTRA Y ADICIONAR UN 5 POR 100 DE SU PESO DE SULFATO CUPRICO ANHIDRO, AGITAR DURANTE UN MINUTO EN UNA VASIJA CERRADA Y DEJAR REPOSAR DURANTE MEDIA HORA. CENTRIFUGAR EN TUBO CERRADO CON TAPON ESMERILADO A 2.800 R.P.M., DEBIENDO QUEDAR EL ACEITE LIMPIO (VER 44.6.1. Y 44.6.2.).

44.4.2. ENSAYO PRELIMINAR.

EN EL CASO GENERAL DE TRATARSE DE UNA MUESTRA PARA LA QUE SE DESCONOZCA TOTALMENTE SU COMPORTAMIENTO EN EL ENSAYO, SERA NECESARIO EFECTUAR PREVIAMENTE UNA O VARIAS DETERMINACIONES PRELIMINARES QUE SIRVAN PARA CONOCER EL VALOR APROXIMADO DEL "PUNTO DE INFLAMACION". SI SE TRATASE DE UNA MUESTRA DE NATURALEZA CONOCIDA PARA LA QUE PUEDA PREVERSE EL ORDEN APROXIMADO DE LA "TEMPERATURA DE INFLAMACION", PODRIA OMITIRSE EL ENSAYO PRELIMINAR, PUDIENDO CUMPLIRSE LOS REQUISITOS EN EL ENSAYO DEFINITIVO.

44.4.3. ENSAYO DEFINITIVO.

LLENAR LA TAZA DEL APARATO CON LA GRASA CONVENIENTEMENTE PREPARADA, CUIDANDO QUE LA BASE DEL MENISCO COINCIDA CON LA LINEA MARCADA EN EL INTERIOR Y EVITANDO LA FORMACION DE BURBUJAS DE AIRE. COLOCAR LA TAPA ASI PREPARADA EN EL APARATO, JUNTO CON LOS DEMAS DISPOSITIVOS Y EL TERMOMETRO DE ESCALA ADECUADA.

ENCENDER LA LLAMA DEL MICROMECHERO PILOTO AJUSTANDO LA ENTRADA DE GAS DE FORMA QUE LA LONGITUD DE LA LLAMA SEA DE UNOS 4 MM; AJUSTAR TAMBIEN LA ENTRADA DE GAS EN EL MICROMECHERO DE ENCENDIDO PARA QUE LA LLAMA, AL EFECTUAR EL DISPARO, TENGA UNA LONGITUD DE 5 A 6 MM.

PONER EN MARCHA EL DISPOSITIVO DE CALEFACCION Y EL AGITADOR, REGULADO DE FORMA QUE NO SOBREPASE UNA TEMPERATURA QUE SE SITUE DE 5 A 10. POR BAJO DE "LA TEMPERATURA DE INFLAMACION PREVISTA"; EL AGITADOR DEBERA GIRAR A UNA VELOCIDAD DE 60 A 120 REVOLUCIONES POR MINUTO.

ALCANZADA LA TEMPERATURA PREVIAMENTE ESTABLECIDA, CONTINUAR LA CALEFACCION, REGULADA DE FORMA QUE EL AUMENTO DE TEMPERATURA SEA DE 0,5 GRADOS C/MIN. CUANDO FALTEN UNOS 3 GRAD. C PARA ALCANZAR LA "TEMPERATURA DE INFLAMACION" SE COMIENZAN LOS ENSAYOS. PARA ELLO Y A INTERVALOS DE UN MINUTO SE INTERRUMPE LA AGITACION Y SE ACERCA LA LLAMA A LA SUPERFICIE DEL ACEITE, ABRIENDO EL OBTURADOR QUE CIERRA LA VENTANA DE LA TAZA Y VASCULANDO EL MICROMECHERO HASTA INTRODUCIR LA LLAMA EN EL INTERIOR, DEBIENDOSE REALIZAR ESTA OPERACION EN MEDIO SEGUNDO. DEJAR EN ESTA POSICION UN SEGUNDO, VOLVIENDOLO RAPIDAMENTE A SU POSICION PRIMITIVA, PONIENDO INMEDIATAMENTE EN MARCHA LA AGITACION (VER 44.6.4.).

REPETIR ESTA OPERACION A INTERVALOS DE UN MINUTO, HASTA QUE SE OBSERVE UNA INFLAMACION CLARA PERO FUGAZ EN LOS VAPORES QUE EXISTEN EN EL INTERIOR DE LA TAZA, Y SE EXTIENDEN POR TODA LA SUPERFICIE DEL ACEITE. LA TEMPERATURA A LA QUE SE PRODUCE ESTE FENOMENO ES LA QUE SE TOMA COMO "TEMPERATURA DE INFLAMACION". ANOTAR LA PRESION ATMOSFERICA A LA QUE SE HA REALIZADO EL ENSAYO (VER 44.6.5. Y 44.6.6.).

EL NUMERO DE APERTURAS DEL OBTURADOR HASTA ALCANZAR LA "TEMPERATURA DE INFLAMACION" NO DEBERA SER NUNCA SUPERIOR A CINCO. SI FUERA NECESARIO REBASAR ESTA CIFRA, REPETIR EL ENSAYO TOMANDO UNA NUEVA MUESTRA DE ACEITE.

ANALOGAMENTE, SI SE CONSIGUIESE LA INFLAMACION EN EL PRIMER INTENTO, LA TEMPERATURA REGISTRADA NO SE DARA COMO ACEPTABLE, DEBIENDOSE REPETIR EL ENSAYO CON LAS CORRECCIONES OPORTUNAS.

LA DURACION TOTAL DEL ENSAYO SERA APROXIMADAMENTE DE UNA HORA Y MEDIA.

44.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

SIENDO :

TE= VALOR LEIDO COMO TEMPERATURA DE INFLAMACION.

TC= VALOR CORREGIDO, EXPRESADO EN GRADOS CENTIGRADOS, REFERIDO A LA PRESION NORMAL.

P= PRESION ATMOSFERICA, EXPRESADA EN MM DE HG, A LA QUE SE HA EFECTUADO LA MEDIDA.

LA DIFERENCIA ENTRE RESULTADOS OBTENIDOS POR EL MISMO OPERADOR, CON EL MISMO INSTRUMENTAL Y CON UNA MISMA MUESTRA, NO DEBE SOBREPASAR DOS UNIDADES. DE NO SER ASI, REALIZAR UN TERCER ENSAYO O LOS QUE FUERAN NECESARIOS HASTA ALCANZAR LA CONSTANCIA DEBIDA.

44.6. OBSERVACIONES.

44.6.1. SI LA GRASA ES SOLIDA A LA TEMPERATURA DEL LABORATORIO, FUNDIR CALENTANDO A UNA TEMPERATURA QUE NO EXCEDA DE 10 GRADOS C A LA TEMPERATURA DE FUSION. LA DETERMINACION DE LA TEMPERATURA DE INFLAMACION SE COMENZARA, EN ESTE CASO, A LA TEMPERATURA A LA CUAL SE HAYA REALIZADO ESTE PROCESO PREVIO DE FUSION. SI TEMPERATURA A LA CUAL SE HAYA REALIZADO ESTE PROCESO PREVIO DE FUESE NECESARIA LA DESECACION, SE REALIZARA, TAMBIEN, SOBRE LA GRASA LICUADA.

44.6.2. LA DESHIDRATACION PUEDE SER SUPRIMIDA SI LA HUMEDAD DE LA MUESTRA NO ES SUPERIOR A 0,1 POR 100. SI EL CONTENIDO EN AGUA FUESE MAS ELEVADO, LA DESECACION ES NECESARIA PARA ELUDIR LA POSIBILIDAD DE QUE SE FORME UNA ESPUMA EXCESIVA, QUE PODRIA APAGAR LA LLAMA AL INTRODUCIR EL MICROMECHERO EN LA TAZA.

44.6.3. EN LOS APARATOS DE FUNCIONAMIENTO AUTOMATICO, AL REACCIONAR EL MECANISMO DEL OBTURADOR, SE PRODUCEN SIMULTANEAMENTE TODOS LOS MOVIMIENTOS DESCRITOS, DEBIENDOSE PREOCUPAR EL OPERADOR UNICAMENTE DE MANTENER EL MECANISMO EN TENSION DURANTE EL TIEMPO ESTABLECIDO DE UN SEGUNDO, OBSERVANDO EL PROCESO DE INFLAMACION Y LA TEMPERATURA.

44.6.4. EL INTERVALO DE UN MINUTO ENTRE CADA DOS ENSAYOS DE INFLAMACION ES EL TIEMPO MINIMO QUE SE CONSIDERA NECESARIO PARA RESTABLECER LA CONCENTRACION DE SATURACION DE LOS VAPORES DEL ESPACIO LIBRE DE LA TAZA, EN EQUILIBRIO CON EL ACEITE EN ENSAYO, EQUILIBRANDO ESTE QUE SE ALTERA AL EFECTUARSE CADA ENSAYO DE INFLAMACION.

44.6.5. EL VERDADERO FENOMENO DE INFLAMACION NO DEBE CONFUNDIRSE CON EL HALO AZULADO QUE SE OBSERVA ALGUNAS VECES RODEANDO LA LLAMA: ESTO INDICA QUE EL FENOMENO DE INFLAMACION ESTA PROXIMO, PERO NO DEBE CONFUNDIRSE CON LA VERDADERA INFLAMACION DEL ACEITE.

SI AL INTRODUCIR LA LLAMA DE ENCENDIDO POR LA ABERTURA DE LA PLACA SE PRODUCE UNA INFLAMACION PERMANENTE DE LOS GASES COMBUSTIBLES DISTINTA AL DESTELLO QUE SE HA DESCRITO ANTERIORMENTE, ESTE HECHO PONE EN EVIDENCIA QUE EL ACEITE SEENCUENTRA A UNA TEMPERATURA SUPERIOR A SU PUNTO DE INFLAMACION, DEBIENDO REPARTIRSE LA EXPERIENCIA PARTIENDO DE UNA NUEVA MUESTRA.

44.7. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO DE RACIONALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA. 55.103.

45. RECONOCIMIENTO DE ANTIOXIDANTES

45.1. PRINCIPIO.

LOS ANTIOXIDANTES SON EXTRAIDOS POR EL ACETONITRILO DE UNA SOLUCION DE LA MUESTRA EN HEXANO Y POSTERIOR FRACCIONAMIENTO E IDENTIFICACION.

APLICABLE A MATERIAS GRASAS DESTINADAS DIRECTAMENTE A LA ALIMENTACION HUMANA. NO APLICABLE A GRASAS BRUTAS O A AQUELLAS OTRAS QUE INTRODUZCAN IMPUREZAS EN EL EXTRACTO QUE DIFICULTEN EL FRACCIONAMIENTO CROMATOGRAFICO Y EL RECONOCIMIENTO DE ANTIOXIDANTES.

LOS ANTIOXIDANTES IDENTIFICADOS POR ESTE METODO SON: ACIDO NORDIHIDROGUAYARETICO (NDHG), GALATO DE PROPILO (GP), GALATO DE OCTILO (GO), GALATO DE DODECILO (GD), BUTILHIDROXIANISOL (BHA) Y BUTILHIDROXITOLUENO (BHT).

45.2. MATERIAL Y APARATOS.

45.2.1. EQUIPO DE CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA, CON PLACAS DE GEL DE SILICE G DE TAMAÑO CONVENIENTE, SEGUN EL NUMERO DE MUESTRAS QUE SE DESEEN EXAMINAR EN UNA SOLA OPERACION Y UN ESPESOR DE CAPA DE 0,25 MILIMETROS. VER 45.6.1.

45.2.2. EVAPORADOR ROTATORIO.

45.2.3. MATRAZ DE FONDO REDONDO DE 250 ML, UTILIZABLE CON EL EVAPORADOR ROTATORIO.

45.2.4. ESTUFA DE DESECACION CON CALEFACCION ELECTRICA Y REGULACION DE TEMPERATURA, CON UN ERROR DE +- 2 GRADOS C EN TODO EL AMBITO INTERIOR DE LA ESTUFA.

URA, CON UN ERROR DE +- 2 GRADOS C EN TODO EL AMBITO INTERIOR DE LA 45.2.5. AMPOLLAS DE EXTRACION CON CAPACIDAD DE 250 ML.

45.2.6. MATRACES CONICOS DE 250 ML Y 1.000 ML CON TAPON ESMERILADO Y CONO NORMALIZADO 29/32.

45.2.7. MATRACES AFORADOS DE 100 ML CON TAPON ESMERILADO Y CONO NORMALIZADO 14/23.

45.2.8. VASO DE 150 ML.

45.2.9. JERINGA DE 20 MICROLITROS, GRADUADA EN MICROS.

45.3. REACTIVOS.

45.3.1. GEL DE SILICE G, DE CALIDAD ADECUADA PARA CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA Y EN ESPECIAL PARA EL FRACCIONAMIENTO DE LOS PRODUCTOS QUE SE TRATA DE SEPARAR, LO QUE SE COMPRUEBA CON LOS PATRONES CORRESPONDIENTES.

45.3.2. METANOL CON UN CONTENIDO DE AGUA QUE NO SOBREPASE EL O,5 POR 100 (V/V).

45.3.3. ETANOL CON UNA RIQUEZA DE 96/97 POR 100 (V/V).

45.3.4. HEXANO NORMAL PARA CROMATOGRAFIA (FORMULA OMITIDA).

45.3.5. ACETONITRILO.

45.3.6. ACETATO DE ETILO.

45.3.7. BENCENO.

45.3.8. CLOROFORMO.

45.3.9. ACIDO ACETICO CRISTALIZABLE.

45.3.10. ACETONITRILO SATURADO DE HEXANO.- EN UN MATRAZ CONICO DE 100 ML INTRODUCIR 900 ML DE ACETONITRILO. AGREGAR 100 ML DE HEXANO Y UN POCO DE SULFATO SODICO SECO. AGITAR, CERRAR EL MATRAZ CON EL TAPON Y DEJAR EN REPOSO UNAS DOCE HORAS. EN EL MOMENTO DEL USO, SACAR LA CANTIDAD NECESARIA DE ACETONITRILO.

45.3.11. HEXANO SATURADO DE ACETONITRILO.- PROCEDER COMO SE INDICA ANTERIORMENTE, INVIRTIENDO LAS CANTIDADES DE LOS DOS DISOLVENTES. CONSERVAR EN EL MATRAZ HASTA SU UTILIZACION.

45.3.12. LIQUIDO DE DESARROLLO.- INMEDIATAMENTE ANTES DE SU UTILIZACION PREPARAR UNA MEZCLA DE HEXANO, BENCENO Y ACIDO ACETICO EN LAS PROPORCIONES 40:40:20 (V/V/V).

45.3.13. REVELADOR.- SOLUCION AL 1 POR 100 EN ETANOL (M/V) EN DICLORO-2-5- QUINONA CLORIMIDA.

45.3.14. SOLUCIONES PATRON.- DISOLVER AL 0,1 POR 100 (M/V) EN ETANOL LOS ANTIOXIGENOS CUYA IDENTIFICACION SE QUIERA REALIZAR EN LA GRASA. ESTOS PRODUCTOS DEBERAN SER PUROS, COMPORTANDOSE EN LA CROMATOGRAFIA COMO UNA SOLA ESPECIE QUIMICA; SI APARECIESEN IMPUREZAS, ESTAS NO DEBERAN PERTURBAR LA MANCHA DEL PROCESO NI EL RECONOCIMIENTO DE LOS OTROS ANTIOXIDANTES.

45.4. PROCEDIMIENTO.

45.4.1. EXTRACCION DE LOS ANTIOXIDANTES.

PESAR DE 7,5 A 10 ML DE LA MUESTRA DE ACEITE O GRASA E INTRODUCIRLA EN UN VASO DE 150 ML. DISOLVER CON 100 ML DE HEXANO, PUDIENDOSE CALENTAR EL PROCESO DE DISOLUCION. PASAR LA DISOLUCION A UN AMPOLLA DE EXTRACCION DE 250 ML. LAVAR EL VASO CON 25 ML DE HEXANO, AGREGANDO ESTE LIQUIDO A LA AMPOLLA DE EXTRACCION. NO DEBE QUEDAR NINGUNA PARTICULA INSOLUBLE EN LA SOLUCION. AÑADIR 25 ML DE ACETONITRILO SATURADO DE HEXANO Y AGITAR DURANTE UN MINUTO. SACAR LA FASE INFERIOR DE ACETONITRILO, PASANDOLA A UNA SEGUNDA AMPOLLA DE 250 ML. SI SE FORMA UNA EMULSION, CALENTAR SUAVEMENTE LA AMPOLLA HACIENDO CAER SOBRE ELLA, DESDE UN FRASCO LAVADOR, UN CHORRO DE AGUA A UNOS 50 GRADOS C, HACIENDOLA GIRAR AL MISMO TIEMPO MUY LENTAMENTE. PROLONGAR LA OPERACION HASTA LOGRAR LA SEPARACION EN DOS FASES LIMPIAS.

REPETIR TRES VECES CONSECUTIVAS LA EXTRACCION CON EL ACETONITRILO SATURADO DE HEXANO, EMPLEANDO 25 ML EN CADA EXTRACCION ACUMULANDO LOS EXTRACTOS EN LA MISMA AMPOLLA.

LOS EXTRACTOS REUNIDOS DE ACETONITRILO SE LAVAN DOS VECES CON HEXANO SATURADO DE ACETONITRILO, EMPLEANDO 25 ML EN CADA LAVADO.

PASAR EL EXTRACTO EN ACETONITRILO, UNA VEZ LAVADO, A UN MATRAZ DE FONDO REDONDO DE 250 ML. EVAPORAR EL DISOLVENTE EN EVAPORADOR ROTATORIO, CON VACIO, CALENTAR MUY CUIDADOSAMENTE Y EVITANDO QUE LA TEMPERATURA DEL BAÑO DE AGUA SE SOBREPASE, EN NINGUN MOMENTO, LOS 40 GRADOS C.

UNA VEZ EVAPORADO EL DISOLVENTE, DISOLVER EL RESIDUO EN 2 ML DE METANOL, PASANDO LA DISOLUCION A UN FRASQUITO DE CAPACIDAD ADECUADA PARA SU CONSERVACION Y UTILIZACION EN LA CROMATOGRAFIA.

SI EL RESIDUO OBTENIDO EN LA CONCENTRACION NO SE DISUELVE TOTALMENTE EN EL METANOL, FILTRAR LA SOLUCION.

PARA CONTENIDOS PEQUEÑOS DE ANTIOXIDANTES, POR EJEMPLO, DE UN ORDEN INFERIOR A 0,1, POR 100, DEBE EMPLEARSE MENOS DISOLVENTE.

45.4.2. CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.

DEPOSITAR 10 MICROLITROS DE LA DISOLUCION EN METANOL DE LOS ANTIOXIDANTES EN UNA PLACA DE DIMENSIONES ADECUADAS, PREVIAMENTE ACTIVADA EN LAS CONDICONES RECOMENDADAS PARA CADA CASO, Y EN EL CENTRO DE UNA LINEA SITUADA A UNOS 2 CM DEL EXTREMO INFERIOR DE LA PLACA.

DEPOSITAR 4 MICROS DE CADA UNO DE LOS PATRONES CON QUE SE DESEE OPERAR, A LA DERECHA Y A LA IZQUIERDA DE LA MANCHA PROBLEMA, DISTANTES ENTRE SI 10-15 MM.

INTRODUCIR LA PLACA EN LA CUBETA DE DESARROLLO, CUIDANDO QUE LAS MANCHAS DEPOSITADAS QUEDEN POR ENCIMA DEL NIVEL DEL LIQUIDO EN LA CUBETA.

DEJAR LA CUBETA PREFERIBLEMENTE EN LA OSCURIDAD O EN UNA ESTANCIA DEBILMENTE ILUMINADA, PROLONGANDO EL DESARROLLO HASTA QUE EL FRENTE DEL DISOLVENTE SE SITUE A UNOS 15 CM DE LA LINEA DE PARTIDA DE LOS ANTIOXIDANTES. SACAR LA PLACA DEJANDOLA SECAR AL AIRE.

PULVERIZAR LA PLACA CON EL REVELADOR, INTRODUCIENDOLA DESPUES EN UNA ESTUFA DE AIRE REGULADA A 100 GRADOS C (+- 2 GRADOS C), DONDE PERMANECERA DIEZ O QUINCE MINUTOS.

ADA A 100 GRADOS C (+- 2 GRADOS C), DONDE PERMANECERA DIEZ O QUINCE SACAR LA PLACA DE LA ESTUFA Y OBSERVAR LAS MANCHAS DEL PROBLEMA, COMPARANDOLAS CON LAS DE LOS PATRONES.

45.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

EL ORDEN DE COLOCACION DE LOS ANTIOXIDANTES, EN ORDEN DE MENOR A MAYOR DESPLAZAMIENTO, ES EL SIGUIENTE: NDHG, GP, GO, BHA, BHT (VER 45.6.2. Y 45.6.3.).

45.6. OBSERVACIONES.

45.6.1. EN DETERMINADOS CASOS, PARA CONSEGUIR UNA SEPARACION EFECTIVA DE ANTIOXIDANTES, CON VALORES DE RF MUY PROXIMOS, COMO POR EJEMPLO EL NDHG Y GP, ES ACONSEJABLE OPERAR CON ESPESORES DEL GEL DE SILICE DE 0,40 MM EN LUGAR DE 0,25 MM, QUE ES LA MAS FRECUENTE Y CON EL QUE SE CONSIGUEN NORMALMENTE RESULTADOS SATISFACTORIOS.

45.6.2. SE PUEDE INTENSIFICAR LA COLORACION DE LAS MANCHAS, FACILITANDO SU RECONOCIMIENTO Y LA SENSIBILIDAD DEL METODO, MEDIANTE REACCION CON EL AMONIACO.

PARA ELLO, LA PLACA, UNA VEZ REVELADA Y SECA, SE INTRODUCE EN UNA CUBETA SATURADA DE VAPORES DE AMONIACO, MANTENIENDOLA ALLI HASTA OBSERVAR UNA INTENSIFICACION DEL COLOR DE LAS MANCHAS. SE ADQUIEREN COLORACIONES CARACTERISTICAS EN ALGUNOS CASOS.

DEBE CUIDARSE NO PROLONGAR DEMASIADO EL CONTACTO CON EL AMONIACO, EN EVITACION DE QUE SE COLOREE EL FONDO DE LA PLACA, LO CUAL, EN VEZ DE BENEFICIAR, PODRIA DIFICULTAR EL RECONOCIMIENTO DE LOS ANTIOXIDANTES.

45.6.3. A TITULO DE ORIENTACION, SE DAN A CONTINUACION LOS VALORES RF OBTENIDOS CON LOS SEIS ANTIOXIDANTES CITADOS ANTERIORMENTE:

ANTIOXIDANTES...NDHG GP GO GD BHA BHT

RF...0,10 0,14 0,28 0,35 0,75 0,98

45.6.4. LA APARICION DE UNA MANCHA DE BHT MUY DEBIL, EN COMPARACION CON EL PATRON, PUEDE SER DEBIDO A UNA PERDIDA DEL PRODUCTO EN EL LAVADO CON HEXANO SATURADO DE ACETONITRILO. EN ESTE CASO, PROCEDER COMO SIGUE: REALIZAR LA EXTRACCION TAL Y COMO DICE EL METODO. RECOGER POR SEPARADOS LOS LIQUIDOS PROCEDENTES DE LA EXTRACCION CON ACETONITRILO SATURADO DE HEXANO Y LOS QUE PROCEDEN AL LAVADO CON HEXANO SATURADO DE ACETONITRILO. EVAPORAR LOS DISOLVENTES. DISOLVER AMBOS RESIDUOS CON METANOL (2 ML). SOBRE LA PLACA DEPOSITAR UNOS 10 MICROLITROS DEL EXTRACTOS PROCEDENTE DE LA EXTRACCION CON ACETONITRILO Y 15 MICROLITROS DEL QUE PROCEDE DE LOS LAVADOS CON HEXANO. DE ESTA FORMA, EL BHT SE DETECTA EN AMBOS DESARROLLOS, PUDIENDOSE CONSIDERAR LA CANTIDAD PRESENTE EN LA MUESTRA POR COMPARACION CON EL PATRON COMO "SUMA" DE LAS INTENSIDADES DE AMBAS MANCHAS.

45.7. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO DE RACIONALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA. 55.017.

46. ACIDOS GRASOS DE CADENA CORTA

46.1. PRINCIPIO.

OBTENCION DE LOS ESTERES METILICOS DE LOS ACIDOS GRASOS MEDIANTE REACCION CON UNA SOLUCION DE HIDROXIDO POTASICO EN METANOL Y SUBSIGUIENTE INYECCION DIRECTAMENTE DE LA DISOLUCION DE ESTERES METALICOS EN EL CROMATOGRAMA. EL METODO ES APLICABLE A LAS GRASAS DE MANTEQUILLAS U OTRAS QUE CONTENGAN ACIDOS GRASOS DE LONGITUD DE CADENA INFERIOR AL C14 Y SIEMPRE QUE EL CONTENIDO DE ACIDOS LIBRES NO EXCEDA DEL 1 POR 100 EXPRESADOS EN ACIDO OLEICO.

46.2. MATERIAL Y APARATOS.

46.2.1. MATRACES CON BOCA ESMERILADA Y FONDO REDONDO DE 50 Y 100 ML DE CAPACIDAD.

46.2.2. PIPETAS AFORADAS DE 1 ML, 2 ML Y 10 ML.

46.2.3. MATRACES AFORADOS DE 50 Y 100 ML DE CAPACIDAD.

46.2.4. PROBETA GRADUADA DE 10 ML.

46.2.5. JERINGA DE CARACTERISTICAS ADECUADAS PARA LA INYECCION DE LA MUESTRA, GRADUADA EN DECIMAS DE ML, CON UNA CAPACIDAD TOTAL DE 1 A 10 ML.

46.2.6. CROMATOGRAFO APTO PARA TRABAJAR EN FASE GASEOSA, PROVISTO DE HORNO CAPAZ DE SER CALENTADO HASTA 250-300 GRADOS C Y SISTEMA DE REGULACION QUE PERMITACONTROLAR LA TEMPERATURA CON UN ERROR DE +- 1,0 GRADOS C. EQUIPADO CON PROGRAMADOR DE TEMPERATURA CAPAZ DE LLEVAR LA TEMPERATURA DEL HORNO DE 60 GRADOS C A UNA VELOCIDAD DE 4 GRADOS C/MIN. PROVISTO DE REGULADOR INDEPENDIENTE DE LA TEMPERATURA DEL INYECTOR, QUE PODRA SER CALENTADO A UNA TEMPERATURA SUPERIOR, POR LO MENOS, EN 50 GRADOS A LA MAXIMA ALCANZABLE POR EL HORNO PROVISTO DE UN SISTEMA DE DETECCION SENSIBLE, DE IONIZACION DE LLAMA DE HIDROGENO, QUE PUEDA SER MANTENIDO A LA TEMPERATURA DE LA COLUMNA, A UNOS 50 GRADOS C POR ENCIMA DE LA DEL HORNO.

A LA TEMPERATURA DE LA COLUMNA, A UNOS 50 GRADOS C POR ENCIMA DE 46.2.7. REGISTRADOR CON UNA TENSION DE ENTRADA ADECUADA A LA SALIDA DEL AMPLIFICADOR DEL CROMATOGRAFO, CON UNA VELOCIDAD DE RESPUESTA MINIMA CAPAZ DE PRODUCIR LA DEFLEXION COMPLETA DE LA ESCALA EN UN SEGUNDO Y UNA VELOCIDAD DE DESPLAZAMIENTO DEL PAPEL DE 5 MM/MIN, QUE PERMITA LA POSIBILIDAD DE VARIAR ESTA VELOCIDAD ACELERANDO O RETARDANDO EL DESPLAZAMIENTO.

46.2.8. TUBO DE NITROGENO A PRESION UTILIZABLE COMO GAS PORTADOR, DEBIENDO TENER UNA RIQUEZA MINIMA DEL 99,8 POR 100.

46.2.9. TUBOS DE HIDROGENO Y AIRE A PRESION NECESARIOS PARA EL CASO EN QUE SE UTILICE DETECTOR DE LLAMA DE HIDROGENO. EL HIDROGENO DEBERA TENER UNA RIQUEZA MINIMA DEL 99,8 POR 100, DEBIENDO ESTAR SECO. COMO MEDIDA DE SEGURIDAD, ES MUY CONVENIENTE COLOCAR A LA ENTRADA DE LOS GASES EN EL CROMATOGRAFO SENDOS TUBOS DE DESECACION PROVISTOS DE CRIBA MOLECULAR 13X.

46.2.10. COLUMNA CROMATOGRAFICA.

46.2.10.1. COLUMNA QUE SATISFAGA LAS CONDICIONES DETERMINADAS EN 41.4.2. DE LOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE ACEITES Y GRASAS.

46.2.10.2. COLUMNA DE VIDRIO CON DIAMETRO INTERIOR DE 4 MM Y UNA LONGITUD APROXIMADA DE 2 MM. RELLENADA CON CHROMOSORB G, W O Q (80-100 MALLAS), CONTENIENDO DE 2,5 A 5 POR 100 DE UN POLIESTER, SIENDO RECOMENDABLE CUALQUIERA DE LOS TRES SIGUIENTES: DIETILENGLICOLSUCCINATO (DEGS), ETILENGLICOLSUCCINATO O ADIPATO ( EGS O EGA), POLIETILENGLICOLADIPATO (PEGA).

ANTES DE EMPLEAR UNA COLUMNA NUEVA EN LA RESOLUCION DE PROBLEMAS ANALITICOS, DEBE SER CONDICIONADA ELIMINANDO TODOS AQUELLOS PRODUCTOS QUE PERTURBARIAN LA MANCHA DE LA CROMATOGRAFIA. PARA ELLO, SE MONTA EN EL CROMATOGRAFO, SIN CONECTARLA AL DETECTOR, Y SE CALIENTA EL HORNO A UNOS 10. POR ENCIMA DE LA TEMPERATURA MAXIMA A QUE VAYA A SER UTILIZADA LA COLUMNA EN TRABAJOS POSTERIORES, HACIENDO PASAR, AL MISMO TIEMPO, UNA CORRIENTE DE NITROGENO DE 30 A 40 ML/MIN, QUE SE MANTIENE VEINTICUATRO HORAS, COMO MINIMO. LA COLUMNA SERA APTA PARA SU UTILIZACION SI, UNA VEZ CONECTADA AL DETECTOR Y EN FUNCIONAMIENTO NORMAL, LA LINEA BASE DIBUJADA POR EL REGISTRADOR ACUSA LA ESTABILIDAD DEL SISTEMA.

46.3. REACTIVOS.

46.3.1. METANOL ABSOLUTO (99,8 POR 100).

46.3.2. HIDROXIDO POTASICO, EN LENTEJAS.

46.3.3. ETER DE PETROLEO O HEXANO.- ETER DE PETROLEO (P.E. 40-60 GRADOS C), CUYO CONTENIDO EN BENCENO NO SEA SUPERIOR A 0,1 POR 100, HEXANO NORMAL, QUE CUMPLA LAS MISMAS ESPECIFICACIONES DEL ETER DE PETROLEO.

46.3.4. HEPTANO NORMAL, CON UNA RIQUEZA MINIMA EN HEPTANO NORMAL, DETERMINADO POR CROMATOGRAFIA GASEOSA, DEL 99 POR 100.

46.3.5. DISOLUCION 2 N DE HIDROXIDO POTASICO EN METANOL.- DISOLVER 11,2 G DE HIDROXIDO POTASICO EN 100 ML DE METANOL.

46.3.6. ESTERES METILICOS DE PUREZA ADECUADA PARA SU UTILIZACION COMO PATRONES EN CROMATOGRAFIA GASEOSA.- SE DISPONDRA DE LOS ESTERES METILICOS DE LOS ACIDOS MENCIONADOS A CONTINUACION, DEBIENDO TENER UNA PUREZA MINIMA DE 99 POR 100, DETERMINADA POR CROMATOGRAFIA GASEOSA:

ACIDO BUTANOICO (BUTIRICO).

ACIDO PENTANOICO (VALERIANICO).

ACIDO HEXANOICO (CAPROICO).

ACIDO OCTANOICO (CAPRILICO).

ACIDO DECANOICO (CAPRICO).

ACIDO DODECANOICO (LAURICO).

ACIDO TETRADECANOICO (MIRISTICO).

ACIDO HEXADECANOICO (PALMITICO).

ACIDO OCTADECANOICO (ESTEARICO).

ACIDO 9-OCTADECANOICO (OLEICO).

ACIDO 9,12 OCTADECADIENOICO (LINOLEICO).

ACIDO EICOSANOICO (ARAQUICO).

46.3.7. SOLUCION DE REFERENCIA I.- EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML, SE PESA, CON EXACTITUD DE +- O,1 MG, 1 G DE PENTANOATO DE METILO, DISOLVIENDOLO EN HEPTANO NORMAL Y COMPLETANDO HASTA EL ENRASE.

46.4. PROCEDIMIENTO.

46-4-1- PREPARACION DE LOS ESTERES METILICOS.

EN UN MATRAZ DE FONDO REDONDO DE 50 ML, PESAR, CON EXACTITUD DE +- 0,1 MG, 1 G DE GRASA. AÑADIR 10 ML DE ETER DE PETROLEO O HEXANO Y AGITAR SUAVEMENTE HASTA DISOLUCION DE LA GRASA.

EN EL CASO DE QUE SE QUIERA EFECTUAR UNA DETERMINACION CUANTITATIVA DE LOS ACIDOS BUTIRICO Y CAPROICO EN LA MUESTRA, AGREGAR A LA DISOLUCION EN ETER DE PETROLEO DE LA GRASA 1 ML, EXACTAMENTE MEDIDO, DE LA SOLUCION DE REFERENCIA MAS ADECUADA; PARA MUESTRAS CONTENIENDO DE 1-4 POR 100 DE ACIDO BUTIRICO SE UTILIZARA LA SOLUCION DE REFERENCIA I; PARA MUESTRAS CONTENIENDO MENOS DE 1 POR 100 DE ACIDO BUTIRICO, SE UTILIZARA LA SOLUCION DE REFERENCIA II.

SI SE DESEA EFECTUAR SOLAMENTE UN ANALISIS COMPLETO DE LA FRACCION DE ACIDOS GRASOS, PARA LO QUE SE APLICA EL METODO DE NORMALIZACION INTERNA, NO SERA NECESARIO EL EMPLEO DE SOLUCION DE REFERENCIA.

A LA SOLUCION EN ETER DE PETROLEO DE LA MUESTRA, ADICIONADA O NO DE SOLUCION DE REFERENCIA, AGREGAR 0,5 ML DE DISOLUCION 2N DE HIDROXIDO POTASICO.

AGITAR SUAVEMENTE LA MEZCLA HASTA QUE SE PONGA TRANSPARENTE, PARA LO CUAL SON SUFICIENTES UNOS VEINTE A TREINTA SEGUNDOS. CASI INMEDIATAMENTE DESPUES DE OBSERVAR LA CLARIFICACION DE LA SOLUCION, SUELE APRECIARSE UN ENTURBAMIENTO DEBIDO A LA SEPARACION DE GLICEROL, QUE SE SEDIMENTA RAPIDAMENTE.

INMEDIATAMENTE DESPUES DE TERMINADA LA REACCION Y OBSERVADA LA SEDIMENTACION, TOMAR LA CANTIDAD NECESARIA CON LA JERINGA E INYECTAR EN EL CROMATOGRAFO, UNA DEMORA EN LA INYECCION DE LOS ESTERES METILICOS DARIA LUGAR A LA FORMACION DE JABONES, CON ERROR EN LA DETERMINACION.

46.4.2. DETERMINACION CROMATOGRAFICA.

46.4.2.1. CONDICIONES DE TRABAJO.

TEMPERATURA DE LA COLUMNA: TEMPERATURA PROGRAMADA DE 60 A 180 GRADOS C, CON UNA VELOCIDAD DE 4 GRADOS C/MIN.

TEMPERATURA DEL INYECTOR: 200 GRADOS C.

TEMPERATURA DEL DETECTOR: 200 GRADOS C.

GAS PORTADOR: NITROGENO (O HELIO), CON UN FLUJO DE 60 ML/MIN.

FLUJO DE HIDROGENO Y AIRE PARA LA ALIMENTACION DEL DETECTOR:

LOS FLUJOS DEPENDERAN DEL TIPO DE DETECTOR UTILIZADO, DEBIENDO DETERMINARSE PREVIAMENTE PARA OPTIMIZAR LA RESPUESTA.

EL REGISTRO OBTENIDO DEL CROMATOGRAMA DEBE SATISFACER LAS CONDICIONES QUE SE INDICAN A CONTINUACION; CASO CONTRARIO, SE REPITE LA INYECCION MODIFICANDO LA CANTIDAD INYECTADA O LA SENSIBILIDAD DE TRABAJO HASTA OBTENER UN CROMATOGRAMA SATISFACTORIO.

LOS REQUISITOS EXIGIBLES SON LOS SIGUIENTES:

A) EL AREA TOTAL DESCRITA EN EL REGISTRO, REFERIDA A LA SENSIBILIDAD MAXIMA UTILIZADA EN EL CURSO DE LA OPERACION, DEBE SER DE UN ORDEN APROXIMADO DE 2.000 MM CUADRADOS, CON UNA VELOCIDAD DEL PAPEL EN EL REGISTRADOR DE 5 MM/MIN. DE ESTA FORMA, LOS COMPONENTES PRESENTES EN UNA CUANTIA DEL 0,1 POR 100 DEBEN DAR UN PICO, COMO MINIMO, DE 2 MM CUADRADOS, SIENDO, POR TANTO, PERFECTAMENTE RECONOCIBLES.

B) CON EL FIN DE CONSEGUIR QUE TODOS LOS PICOS CAIGAN DENTRO DEL PAPEL REGISTRADOR, SE UTILIZARA, EN CADA CASO, LA ATENUACION DE SENSIBILIDAD QUE SEA NECESARIA, CUIDANDO QUE EL PICO DE MAYOR INTENSIDAD NO SEA ATENUADO MAS DE OCHO VECES.

UNA VEZ CONSEGUIDO UN REGISTRO SATISFACTORIO, Y HABIENDO ALCANZADO NUEVAMENTE LA PLUMA LA LINEA BASE, SE INTERRUMPE EL FUNCIONAMIENTO DEL REGISTRADOR Y SE RETIRA EL PAPEL CON EL REGISTRO PARA LA IDENTIFICACION DE LOS PICOS Y/O CALCULOS CUANTITATIVOS.

46.4.2.2. IDENTIFICACION DE LOS PICOS.-SE SEGUIRAN LOS CRITERIOS ESTABLECIDOS EN EL METODO NUMERO 41 DE LOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE ACEITES Y GRASAS.

46.4.2.3. DETERMINACIONES CUANTITATIVAS.-LA DETERMINACION CUANTITATIVA SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LOS PESOS DE CADA UNO DE LOS COMPONENTES SEPARADOS EN LA MEZCLA SON PROPORCIONALES A LAS AREAS COMPRENDIDAS DENTRO DE LOS TRIANGULOS DIBUJADOS DEBAJO DE CADA PICO. EL AREA DE CADA TRIANGULO SE OBTIENE TRAZANDO RECTAS TANGENTES A LAS LINEAS DIBUJADAS EN EL REGISTRO, PROLONGANDOLAS HASTA SU INTERSECCION CON LA LINEA BASE Y MULTIPLICANDO LA ALTURA DEL TRIANGULO POR LA MITAD DE LA BASE. EN EL CASO DE HABER TRABAJADO CON ATENUACIONES DIFERENTES PARA CADA PICO, SE REFERIRAN TODAS LAS MEDIDAS A UNA MISMA SENSIBILIDAD DEL REGISTRADOR, MULTIPLICANDO LA ALTURA POR EL FACTOR DE ATENUACION CORRESPONDIENTE EN CADA CASO, Y EL VALOR DE LA ALTURA ASI CORREGIDA POR LA MITAD DE LA BASE.

46.4.3. DETERMINACION DEL CONTENIDO DE LOS ACIDOS BUTIRICO Y CAPROICO EN LA MATERIA GRASA.-ESTA DETERMINACION SE REALIZA POR EL METODO DEL PATRON INTERNO, SIENDO EL PATRON ELEGIDO EL PENTANOATO DE METILO.

46.4.3.1. PREPARACION DE LA MEZCLA DE CALIBRACION.-CON UNA EXACTITUD DE +-0,1 MG Y EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML, PESAR UNOS 100 MG DE CADA UNO DE LOS SIGUIENTES PATRONES: BUTANOATO DE METILO, PENTANOATO DE METILO Y CAPROATO DE METILO. SE DISUELVE LA MEZCLA DE HEPTANO NORMAL, Y SE DILUYE COMPLETANDO HASTA EL ENRASE.

INYECTAR LA CANTIDAD NECESARIA DE LA SOLUCION ANTERIOR, NORMALMENTE 0,2-04 UL, PARA QUE, TRABAJANDO A LA SENSIBILIDAD MEDIA DEL APARATO, SE CONSIGA SITUAR LOS MAXIMOS DE LOS PICOS EN UNA POSICION DEL 70-80 POR 100 DEL RECORRIDO TOTAL DE LA PLUMA DEL REGISTRADOR. LOS TRES PICOS DEBERAN REGISTRARSE A LA ANTERIOR CON HEPTANO NORMAL EN LA RELACION NECESARIA PARA PODER AJUSTARSE A LAS PRESCRIPCIONES FIJADAS. EFECTUAR, CUANDO MENOS, TRES DETERMINACIONES CONSECUTIVAS, QUE NO DEBEN DISCREPAR ENTRE SI MAS DEL 1 POR 100.

46.4.4. ANALISIS CUANTITATIVO DE LA TOTALIDAD DE LOS COMPONENTES DE LA FRACCION DE ACIDOS GRASOS, COMPRENDIENDO DEL C4 AL C20 Y C18:3.

46.4.4.1. PREPARACION DE LA MEZCLA DE CALIBRACION.-DETERMINAR PREVIAMENTE EL FACTOR DE CORRECCION PARA CADA ACIDO COMPONENTE DE LA MEZCLA, REFERIDO A UNO DE CUALQUIERA DE ELLOS, QUE SE TOMA COMO PATRON, ELIGIENDOSE NORMALMENTE PARA ESTE FIN EL ACIDO PALMITICO, Y DEBIENDO TENER LA MEZCLA DE CALIBRACION UNA COMPOSICION ANALOGA A LA DE LA MEZCLA PROBLEMA.

PARA ELLO, SI NO SE CONOCE PREVIAMENTE EL ORDEN DE COMPOSICION DEL PROBLEMA, SE REALIZARA UNA DETERMINACION CROMATOGRAFICA DE ORIENTACION, REALIZANDOSE EN EL REGISTRO LA CUANTIFICACION DE LOS COMPONENTES SUPONIENDO EL MISMO FACTOR DE RESPUESTA PARA TODOS ELLOS, EFECTUANDO UN REPARTO PROPORCIONAL ENTRE LAS AREAS MEDIDAS.

EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML, PESAR, CON UINA EXACTITUD DE +-0,1 MG, CANTIDADES DE LOS ESTERES METILICOS PATRONES QUE SE INDICAN A CONTINUACION PROPORCIONANDOLES A LAS CIFRAS DE COMPOSICION ENCONTRADAS EN EL ANALISIS DE ORIENTACION ANTERIORMENTE ALUDIDO, O PREVISTAS CON ANTERIORIDAD PARA LA MUESTRA. LOS PATRONES QUE DEBEN PESARSE SON LOS SIGUIENTES: BUTANOATO DE METILO, HEXANOATO DE METILO, OCTANOATO DE METILO, DECANOATO DE METILO, DODECANOATO DE METILO, OLEATO DE METILO, LINOLEATO DE METILO Y EICOSANOATO DE METILO. SE DISUELVE LA MEZCLA DE HEPTANO NORMAL, AGREGANDO LA CANTIDAD ADECUADA DE DISOLVENTE EN RELACION AL PESO TOTAL DE ESTERES METILICOS QUE SE HAYAN PESADO; PARA UNOS 500 MG EN TOTAL, SE DEBEN EMPLEAR, COMO ORIENTACION, UNOS 50 ML DE HEPTANO. A CONTINUACION INYECTAR 0,2-0,4 UL, PARA QUE, TRABAJANDO A LA SENSIBILIDAD MEDIA DEL APARATO, SE CONSIGA SITUAR EL MAXIMO DEL PICO CORRESPONDIENTE AL COMPONENTE MAYORITARIO, EN UNA POSICION DEL 70-80 POR 100 DEL RECORRIDO TOTAL DE LA PLUMA DEL REGISTRADOR. TODOS LOS PICOS DEBEN REGISTRARSE A LA MISMA SENSIBILIDAD, LO CUAL SUELE SER PERFECTAMENTE FACTIBLE EN LA GRASA DE LECHE; EN AQUELLOS CASOS EN QUE LA RELACION ENTRE EL PICO MAYORITARIO Y EL PICO MINORITARIO NO PERMITA REGISTRAR ESTE ULTIMO CON LAS DIMENSIONES ADECUADAS PARA EFECTUAR UNA CUANTIFICACION CORRECTA DE SU AREA, SE PODRA EFECTUAR EL CAMBIO NECESARIO EN LA ATENUACION DEL REGISTRO, PROCURANDO QUE ESTA NO SOBREPASE LA RELACION DE 4 : 1. SI FUESE NECESARIO, SE DILUIRA LA SOLUCION CON HEPTANO NORMAL EN LA RELACION NECESARIA PARA PODER AJUSTARSE A LAS PRESCRIPCIONES FINADAS. EFECTUAR, CUANDO MENOS, TRES DETERMINACIONES CONSECUTIVAS, QUE NO DEBEN DISCREPAR ENTRE SI MAS DEL 1 POR 100.

46.5. CALCULOS.

(FORMULAS OMITIDAS)

46.5.3. CALCULO DE LOS FACTORES DE CORRECCION.-UNA VEZ DETERMINADAS LAS AREAS DE TODOS LOS PICOS, SIGUIENDO LAS NORMAS QUE SE CONTIENEN EN EL APARTADO 46.4.2.2, SE CALCULA EL FACTOR DE CADA ACIDO, REFERIDO AL ACIDO PALMITICO TOMADO COMO UNIDAD, UTILIZANDO LA FORMULA QUE SE INCLUYE EN EL APARTADO 46.5.1, SUSTITUYENDO EL AREA AP Y EL PESO P DEL COMPUESTO PATRON POR LOS VALORES CORRESPONDIENTES AL PALMITATO DE METILO.

46.5.4. CALCULO DE COMPOSICION DE LA FRACCION DE ACIDOS GRASOS.-SE CALCULARAN LAS AREAS CORREGIDAS DE CADA UNO DE LOS COMPONENTES DE LA FRACCION MULTIPLICANDO EL AREA MEDIDA EN EL REGISTRO POR EL FACTOR DE CORRECCION DETERMINADO SEGUN SE INDICA EN EL APARTADO ANTERIOR. EL CONTENIDO DE CADA COMPONENTE VENDRA DADO POR LA EXPRESION:

(FORMULA OMITIDA)

46.6. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO NACIONAL DE RACIONALIZACION Y NORMALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA. 55.118.

47 FOSFORO

47.1. PRINCIPIO.

INCINERACION DE LA MUESTRA EN PRESENCIA DE OXIDO DE CINC, SEGUIDA DE LA MEDIDA COLORIMETRICA DEL FOSFORO COMO AZUL DE MOLIBDENO.

APLICABLE A ACEITES VEGETALES BRUTOS, DESGOMADOS Y REFINADOS.

47.2 MATERIAL Y APARATOS.

47.2.1. CRISOLES DE PORCELANA DE 50 ML DE CAPACIDAD.

47.2.2. VIDRIOS DE RELOJ.

47.2.3. PLACA DE CALEFACCION ELECTRICA, CON REGULADOR DE TEMPERATURA.

47.2.4. HORNO DE MUFLA.

47.2.5. EMBUDO DE VIDRIO DE VASTAGO CORTO DE 50 MM DE DIAMETRO.

47.2.6. PAPEL DE FILTRO DE 90 MM DE DIAMETRO, ALBET 242 O SIMILAR.

47.2.7. FRASCO LAVADOR DE UN LITRO DE CAPACIDAD CON CUELLO PROTEGIDO DEL CALOR.

47.2.8. MATRACES AFORADOS DE 50, 100, 250 Y 500 ML DE CAPACIDAD PROVISTOS DE TAPONES DE VIDRIO.

47.2.9. PIPETAS DE 2, 5, 10 Y 25 ML DE CAPACIDAD.

47.2.10. PIPETASDE 10 ML DE CAPACIDAD, DIVIDIDAS EN DECIMAS DE MILILITRO.

47.2.11. ESPECTROFOTOMETRO PARA MEDICION EN EL VISIBLE.

47.2.12. CUBETAS ESPECTROFOTOMETRICAS DE 10 MM DE PASO.

47.3. REACTIVOS.

47.3.1. ACIDO CLORHIDRICO (D=1,19).

47.3.2. OXIDO DE CINC.

47.3.3. HIDROXIDO POTASICO.

47.3.4. ACIDO SULFURICO (D=1,84).

47.3.5. MOLIBDATO SODICO.

47.3.6. SULFATO DE HIDRACINA.

47.3.7. FOSFATO ACIDO MONOPOTASICO, DESECADO A 103+-2 GRADOS C DURANTE DOS HORAS ANTES DE USARLO.

47.3.8. DISOLUCION DE MOLIBDATO SODICO.- AÑADIR CON PRECAUCION 140 ML DE ACIDO SULFURICO A 300 ML DE AGUA DESTILADA. DEJAR ENFRIAR LA TEMPERATURA AMBIENTE, AÑADIR 12,5 G DE MOLIBDATO SODICO Y DISOLVER TOTALMENTE. LLEVAR A UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML, DILUIR CON AGUA DESTILADA HASTA EL ENRASE, HOMOGENEIZAR Y DEJAR REPOSAR DURANTE VEINTICUATRO HORAS, POR LO MENOS, ANTES DE USARLA.

47.3.9. DISOLUCION DE SULFATO DE HIDRACINA AL 0,015 POR 100.-DISOLVER EN UN MATRAZ AFORADO 0,15 G DE SULFATO DE HIDRACINA EN UN LITRO DE AGUA DESTILADA.

47.3.10. DISOLUCION DE HIDROXIDO POTASICO AL 50 POR 100 (M/M). DISOLVER 50 G DE HIDROXIDO POTASICO EN 50 ML DE AGUA DESTILADA.

47.3.11. DISOLUCION DE FOSFATO ACIDO MONOPOTASICO.- DISOLVER 1,0967 G DE FOSFATO MONOPOTASICO SECO EN AGUA DESTILADA. DILUIR A 250 ML EN UN MATRAZ AFORADO Y AGITAR. ESTA DISOLUCION CONTIENE 1 MG DE FOSFORO POR MILILITRO. A CONTINUACION VERTER, CON UNA PIPETA, 5 ML DE LA DISOLUCION ANTERIOR EN UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML Y ENRASAR CON AGUA DESTILADA. ESTA DISOLUCION CONTIENE 0,01 MG DE FOSFORO POR MILILITRO.

47.4. PROCEDIMIENTO.

47.4.1. CONSTRUCCION DE LA CURVA PATRON.-TOMAR, MEDIANTE PIPETA, 1, 2, 4, 6, 8 Y 10 ML DE LA DISOLUCION 47.3.11, E INTRODUCIR EN MATRACES AFORADOS DE 50 ML. COMPLETAR EL VOLUMEN A 10 ML CON AGUA DESTILADA, UTILIZANDO LA PIPETA 47.2.10, CONTINUANDO COMO SE DESCRIBE EN 47.4.3 A PARTIR DE LA ADICION DE SULFATO DE HIDRACINA. LAS ALICUOTAS TOMADAS DE LA DISOLUCION CONTIENEN 0,01, 0,02, 0,04, 0,06, 0,08 Y 0,10 MG DE FOSFORO. A CONTINUACION REPRESENTAR GRAFICAMENTE LOS VALORES DE ABSORBENCIA FRENTE A LOS CONTENIDOS EN FOSFORO, EXPRESADO EN MG.

47.4.2. PREPARACION DE LA MUESTRA.-PASAR, CON PRECISION DE 1 MG, DE 3 A 3,2 G DE MUESTRA EN UN CRISOL DE PORCELANA Y AÑADIR 0,5 G DE OXIDO DE CINC. CALENTAR LENTAMENTE EN LA PLACA ELECTRICA HASTA QUE LA MUESTRA SE ESPESE Y ENTONCES AUMENTAR GRADUALMENTE LA CALEFACCION HASTA QUE LA MASA ESTE COMPLETAMENTE CARBONIZADA. COLOCAR EL CRISOL EN EL HORNO DE MUFLA A UNA TEMPERATURA DE 550-600 GRADOS C, MANTENIENDOLO DURANTE DOS HORAS. UNA VEZ TRANSCURRIDO ESE TIEMPO, DEJAR ENFRIAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE.

AÑADIR A LAS CENIZAS 5 ML DE AGUA DESTILADA Y 5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO. CUBRIR EL CRISOL CON UN VIDRIO DE RELOJ Y CALENTAR SUAVEMENTE A EBULLICION DURANTE CINCO MINUTOS. FILTRAR LA DISOLUCION RECOGIENDO EL FILTRADO EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML. LAVAR LA PARTE INTERIOR DEL VIDRIO DE RELOJ Y LAS PAREDES DEL CRISOL CON 5 ML DE AGUA DESTILADA CALIENTE, USANDO UN FRASCO LAVADOR CON CHORRO DE AGUA FINISIMO. LAVAR EL CRISOL Y EL PAPEL DE FILTRO CON CUATRO PORCIONES DE 5 ML DE AGUA DESTILADA CALILENTE. ENFRIAR LA DISOLUCION A TEMPERATURA AMBIENTE Y NEUTRALIZAR HASTA DEBIL TURBIDEZ, ADICIONANDO UNAS GOTAS DE POTASA AL 50 POR 100. AÑADIR ACIDO CLORHIDRICO GOTA A GOTA HASTA QUE EL PRECIPITADO DE OXIDO DE CINC SE DISUELVA Y ENTONCES AÑADIR DOS GOTAS MAS. DILUIR HASTA 100 ML CON AGUA DESTILADA Y AGITAR.

47.4.3. DETERMINACION.

PASAR, MEDIANTE PIPETA, 10 ML DE ESTA DISOLUCION A UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML. AÑADIR 8 ML DE LA DISOLUCION DE SULFATO DE HIDRACINA Y A CONTINUACION 2 ML DE LA DISOLUCION DE MOLIBDATO SODICO. TAPAR E INVERTIR EL MATRAZ AFORADO DOS O TRES VECES, QUITAR EL TAPON Y CALENTAR DURANTE 10+-0,5 MINUTOS EN BAÑO DE AGUA HIRVIENDO. TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO RETIRAR DEL BAÑO, ENFRIAR A 25+-5 GRADOS C EN BAÑO DE AGUA, DILUIR HASTA EL ENRASE CON AGUA DESTILADA Y MEZCLAR PERFECTAMENTE. LLENAR UNA CUBETA DEL ESPECTROFOTOMETRO Y MEDIR LA ABSORBANCIA A 650 NM UTILIZANDO COMO REFERENCIA AGUA DESTILADA.

REALIZAR UN ENSAYO EN BLANCO COMO SE HA DESCRITO, PERO SIN AÑADIR ACEITE.

47.5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN FOSFORO, EXPRESADO EN TANTO POR CIENTO, MEDIANTE LA SIGUIENTE FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

47.6. OBSERVACIONES.

47.6.1. NO DEBE DEMORARSE LA LECTURA ESPECTROFOTOMETRICA UNA VEZ CONSEGUIDO EL DESARROLLO DEL COLOR.

47.6.2. EN EL CASO DEL ACEITE DE SOJA EL VALOR DE V ES PRACTICAMENTE IGUAL A 30.

47.7. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO NACIONAL DE RACIONALIZACION Y NORMALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA. 55.108-73.

48. GRASA NEUTRA

48.1. PRINCIPIO.

RETENCION DE LOS ACIDOS GRASOS LIBRES Y SUSTANCIAS NO GRASAS POR CROMATOGRAFIA EN COLUMNA DE ALUMINA. LOS PRODUCTOS NO RETENIDOS EN LA COLUMNA SE PESAN, OBTENIENDOSE POR DIFERENCIA A 100 LOS ACIDOS GRASOS LIBRES E IMPUREZAS RETENIDAS EN LA COLUMNA.

NO ES APLICABLE CON CARACTER GENERAL A LOS ACEITES DE ORUJOS.

48.2. MATERIAL Y APARATOS

48.2.1. EQUIPO PARA CROMATOGRAFIA EN COLUMNA, COMPUESTO DE:

48.2.1.1. COLUMNA DE VIDRIO, PROVISTA DE UNA PLACA DE VIDRIO POROSA NUMERO 2, CORRESPONDIENTE A UN DIAMETRO MEDIO DE PORO DE 40 A 90 U (FIG 48.1).

48.2.1.2. DEPOSITO DE DISOLVENTE PARA LA ALIMENTACION DE LA COLUMNA (FIG. 48.2).

48.2.1.3. SOPORTE PARA EL MANEJO DEL FRASCO DE PESADA (FIG. 48.3).

48.2.1.4. FRASCO DE PESADA DE UNOS 20 ML DE CAPACIDAD (FIG. 48.4).

48.2.1.5. TUBO DE PROLONGACION PARA EL VACIADO DEL FRASCO DE PESADA EN LA COLUMNA (FIG. 48.5).

48.2.1.6. MATRAZ REDONDO, FONDO PLANO, DE VIDRIO PYREX O SIMILAR, DE 250 ML DE CAPACIDAD Y BOCA ESMERILADA NORMALIZADA 29/32

48.2.2. AMPOLLA DE DECANTACION DE 125 ML DE CAPACIDAD, CON LLAVE DE VIDRIO.

48.2.3. FRASCO LAVADOR DE UNOS 125 ML DE CAPACIDAD.

48.2.4. ESTUFA DE VACIO QUE PERMITA CALENTAR HASTA 110 GRADOS C COMO MINIMO Y REGULACION DE +-1 GRADO C. LA TEMPERATURA SERA ADEMAS UNIFORME EN TODO EL ESPACIO INTERIOR, TOLERANDOSE DIFERENCIAS QUE NO SUPEREN 1 GRADO C ENTRE POSICIONES EXTREMAS.

48.2.5. HORNO DE MUFLA CAPAZ DE ALCANZAR UNA TEMPERATURA DE 800 GRADOS C Y REGULACION DE +-5 GRADOS C.

48.2.6. DESECADOR CONTENIENDO UN AGENTE DESECANTE APROPIADO.

48.2.7. EVAPORADOR ROTATORIO.

48.2.8. CAPSULAS DE PORCELANA, FONDO REDONDO DE 50 MM 0 Y 20 MM DE ALTURA.

48.2.9. PESA SUSTANCIAS DE VIDRIO, DE 60 MM 0 INTERIOR Y 40 DE ALTURA.

48.2.10. TUBO DE CROMATOGRAFIA, DE 10 CM DE LONGITUD Y 1,5 CENTIMETROS DE DIAMETRO INTERIOR, PROVISTO DE LLAVE ESMERILADA CON ORIFICIO DE PASO DE 1,5 A 2 MM Y PLACA FILTRANTE DE VIDRIO POROSIDAD NUMERO 2, CORRESPONDIENTE A UN TAMAÑO MEDIO DE PORO DE 40 A 90 (MICROS).

(FIGURAS OMITIDAS)

48.3. REACTIVOS.

48.3.1. ETER ETILICO.

48.3.2. METANOL ANHIDRO.

48.3.3. ETER ETILICO-METANOL.-MEZCLAR 975 ML DE 48.3.1 Y 25 ML DE 48.3.2.

48.3.4. HEXANO, CON UN CONTENIDO MAXIMO DE 0,5 POR 100 DE AROMATICOS.

48.3.5. ALUMINA PARA CROMATOGRAFIA EN COLUMNA DE LAS SIGUIENTES CARACTERISTICAS: PH EN SUSPENSION ACUOSA AL 5 POR 100; 7,0+-0,5; ACTIVIDAD IV SEGUN BROCKMANN (VER 48.6.1). GRANULOMETRIA.-EL ANALISIS GRANULOMETRICO DEL PRODUCTO DEBE DAR UN CONTENIDO INFERIOR AL 10 POR 100 DE PARTICULAS CON UN GROSOR IGUAL O INFERIOR A 63 MICRAS, CON UNA MEDIDA ESTADISTICA PARA LA TOTALIDAD DE 120 MICRAS +- 5 POR 100.

48.3.6. P-AMINO-AZO-BENCENO.

48.3.7. ROJO SUDAN (SUDAN II) (XILENO-AZO-(BETA)-NAFTOL).

48.3.8. AMARILLO SUDAN (SUDAN I) (BENCENO-AZO-(BETA)-NAFTOL).

48.3.9. BENCENO PURISIMO, EXENTO DE TIOFENO.

48.4. PROCEDIMIENTO.

48.4.1. PREPARACION DE LA COLUMNA ALUMINA.

PESAR, CON APROXIMACION DE 0,5 G, 20 G DE ALUMINA E INTRODUCIRLOS EN UNA AMPOLLA DE EXTRACCION DE 125 ML, AGREGANDO DESPUES 50 ML DE DISOLVENTE 48.3.3, CON EL QUE SE LLENA TAMBIEN LA COLUMNA HASTA OCUPAR, APROXIMADAMENTE, 2/3 DE SU CAPACIDAD. COLOCAR LA AMPOLLA ENCIMA DE LA COLUMNA, DE MANERA QUE EL TUBO DE SALIDA COINCIDA CON EL EXTREMO SUPERIOR DE LA COLUMNA. ABRIR LA LLAVE DE LA AMPOLLA DEJANDO SALIR LA PAPILLA DE ALUMINA Y DISOLVENTE QUE CAERA EN EL INTERIOR DE LA COLUMNA; AL MISMO TIEMPO, ABRIR LA LLAVE DE LA COLUMNA, REGULANDO LA SALIDA DEL DISOLVENTE DE FORMA QUE EL NIVEL DE LIQUIDO EN EL INTERIOR DE LA COLUMNA SE MANTENGA PRACTICAMENTE CONSTANTE, PROCURANDO MAS BIEN QUE EL NIVEL SUBA EN LUGAR DE DISMINUIR. CUANDO TODA LA PAPILLA DE ALUMINA HAYA PASADO A LA COLUMNA, ARRASTRAR LAS ULTIMAS PORCIONES ADHERIDAS A LAS PAREDES, ENJUAGANDO EL RECIPIENTE CON UN POCO DEL MISMO DISOLVENTE. MANTENER ABIERTA LA LLAVE DE LA COLUMNA, DEJANDO SALIR LENTAMENTE EL DISOLVENTE HASTA QUE EL NIVEL SE HAYA SITUADO A LA ALTURA DEL RELLENO DE ALUMINA. AGREGAR HEXANO A LA COLUMNA HASTA SITUAR EL NIVEL A 1 CM, APROXIMADAMENTE, DEL EXTREMO INFERIOR DEL CONO ESMERILADO.

48.4.2. PREPARACION DE LA MUESTRA DE GRASA.

INTRODUCIR EL FRASCO DE MUESTRA EN UNA ESTUFA DE AIRE REGULADA A LA TEMPERATURA NECESARIA PARA CONSEGUIR LA FUSION COMPLETA DE LA MUESTRA, LO QUE SE CONSIGUE NORMALMENTE CALENTANDO DE 30 A 40 GRADOS C. CONSEGUIDA LA FUSION, SI SE OBSERVA LA PRESENCIA DE SEDIMENTOS O MATERIA EN SUSPENSION NO FUNDIBLE, AGITAR OBSERVA FUERTEMENTE EL FRASCO HASTA CONSEGUIR LA HOMOGENEIZACION DE SU CONTENIDO Y, UNA VEZ CONSEGUIDO, EFECTUAR INMEDIATAMENTE LA PESADA DE LA MUESTRA EN EL FRASCO DE PESADA (FIG. 4).

48.4.3. FRACCIONAMIENTO CROMATOGRAFICO.

PESAR, CON APROXIMACION DE 0,2 MG, 5 G DE MUESTRA EN EL FRASCO DE PESADA (FIG. 3). UNA VEZ EFECTUADA LA PESADA, SEPARAR DEL SOPORTE EL FRASCO CON EL ACEITE, AJUSTANDO EL TUBO DE PROLONGACION (FIG. 5) AL CONO SITUADO EN LA PARTE INFERIOR DEL FRASCO.

AJUSTAR EL FRASCO, CON EL TUBO DE PROLONGACION, A LA BOCA SUPERIOR DE LA COLUMNA CROMATOGRAFICA Y VERTER EN EL INTERIOR DEL FRASCO CON EL ACEITE EL DISOLVENTE 48.3.3, UTILIZANDO EL FRASCO LAVADOR Y DIRIGIENDO EL CHORRO A LAS PAREDES CON EL FIN DE LAVAR Y ARRASTRAR HACIA EL FONDO EL ACEITE QUE HAYA PODIDO QUEDAR ADHERIDO A LA SUPERFICIE; CON EL MISMO CHORRO SE MEZCLARA TODO EL CONTENIDO PARA CONSEGUIR LA HOMOGENEIZACION DE LA DISOLUCION DE ACEITE.

CONTINUAR AGREGANDO DISOLVENTE HASTA QUE EL NIVEL QUEDE LIGERAMENTE POR DEBAJO DEL EXTREMO SUPERIOR DEL SIFON; DIRIGIENDO EL CHORRO A LA PARED LATERAL SUPERIOR, SEGUIR AGREGANDO CUIDADOSAMENTE HASTA QUE EL NIVEL LIQUIDO SOBREPASE LIGERAMENTE LA ALTURA DEL SIFON Y COMIENCE A CAER POR EL TUBO VERTIENDO EN LA COLUMNA CROMATOGRAFICA.

AJUSTAR EL DEPOSITO DEL DISOLVENTE (FIG. 2) A LA BOCA DEL FRASCO, CARGANDOSE CON 125 ML DE DISOLVENTE, COLOCAR EL MATRAZ DE 250 ML, PREVIAMENTE DESECADO A 105 GRADOS C Y PESADO, A LA SALIDA DE LA COLUMNA, CON EL FIN DE RECOGER EL A LIQUIDO QUE FLUYE DE LA MISMA. ABRIR LA LLAVE DEL DEPOSITO Y LA DE LA COLUMNA, REGULANDOSE AMBAS DE FORMA QUE EL LIQUIDO FLUYA EN EL MATRAZ A UNA VELOCIDAD DE 4-5 ML POR MINUTO, MANTENIENDOSE EL NIVEL EN EL FRASCO POR ENCIMA DEL EXTREMO SUPERIOR DEL SIFON. SI EL DISOLVENTE NO FLUYE AL FRASCO POR LA LLAVE DEL DEPOSITO, TAPAR EL TUBO HASTA QUE COMIENCE EL FLUJO; QUITAR EL TAPON Y CONTINUAR LA OPERACION NORMALMENTE. EL DESARROLLO QUEDARA TERMINADO CUANDO HAYA PASADO LA TOTALIDAD DEL LIQUIDO Y NO CAIGA DISOLVENTE EN EL MATRAZ.

LA DISOLUCION RECOGIDA EN EL MATRAZ SE CONCENTRA EN UN EVAPORADOR ROTATORIO CON VACIO, CALENTANDO A LA TEMPERATURA CONVENIENTE PARA EVITAR UNA EBULLICION TUMULTUOSA QUE PUDIERA PROVOCAR PROYECCIONES VIOLENTAS DEL LIQUIDO.

UNA VEZ ELIMINADO EL DISOLVENTE, LLEVAR EL MATRAZ A UNA ESTUFA DE VACIO PARA ELIMINAR LOS RESIDUOS VOLATILES QUE QUEDEN EN EL ACEITE, MANTENIENDOSE EL MATRAZ EN LA ESTUFA DURANTE UNA HORA. SACAR Y PASAR A UN DESECADOR, DONDE SE DEJA ENFRIAR, PESANDO A CONTINUACION. REPETIR ESTE TRATAMIENTO EN OPERACIONES SUCESIVAS, HASTA CONSEGUIR PESO CONSTANTE, CON PRECISION DEL MG.

(FORMULA OMITIDA)

48.6. OBSERVACIONES.

48.6.1. LA DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DE LA ALUMINA SEGUN BROCKMANN SE REALIZA EN LA FORMA SIGUIENTE:

LA ALUMINA QUE SE HA DE ENSAYAR SE INTRODUCE EN LA COLUMNA CROMATOGRAFICA 48.2.10, PROCURANDO CONSEGUIR UNA DISTRIBUCION HOMOGENEA, FORMANDO UNA CAPA DE 5 CM DE ALTURA Y COLOCANDO EN LA PARTE SUPERIOR UN DISCO DE PAPEL DE FILTRO. PREPARAR UNA DISOLUCION MEZCLANDO 2 ML DE BENCENO, 8 ML DE HEXANO, 2 MG DE ROJO SUNDAN, 2 MG D P-AMINO-AZOBENCENO Y 2 MG DE AMARILLO SUDAN. VERTER LA DISOLUCION DE COLORANTES EN LA COLUMNA, ABRIR LA LLAVE Y DEJAR PASAR LA DISOLUCION HASTA QUE EL NIVEL LIQUIDO QUEDE JUSTAMENTE A LA ALTURA DE LA ALUMINA. VERTER A CONTINUACION EL LIQUIDO DE DESARROLLO CONSTITUIDO POR UNA MEZCLA DE BENCENO-HEXANO EN LA PROPORCION 4 : 1 EN VOLUMEN, DEL QUE SE HACEN PASAR POR LA COLUMNA 20 ML. LA VELOCIDAD DE SALIDA SE REGULA CON LA LLAVE, MANTENIENDO UN FLUJO DE 0,5 A 1 ML POR MINUTO, RECOGIENDO EL LIQUIDO EN UN MATRAZ CONICO DE BOCA ESTRECHA.

TERMINADO EL DESARROLLO, CON UNA ALUMINA DE GRADO IV QUE ES LA APROPIADA, EL AMARILLO SUDAN HABRA SIDO ELIMINADO TOTALMENTE DE LA COLUMNA, QUEDANDO RETENIDOS LOS OTROS DOS QUE APARECERAN EN DOS BANDAS: UNA INFERIOR ROJA, CORRESPONDIENTE AL ROJO SUDAN Y OTRA SUPERIOR AMARILLA CORRESPONDIENTE AL AMINO-AZO-BENCENO. UNA SITUACION DISTINTA DE ESTOS COLORANTES DEBERA INTERPRETARSE COMO UN GRADO DE ACTIVIDAD MAYOR O MENOR DEL PRODUCTO, REQUERIENDO EL AJUSTE DE SU CONTENIDO EN AGUA DE LA FORMA CONVENIENTE.

48.6.2 PREPARACION DE LA ALUMINA.

PARTIENDO DE UNA ALUMINA DE ACTIVIDAD SUPERIOR A IV, SE ADICIONARAN CANTIDADES CRECIENTES DE AGUA HASTA CONSEGUIR EN EL ENSAYO DE ACTIVIDAD, REALIZADO COMO SE INDICA EN EL APARTADO 48.6.1, EL GRADO IV NECESARIO.

EFECTUADO ESTO, SI SE DISPONE DE UNA PARTIDA RELATIVAMENTE IMPORTANTE DE ALUMINA, ES CONVENIENTE DETERMINAR SU HUMEDAD, SIGUIENDO LA METODICA QUE SE DESCRIBE EN 4.6.3, CONOCIDO ESTE DATO, EN OPERACIONES SUCESIVAS, BASTARA CON DETERMINAR LA HUMEDAD DE LA ALUMINA, CALCULANDO LA CANTIDAD DE AGUA QUE HAY QUE AÑADIR PARA OBTENER SU PRODUCTO DE ACTIVIDAD IV.

PARA INCORPORAR A LA ALUMINA UNA DETERMINADA CANTIDAD DE AGUA, SE PROCEDERA DE LA FORMA SIGUIENTE: INTRODUCIR LA ALUMINA PESADA EN UN MATRAZ O FRASCO CON TAPON ESMERILADO CON UNA CAPACIDAD APROXIMADAMENTE EL DOBLE DEL VOLUMEN DE ALUMINA. AGREGAR EL PESO CALCULADO DE AGUA DESTILADA, TAPAR EL RECIPIENTE Y AGITAR HASTA CONSEGUIR LA HOMOGENEIZACION DEL PRODUCTO. MANTENER EL FRASCO CERRADO DURANTE 48 HORAS COMO MINIMO, AGITANDOLO DURANTE ESTE TIEMPO UNAS 10 O 12 VECES POR LO MENOS. DESPUES DE ESTE TRATAMIENTO LA ALUMINA DEBE ESTAR LISTA PARA SU UTILIZACION.

48.6.3. DETERMINACION DE LA HUMEDAD DE LA ALUMINA.

EN UNA CAPSULITA DE PORCELANA PESAR, CON PRECISION DE 1 MILIGRAMO, 1 G DE ALUMINA. INTRODUCIR EN LA MUFLA DEL HORNO Y MANTENERLA 2 HORAS A 600 GRADOS C. DEJAR ENFRIAR PARCIALMENTE E INTRODUCIR EN UN PESASUSTANCIAS DE DIMENSIONES ADECUADAS; TAPAR Y LLEVAR A UN DESECADOR DONDE SE MANTIENE HASTA ADQUIRIR LA TEMPERATURA AMBIENTE. PESAR LA TOTALIDAD, SIN DESTAPAR EL PESASUSTANCIAS.

PREVIAMENTE LA CAPSULA VACIA SE HABRA CALENTADO EN EL HORNO A 600 GRADOS C, DURANTE MEDIA HORA COMO MINIMO; Y EL PESASUSTANCIAS, EN UNA ESTUFA DE AIRE A 105 GRADOS C, DURANTE UNA HORA, DEJANDOLOS ENFRIAR EN EL DESECADOR. LAS PIEZAS ASI DESECADAS SE PESARAN VACIAS.

(FORMULA OMITIDA)

48.7. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO DE RACIONALIZACION Y NORMALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA, 55.105.

ANEJO II

METODOS DE ANALISIS DE PRODUCTOS CARNICOS

1. PREPARACION DE LA MUESTRA PARA EL ANALISIS

1.1. PRINCIPIO.

LAS OPERACIONES DESCRITAS A CONTINUACION TIENEN POR FINALIDAD CONSEGUIR UNA MUESTRA PARA EL ANALISIS LO MAS HOMOGENEA POSIBLE. POR ELLO, TODA SIMPLIFICACION O TRATAMIENTO INSUFICIENTE EN ESTA OPERACION PUEDE CONDUCIR A UNOS RESULTADOS QUE NO SEAN REPRESENTATIVOS.

1.2. MATERIAL Y APARATOS.

1.2.1. CUCHILLO.

1.2.2. TRITURADORAS ELETRICAS DE DISTINTO GRADO DE FINURA EN EL PICADO.

1.2.3. FRASCOS DE VIDRIO DE 250 ML DE CAPACIDAD, DE COLOR TOPACIO, BOCA ANCHA Y TAPON ESMERILADO.

1.2.4. CAPSULAS DE PORCELANA DE 20 CM DE DIAMETRO.

1.3. PROCEDIMIENTO.

1.3.1. TOMAR UNA MUESTRA REPRESENTATIVA DE 200 G.

1.3.2. QUITAR LA PIEL SI LA TUVIERE (EMBUTIDOS, ETC.).

1.3.3. PARTIRLA CON CUCHILLO EN RODAJAS O TROZOS DE 0,5-1 CM.

1.3.4. CORTAR LOS TROZOS EN PEQUEÑOS CUBOS.

1.3.5. PASARLOS VARIAS VECES POR TRITURADORA HASTA CONSEGUIR UNA MEZCLA HOMOGENEA.

1.3.6. LA MUESTRA, BIEN HOMOGENEIZADA DEBE GUARDARSE INMEDIATAMENTE EN LOS FRASCOS, LIMPIOS Y SECOS, DE FORMA QUE QUEDEN LLENOS, PARA PREVENIR PERDIDAS DE HUMEDAD.

1.3.7. CONSERVARLOS EN REFRIGERACION DE FORMA QUE EVITE SU DETERIORO Y CUALQUIER CAMBIO EN SU COMPOSICION.

1.3.8. TOMAR LAS MUESTRAS PARA LAS DIFERENTES DETERMINACIONES A SER POSIBLE DENTRO DE LAS 24 HORAS SIGUIENTES.

2. ALMIDON

(METODO CUALITATIVO)

2.1. PRINCIPIO.

EL ALMIDON REACCIONA CON EL IODO DANDO COLORACION AZUL.

2.2. MATERIAL Y APARATOS.

2.2.1. ERLENMEYER DE 150 ML DE CAPACIDAD.

2.2.2. FRASCO CUENTAGOTAS.

2.2.3. PIPETA DE 10 ML DE CAPACIDAD.

2.3. REACTIVOS.

2.3.1. SOLUCION IODO-IODURADA:

MEZCLAR 1 G DE IODO Y 2 G DE IODURO POTASICO EN AGUA DESTILADA HASTA 200 ML.

MANTENER LA SOLUCION EN EL FRASCO CUENTAGOTAS.

2.4. PROCEDIMIENTO.

2.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA:

COMO EN EL METODO 1.

2.4.2. VALORACION:

INTRODUCIR 10 G DE LA MUESTRA PREPARADA COMO 2.4.1 EN UN ERLENMEYER DE 150 ML. AÑADIR 40 ML DE AGUA DESTILADA. HERVIR DURANTE 5 MINUTOS. TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO ENFRIAR EXTERIORMENTE EL MATRAZ EN CORRIENTE DE AGUA FRIA.

CON PIPETA DE 10 ML ATRAVESAR LA CAPA GRASA SUPERIOR, TOMANDO 10 ML DEL LIQUIDO INFERIOR, TRANSVASANDOLES A UN TUBO DE ENSAYO. AÑADIR 5 GOTAS DE LA SOLUCION 2.3.1. 2.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

EN PRESENCIA DE ALMIDON APARECERA UNA COLORACION AZUL-NEGRA.

3. ALMIDON

(METODO CUANTITATIVO)

3.1. PRINCIPIO.

EXTRACCION DE AZUCARES SIMPLES CON ETANOL CALIENTE 80 POR 100, PERMANECIENDO EL ALMIDON.-EL RESIDUO DE ALMIDON SE SOLUBILIZA CON ACIDO PERCLORICO DILUIDO, Y MEDIDA A 630 NM DEL COLOR DESARROLLADO AL CALENTARLO CON EL REACTIVO ANTRONA-SULFURICO.

3.2. MATERIAL Y APARATOS.

3.2.1. BALANZA ANALITICA.

3.2.2. MATRACES AFORADOS DE 100 ML Y 200 ML.

3.2.3. TUBOS DE CENTRIFUGA, CONICOS, DE 100 ML.

3.2.4. PIPETAS GRADUADAS DE 10 ML, 25 ML, 5 ML Y 2 ML.

3.2.5. CENTRIFUGA DE 2.500 R.P.M.

3.2.6. BAÑO DE AGUA.

3.2.7. BAÑO DE AGUA TERMOSTATABLE HASTA 25 GRADOS C.

3.2.8. PROBETA GRADUADA DE 25 ML.

3.2.9. PAPEL DE FILTRO WHATMAN NUMERO 12, O EQUIVALENTE.

3.2.10. ESPECTROFOTOMETRO CAPAZ DE LECTURAS DE 630 NM.

3.3. REACTIVOS.

3.3.1. DISOLUCION DE ACIDO SULFURICO-ANTRONA.-DISOLVER 0,2 G DE ANTRONA EN 100 ML DE H2SO4. EL RECATIVO SIRVE PARA 3-4 DIAS CONSERVANDOLO A 0 GRADOS C.

3.3.2. GLUCOSA PATRON.-DISOLVER 0,1 G DE GLUCOSA ANHIDRICA EN 100 ML DE AGUA.

3.3.3. ACIDO PERCLORICO AL 52 POR 100.

3.3.4. ETANOL AL 80 POR 100.

3.3.5. ETANOL PURO.

3.3.6. ETER DE PETROLEO.

3.3.7. DISOLUCION ETANOL-ETER DE PETROLEO (1/3) (V/V).

3.4. PROCEDIMIENTO.

3.4.1. EXTRACCION DE AZUCAR Y DE GRASA.-PESAR 2 G DE CARNE TRITURADA PREPARADA COMO EN EL METODO 1 EN UN TUBO CENTRIFUGO CONICO DE 100 ML. AÑADIR 25 ML DE DISOLUCION ETANOL-ETER DE PETROLEO (1-3), TAPAR CON TAPON, AGITAR VIGOROSAMENTE Y CENTRIFUGAR A 2.500 R. P. M. DURANTE 5 MINUTOS. DECANTAR Y DEJAR A UN LADO LA DISOLUCION ETANOL-ETER DE PETROLEO. AÑADIR 10 ML DE ETANOL CALIENTE AL 80 POR 100, AGITAR Y CENTRIFUGAR A 2.500 R. P. M. DURANTE 5 MINUTOS. DEJAR A UN LADO LA DISOLUCION ALCOHOLICA CON ETANOL CALIENTE.

3.4.2. EXTRACCION DE ALMIDON.-AÑADIR 5 ML DE AGUA AL RESIDUO Y REMOVER. AÑADIR 6,5 ML DE DISOLUCION DE ACIDO PERCLORICO DILUIDO (52 POR 100); REMOVER O AGITAR DURANTE 5 MINUTOS. DEJAR REPOSAR DURANTE 15 MINUTOS. AÑADIR 20 ML DE AGUA Y CENTRIFUGAR DURANTE 5 MINUTOS. VERTER LA DISOLUCION DE ALMIDON EN UN FRASCO VOLUMETRICO DE 100 ML. AÑADIR 6,5 ML DE DISOLUCION DE ACIDO PERCLORICO (52 POR 100) Y REMOVER. DEJAR REPOSAR DURANTE TREINTA MINUTOS. REMOVER Y LAVAR EL CONTENIDO ENTERO DEL TUBO EN EL FRASCO VOLUMETRICO QUE CONTIENE EL PRIMER EXTRACTO. LLEVAR A VOLUMEN Y FILTRAR POR PAPEL FILTRO (3.2.9.).

3.4.3. DETERMINACION DE ALMIDON.-DILUIR 5 ML DE DISOLUCION DE ALMIDON FILTRADA EN 200 ML CON AGUA DESTILADA. PIPETEAR 5 ML DE DICHA DISOLUCION EN UN TUBO, ENFRIAR EN BAÑO DE MARIA Y AÑADIR 10 ML DE ANTRONA REACTIVO (3.3.1.). MEZCLAR COMPLETAMENTE Y CALENTAR DURANTE 7,5 MINUTOS A 100 GRADOS C. QUITAR EL TUBO DEL BAÑO ENFRIAR CON RAPIDEZ A 25 GRADOS C Y DETERMINAR LA ABSORBANCIA A 630 MM. EL COLOR PERMANECE FIJO DURANTE TREINTA MINUTOS.

3.5. CALCULOS.

3.5.1. CURVA PATRON DE GLUCOSA.-DILUIR 1,2,5 Y 10 ML DE 3.3.2. HASTA 100 ML CON AGUA DESTILADA. A PARTIR DE LAS LECTURAS OBTENIDAS, DIBUJAR LA CURVA PATRON.

3.5.2. CONTENIDO EN ALMIDON DE LA MUESTRA:

% GLUCOSA= 0,04 . (SIMBOLO OMITIDO) DE GLUCOSA LEIDOS EN LA CURVA PATRON.

% ALMIDON= 1,06 . % GLUCOSA.

3.6. OBSERVACIONES.

3.6.1. TENIENDO EN CUENTA QUE EL CARRAGENATO SE DETERMINA COMO ALMIDON, SE DEBERA DEDUCIR DEL VALOR OBTENIDO DE ALMIDON EL CORRESPONDIENTE DE CARRAGENATO.

3.6.2. EN LOS PRODUCTOS QUE DECLAREN CONTENER CARRAGENATO Y HASTA QUE NO EXISTA TECNICA OFICIAL PARA SU DETERMINACION CUANTITATIVA, SE PERMITIRA UNA TOLERANCIA DEL 1,4 POR 100 EN EL VALOR OBTENIDO DE ALMIDON.

3.7. BIBLIOGRAFIA.

1. W. GLOVER, H. KIRSCHENBAUM Y A. CALDWELL (DEPARTAMENTO DE CONSUMO Y COMERCIALIZACION, MINISTERIO DE AGRICULTURA DE LOS ESTADOS UNIDOS, LABORATORIOS DE INSPECCION DE CARNE, NUEVA YORK, N.Y. 10011).

4 CONSERVADORES

(POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA).

4.1. PRINCIPIO.

EXTRACCION DE LOS CONSERVADORES POR MEDIO DE UNA MEZCLA DE ETER Y ETER DE PETROLEO Y POSTERIOR IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.

4.2. MATERIAL Y APARATOS.

4.2.1. HOMOGENEIZADOR.

4.2.2. MATRACES.

4.2.3. ERLENMEYER DE 25 Y 250 ML.

4.2.4. REFRIGERANTES DE REFLUJO.

4.2.5. FILTRO BUCHNER Y PAPEL DE FILTRO DE FILTRACION RAPIDA.

4.2.6. EMBUDOS Y PAPEL DE FILTRO PLEGADOS.

4.2.7. AMPOLLA DE DECANTACION DE 100 Y 250 ML.

4.2.8. CAPSULAS DE PORCELANA DE FONDO PLANO.

4.2.9. TUBOS PEQUEÑOS DE CRISTAL CON TAPON.

4.2.10. MATERIAL PARA CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA:

- CUBETA.

- MICROPIPETAS.

- SECADOR.

- FUENTE DE ULTRAVIOLETA.

- PLACAS DE POLIAMIDA (20 x 20) CON SOPORTE DE ALUMINIO Y REVELADOR DE FLUORESCENCIA INCORPORADO TIPO F-254 MERCK, O EQUIVALENTE.

4.3. REACTIVOS.

4.3.1. AOLUXION ACUOSA DE ACIDO SULFURICO AL 10 POR 100 (V/V).

4.3.2. REACTIVO DE CARREZ (PARA DEFECACION).

4.3.2.1. SOLUCION ACUOSA DE FERROCIANURO POTASICO AL 15 POR 100 (P/V).

4.3.2.2. SOLUCION ACUOSA DE ACETATO DE CINC AL 30 POR 100 (P/V).

4.3.3. CLORURO SODICO.

4.3.4. MEZCLA DE ETER Y ETER DE PETROLEO (1/1).

4.3.5. SOLUCION ACUOSA SATURADA DE CLORURO SODICO.

4.3.6. SULFATO DE SODIO ANHIDRO.

4.3.7. SOLUCIONES TESTIGO CONTENIENDO 3 G/1 EN LA MEZCLA A PARTES IGUALES DE ETER Y ETER DE PETROLEO DE LOS SIGUIENTES CONSERVADORES:

4.3.7.1. ACIDO SALICILICO.

4.3.7.2. ACIDO BENZOICO.

4.3.7.3. ACIDO CLOROBENZOICO.

4.3.7.4. ACIDO PARAHIDROXIBENZOICO.

4.3.7.5. ESTER ETILICO DEL ACIDO PARAHIDROXIBENZOICO.

4.3.7.6. ACIDO SORBICO.

4.3.8. ELUYENTES:

4.3.8.1. MEZCLA DE N-PENTANO, N-HEXANO, ACIDO ACETICO (10, 10, 3).

4.3.8.2. MEZCLA DE BENCENO, ACETATO DE ETILO, ACIDO ACETICO (85, 10, 5).

4.4. PROCEDIMIENTO.

4.4.1. EXTRACCION DE LOS CONSERVADORES.

TOMAR APROXIMADAMENTE 50 G DE LA MUESTRA PREPARADA COMO EN EL METODO 1 Y TRANSVARSARLA A UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML. AÑADIR 15 ML DE SOLUCION DE ACIDO SULFURICO AL 10 POR 100 DILUIDOS EN 60 ML DE AGUA HIRVIENDO. AÑADIR 10 ML DE SOLUCION DE FERROCIANURO POTASICO Y AGITAR; 10 ML DE SOLUCION DE ACETATO DE CINC Y AGITAR.

ADAPTAR EL REFRIGERANTE DE REFLUJO. SOMETER LA MEZCLA DURANTE TREINTA MINUTOS A EBULLICION BAJO UN LIGERO REFLUJO. FILTRAR RAPIDAMENTE EN CALIENTE SOBRE UN DISCO DE PAPEL DE FILTRO MOJADO COLOCADO SOBRE UN EMBUDO. EL FILTRADO QUEDA GENERALMENTE TURBIO. AÑADIR 2 ML DE FERROCIANURO POTASICO Y AGITAR 2 ML DE SOLUCION DE ACETATO DE CINC Y AGITAR. AÑADIR 20 G, APROXIMADAMENTE, DE CLORURO SODICO. FILTRAR EN CALIENTE (APROXIMADAMENTE A 80 GRAD. C) SOBRE FILTRO PLEGADO, MOJADO, DE FORMA QUE SE RETENGAN LAS GRASAS. ENFRIAR EL FILTRADO. TRASVASAR EL FILTRADO A UN EMBUDO DE DECANTACION DE 250 ML. EXTRAER LOS CONSERVADORES DE LA FASE ACUOSA POR MEDIO DE TRES LAVADOS CON 20 ML DE MEZCLA ETER Y ETER DE PETROLEO AGITANDO SUAVEMENTE DURANTE 10 MINUTOS, APROXIMADAMENTE, PARA EVITAR LA FORMACION DE UNA EMULSION. REUNIR LOS TRES EXTRACTOS ETEREOS Y ELIMINAR LA FASE ACUOSA. LAVAR DOS VECES LA FASE ETEREA CON 20 ML DE SOLUCION SATURADA DE CLORURO SODICO PARA ROMPER LAS EMULSIONES QUE EVENTUALMENTE HAYAN PODIDO FORMARSE Y DOS VECES CON 20 ML DE AGUA DESTILAA. TRANSVASAR LA SOLUCION ETEREA A UN MATRAZ DE 250 ML EN EL CUAL SE HAYA PUESTO EN EL FONDO UN GRAMO DE SULFATO SODICO ANHIDRO. TRAS DEJARLO DURANTE ALGUNOS MINUTOS EN CONTACTO, TRANSVASARLO A UNA PEQUEÑA CAPSULA DE PORCELANA DE FONDO PLANO. EVAPORAR EL DISOLVENTE A TEMPERATURA AMBIENTE (NO CALENTAR PARA EVITAR LA PERDIDA DE ACIDO BENZOICO). REDISOLVER EL DEPOSITO DE LA CAPSULA CON ALGUNAS GOTAS DE MEZCLA DE ETER Y ETER DE PETROLEO. LAVAR LA CAPSULA DOS O TRES VECES EN EL MISMO DISOLVENTE PARA OBTENER UN EXTRACTO DE UN VOLUMEN TOTAL, APROOXIMADAMENTE, DE 0,5 ML.

4.4.2. PREPARACION DEL CROMATOGRAMA.

DEPOSITAR LAS SOLUCIONES SEPARADAS SOBRE LA PLACA DE POLIAMIDA A 1 CM DEL BORDE POR MEDIO DE UNA MICROPIPETA (EL DIAMETO DE LAS MANCHAS NO DEBE SER MAYOR DE 1 A 2 MM). APLICAR DE LA MISMA FORMA LAS SOLUCIONES TESTIGO PARA COMPARAR, UNA VEZ DESARROLLADO EL CROMATOGRAMA, CON LAS MUESTRAS PROBLEMA, LO CUAL NOS EVITA MEDIR LOS RF. COLOCAR LA PLACA EN LA CUBETA. ELUIR HASTA QUE EL FRENTE DEL ELUYENTE HAYA RECORRIDO LOS DOS TERCIOS DE LA PLACA. SACAR LA PLACA Y SECAR.

4.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

4.5.1. EL ACIDO SALICILICO HA SIDO ESCOGIDO COMO SUSTANCIA DE REFERENCIA, POR PRODUCIR FLUORESCENCIA AZUL DE LAS MANCHAS QUE SE OBTIENEN EN LOS CROMATOGRAMAS CUANDO ESTOS SE PONEN BAJO LUZ ULTRAVIOLETA, POR LO CUAL PUEDEN SER IDENTIFICADOS FACIL Y RAPIDAMENTE, BIEN POR MEDIDA DE SUS RF O BIEN POR COMPARACION CON LAS MANCHAS PRODUCIDAS POR LAS SOLUCIONES TESTIGO.

4.5.2. RF DE LOS CONSERVADORES.

(FORMULA OMITIDA)

5.1. PRINCIPIO.

ATAQUE DEL PRODUCTO POR ACIDO SULFURICO CONCENTRADO, CATALIZADO CON SULFATO DE COBRE Y SELENIO, EN EL CUAL SE TRANSFORMA EL NITROGENO ORGANICO EN IONES AMONIO, QUE EN MEDIO FUERTEMENTE BASICO, PERMITE LA DESTILACION DEL AMONIACO, QUE ES RECOGIDO SOBRE ACIDO BORICO. LA POSTERIOR VALORACION CON ACIDO CLORHIDRICO PERMITE EL CALCULO DE LA CANTIDAD INICIALMENTE PRESENTE DE NITROGENO EN LA MUESTRA.

5.2. MATERIAL Y APARATOS.

5.2.1. BALANZA ANALITICA.

5.2.2. BATERIA CALEFACTORA.

5.2.3. PROBETAS DE 50 ML.

5.2.4. MATRACES KJELDAHL DE 800 ML.

5.2.5. EMBUDOS DE VASTAGO LARGO.

5.2.6. EMBUDOS DE 8 CM. DE DIAMETRO.

5.2.7. APARATO DE DESTILAION.

5.2.8. ERLENMEYER DE 200 ML.

5.2.9. BURETA DE CON DIVISIONES DE 0,1 ML.

5.2.10. FRASCOS DE 250 ML DE BOCA ANCHA CON ROSCA.

5.3. REACTIVO.

5.3.1. SULFATO DE COBRE.

5.3.2. SULFATO POTASSICO.

5.3.3. ACIDO SULFURICO CONCENTRADO, D=1,84.

5.3.4. SELENIO EN POLVO.

5.3.5. SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 40 POR 100.

5.3.6. SOLUCION DE ACIDO BORICO AL 4 POR 100.

5.3.7. ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N.

5.3.8. INDICADOR.

DISOLVER 2 G DE ROJO DE METILO Y 1 G DE AZUL DE METILENO EN 1.000 ML DE ETANOL AL 95 POR 100 (V/V). ESTE INDICADOR VIRA DE VIOLETA A VERDE A PH 5,4. CONSERVARLO EN FRASCO TOPACIO.

5.3.9. PIEDRA POMEZ.

5.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR, CON PRECISION DE 0,1 MG, 1-3 G DE LA MUESTRA, SEGUN CONTENIDO, PREPARADA SEGUN EL METODO 1. LLEVAR LA MUESTRA PESADA AL MATRAZ KJELDAHL, E INTRODUCIR SUCESIVAMENTE UNOS GRANOS DE PIEDRA POMEZ, 15 G DE SULFATO POTASICO, 0,5 G DE SULFATO DE COBRE, Y UNA PUNTA DE ESPATULA DE SELENIO EN POLVO. AGREGAR 25 ML DE ACIDO SULFURICO, MEZCLAR SUAVMENTE POR ROTACION Y COLOCAR EL MATRAZ EN UNA BATERIA CALEFACTORA, PONIENDO UN EMBUDO ADECUADO (5.2.5) EN LA BOCA. CALENTAR SUAVEMENTE AL PRINCIPIO, Y CUANDO EL CONJUNTO ADQUIERE UNA CIERTA DECOLORACION AUMENTAR LA INTENSIDAD DE CALEFACCION. AGITAR DE VEZ EN CUANDO CON SUAVIDAD POR ROTACION. UNA VEZ QUE EL LIQUIDO QUEDA TRANSPARENTE, CON UNA COLORACION AZUL VERDOSA, PROLONGAR LA EBULLICION AL MENOS HORA Y MEDIA. DEJAR ENFRIAR HASTA TEMPERATURA AMBIENTE Y AÑADIR CON PRECAUCION 100 ML DE AGUA, DISOLVIENDO POR ROTACION SUAVE EL SULFATO POTASICO CRISTALIZADO.

EN UN ERLENMEYER DE 200 ML PONER 25 ML DE ACIDO BORICO AL 4 POR 100 Y UNAS GOTAS DE INDICADOR (5.3.8). INTRODUCIR HASTA EL FONDO EN EL ERLENMEYER LA ALARGADERA DEL APARATO DE DESTILACION. COLOCAR EL MATRAZ EN EL APARATO DE DESTILACION, AJUSTANDOLO BIEN, PONIENDO UN POCO DE GRASA EN LOS ESMERILADOS. AGREGAR, POR EL DEPOSITO SUPERIOR, OTROS 100 ML DE AGUA Y 100 ML DE DISOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 40 POR 100. CALENTAR SUAVEMENTE HASTA EBULLICION.

AUMENTAR EL CALENTAMIENTO RECOGIENDO, AL MENOS, 150 ML DE DESTILADO, O PROLONGARLO, HASTA EL MOMENTO EN QUE SE PRODUZCA UNA EBULLICION A GOLPES.

RETIRAR EL ERLENMEYER, LAVAR LA ALARGADERA Y EL INTERIOR DEL REFRIGERANTE, RECOGIENDO SOBRE EL DESTILADO LAS AGUAS DE LAVADO. VALORAR HASTA LA COLORACION ORIGINAL, VIOLETA, CON ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N. EFECTUAR UNA PRUEBA EN BLANCO, UTILIZANDO 5 ML DE AGUA DESTILADA EN VEZ DE LA MUESTRA, SIGUIENDO TODO EL PROCEDIMIENTO.

5.5. CALCULO.

(FORMULA OMITIDA)

6. CENIZAS

6.1. PRINCIPIO.

ADICION DE SOLUCION DE ACETATO DE MAGNESIO, DESECACION EN BAÑO DE AGUA O BAÑO DE ARENA, INCINERACION EN UN HORNO A 550 GRADOS C Y POSTERIOR DETERMINACION DE LA MASA DEL RESIDUO, TENIENDO EN CUENTA LA CANTIDAD DE OXIDO DE MAGNESIO N DE PROVENIENTE DESIDUO, TENIENDO EN CUENTA LA CANTIDAD DE OXIDO DE MAGNESIO N DE LA ADICION DE LA SOLUCION DE ACETATO DE MAGNESIO UTILIZADA EN PRIMER LUGAR.

6.2. MATERIAL Y APARATOS.

6.2.1. CAPSULAS DE PORCELANA DE CUARZO O PLATINO, CON FONDO PLANO, DE APROXIMADAMENTE 15 CM2 DE SUPERFICIE Y 25 MM DE ALTURA, DE PAREDES LIGERAMENTE INCLINADAS.

6.2.2. PIPETA DE 1 Y 2 ML DE DOBLE AFORO.

6.2.3. BAÑO DE AGUA O BAÑO DE ARENA O PLACA CALEFACTORA.

6.2.4. HORNO DE MUFLA PROVISTO DE TERMOSTATO Y CAPAZ DE ALCANZAR AL MENOS 800 GRADOS C.

6.2.5. DESECADOR PROVISTO DE UN AGENTE DESHIDRATANTE EFICAZ COMO INDICADOR.

6.2.6. BALANZA ANALITICA.

6.2.7. PINZAS ADECUADAS PARA EL MANEJO DE LAS CAPSULAS.

6.3. REACTIVOS.

6.3.1. SOLUCION DE ACETATO MAGNESICO, QUE CONTENGA 150 G/L. PESAR 15 G DEL REACTIVO ANHIDRO O 25 G DEL TETRAHIDRATO Y LLEVARLOS, UNA VEZ DISUELTOS, A UN MATRAZ DE 100 ML; ENRASAR.

6.4. PROCEDIMIENTO.

INTRODUCIR LA CAPSULA BIEN LIMPIA EN EL HORNO REGULADO A 550 GRADOS C DURANTE 20 MINUTOS. SACARLA E INTRODUCIRLA EN EL DESECADOR, PERMANECIENDO EN EL 30 MINUTOS. PESARLA CON UNA PRECISION DE 0,1 MG.

INTRODUCIR EN LA CAPSULA UN PESO P DE MUESTRA, APROXIMADAMENTE 5 G, PREPARADA SEGUN EL METODO 1 Y PESADA CON UNA PRECISION DE 0,1 MG. AÑADIR 1 ML DE LA DISOLUCION DE ACETATO MAGNESICO (6.3.1) UNIFORMEMENTE. COLOCAR LA CAPSULA EN UN BAÑO DE ARENA, O PLACA CALEFACTORA, HASTA CONSEGUIR LA CARBONIZACION DE LA MUESTRA, PRESTANDO MUCHA ATENCION A LAS POSIBLES PROYECCIONES. TRANSFERIR LA CAPSULA AL HORNO DE MUFLA QUE DEBE QUEDAR ESTABILIZADO A 550 GRAD. C POR ESPACIO DE, AL MENOS, 1 HORA. SI NO ALCANZAN EL GRADO DE BLANCURA DESEADO DEBE SECARSE LA CAPSULA, DEJARLA ENFRIAR Y AÑADIR UNOS MILILITROS (2-4) DE AGUA DESTILADA. EVAPORAR EL AGUA EN BAÑO DE ARENA. INTRODUCIR DE NUEVO LA CAPSULA EN EL HORNO DE MUFLA POR ESPACIO DE 30 MINUTOS Y REPETIR LAS OPERACIONES ANTERIORES SI ES NECESARIO, HASTA CONSEGUIR UNAS CENIZAS BLANCAS O LIGERAMENTE GRISES. SACARLAS DEL HORNO E INTRODUCIRLAS EN EL DESECADOR DURANTE 30 MINUTOS.

PESAR CON PRECISION DE 0,1 MG.

EFECTUAR DOS DETERMINACIONES SOBRE LA MISMA MUESTRA.

6.5. CALCULOS.

(ANEXO OMITIDO)

6.6 OBSERVACIONES.

6.6.1. LA DIFERENCIA ENTRE DOS DETERMINACIONES SOBRE LA MISMA MUESTRA, REALIZADAS SIMULTANEAMENTE O RAPIDAMENTE UNA DESPUES DE OTRA POR EL MISMO ANALISTA, NO DEBE SER SUPERIOR A 0,10 G POR 100 G DE MUESTRA.

6.7. REFERENCIAS.

1. NORMA INTERNACIONAL ISO R-936.

7. FOSFORO

7.1. PRINCIPIO.

TRANSFORMACION EN ACIDO PIROFOSFORICO, POSTERIOR HIDROLISIS DEL MISMO Y MEDIDA DEL COLOR PRODUCIDO AL AÑADIRLE EL REACTIVO MOLIBDATO-VANADATO.

7.2. MATERIAL Y APARATOS.

7.2.1. MATRACES AFORADOS DE 1.000, 250 Y 100 ML.

7.2.2. PIPETAS DE 10, 20 Y 50 ML.

7.2.3. MATRACES KJELDAHL DE 500 U 800 ML.

7.2.4. BALANZA ANALITICA.

7.2.5. ESPECTROFOTOMETRO CAPAZ DE EFECTUAR LECTURAS A 436 NM.

7.3. REACTIVOS.

7.3.1. SOLUCION DE VANADATO AMONICO.-DISOLVER 2,5 G DE VANADATO DE AMONIO EN 500 ML DE AGUA HIRVIENDO. DESPUES DE REFRIGERACION, ACIDULAR CON 20 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO Y DILUIR HASTA 1.000 ML.

7.3.2. SOLUCION DE MOLIBDATO AMONICO.-DISOLVER 100 G DE MOLIBDATO AMONICO EN 500 ML DE AGUA A 50 GRADOS C. DESPUES DE REFRIGERACION AÑADIR CON PRECAUCION 100 ML DE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO. DESPUES DE ENFRIAR DILUIR HASTA 1.000 ML.

7.3.3. REACTIVO MOLIBDATO-VANADATO.-UNA PARTE DEL REACTIVO 7.3.1. Y UNA PARTE DEL REACTIVO 7.3.2.

7.3.4. ACIDO NITRICO CONCENTRADO.

7.3.5. ACIDO SULFURICO CONCENTRADO.

7.3.6. ACIDO SULFURICO DILUIDO 1 : 10.

7.3.7. SELENIO EN POLVO.

7.3.8. AGUA OXIGENADA DE 20 VOLUMENES.

7.3.9. FOSFATO MONOPOTASICO.

7.4. PROCEDIMIENTO.

7.4.1. ANALISIS DE LA MUESTRA:

INTRODUCIR EN UN MATRAZ KJELDAHL 5 G DE LA SUSTANCIA A ANALIZAR PREPARADA SEGUN EL METODO 1. AÑADIR 50 ML DE H2SO4 CONCENTRADO Y EL CATALIZADOR DE SELENIO (UTILIZANDO UNA PUNTA DE ESPATULA). DEJAR 12 HORAS EN REPOSO. AÑADIR UNOS 20 ML DE AGUA OXIGENADA. CALENTAR SEGUIDAMENTE LA MEZCLA HASTA EBULLICION Y UNA VEZ CLARIFICADA PROLONGARLA DURANTE 2 HORAS DE MANERA QUE SE HIDROLICE TODO EL ACIDO PIROFOSFORICO QUE HUBIERA PODIDO FORMARSE. TRASVASAR LA MEZCLA DESPUES DE REFRIGERACION, A UN VASO VOLUMETRICO DE 250 ML Y COMPLETAR HASTA EL TRAZO DE AFORO CON AGUA DESTILADA. SI HUBIERA UNA PRECIPITACION DE SULFATO DE CALCIO O DE ACIDO SALICILICO, PASAR LA SOLUCION POR UN FILTRO CUANTITATIVO. PARA LA DOSIFICACION DEL ACIDO FOSFORICO, HACER PASAR CON LA PIPETA 10 ML DE FILTRADO (EL EQUIVALENTE DE 0,2 G) DE LA MUESTRA EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML Y AÑADIR 20 ML DE ACIDO SULFURICO DILUIDO Y 20 ML DE REACTIVO DE MOLIBDATO-VANADATO. COMPLETAR LA SOLUCION HASTA EL TRAZO DE AFORO CON AGUA Y EFECTUAR LA MEDIDA ESPECTROFOTOMETRICA AL CABO DE 10 MINUTOS.

7.4.2. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.

DISOLVER 4,393 G DE FOSFATO MONOPOTASICO, PREVIAMENTE SECADO SOBRE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO, EN 1.000 ML DE AGUA. LA SOLUCION CONTIENE UN MG DE P POR ML. LAS SOLUCIONES PATRON CONTENIENDO DE 1 A 45 UG DE P POR ML SE PREPARAN TRANSVASANDO CON LA PIPETA LA CANTIDAD DESEADA DE SOLUCION P EN UN VASO VOLUMETRICO DE 100 ML, AÑADIENDO 20 ML DE ACIDO SULFURICO DILUIDO Y 20 ML DE REACTIVO DE MOLIBDATO-VANADATO Y COMPLETANDO HASTA EL TRAZO DE CALIBRADO CON AGUA DESTILADA. AL TERMINO DE 10 MINUTOS SE MIDE LA ABSORCION DE LA SOLUCION (EN UNA CUBETA DE 1CM DE PASO) A 436 NM CONTRA UNA SOLUCION TESTIGO, SIRVIENDOSE DE UN ESPECTROFOTOMETRO. TRAZAR LA CURVA PATRON.

7.5. CALCULO.

CALCULAR EL CONTENIDO EN FOSFORO TOTAL, EXPRESADO EN PORCENTAJE DE P2O5 A PARTIR DE LA LECTURA EN EL ESPECTROFOTOMETRO Y CON AYUDA DE LA CURVA PATRON.

(ANEXO OMITIDO)

8. CLORUROS

8.1. PRINCIPIO.

EXTRACCION DE LOS CLORUROS DEL PRODUCTO PICADO CON AGUA CALIENTE Y ALCOHOL Y POSTERIOR DETERMINACION POR EL METODO CARPENTIER-VOHLARD.

8.2. MATERIAL Y APARATOS.

8.2.1. PAPEL DE FILTRO.

8.2.2 EMBUTIDOS.

8.2.3. MATRACES AFORADOS DE 250 Y 200 ML.

8.2.4. ERLENMEYER DE 150 Y 250 ML.

8.2.5. PIPETAS DE 5 ML.

8.2.6. BURETA CON DIVISIONES DE 0,1 ML.

8.2.7. BALANZA ANALITICA.

8.2.8. PLACA CALEFACTORA.

8.2.9. AGITADOR MAGNETICO CON CALEFACCION.

8.2.10. AGITADOR DE IMAN-TEFLON.

8.2.11. VASOS DE PRECIPITADO DE 500 ML.

8.2.12. CENTRIFUGA PROVISTA DE TUBOS DE AL MENOS 100 ML DE CAPACIDAD.

8.3. REACTIVOS.

8.3.1. SOLUCION TITULADA DE NITRATO DE PLATA 0,1 N.

8.3.2. SOLUCION DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO D=1,63.

8.3.3. SOLUCION ACUOSA DE SULFATO FERRICO AMONICO (ALUMBRE FERRICO) AL 4 POR 100).

8.3.4. NITROBENCENO.

8.3.5. SOLUCION TITULADA DE SULFOCIANURO POTASICO O AMONICO 0,1 N.

8.3.6. SOLUCION DE ALCOHOL ETILICO AL 40 POR 100.

8.3.7. REACTIVO DE CARREZ.

8.3.7.1. SOLUCION ACUOSA DE FERROCIANURO POTASICO AL 15 POR 100.

8.3.7.2. SOLUCION ACUOSA DE ACETATO DE CINC AL 30 POR 100.

8.4. PROCEDIMIENTO.

8.4.1. PREPARACION DEL EXTRACTO.

PESAR, CON PRECISION DE 1 MG, UN PESO P (ALREDEDOR DE 10 G) DE LA MUESTRA PREPARADA SEGUN EL METODO 1, INTRODUCIENDOLA EN UN ERLENMEYER DE 250 ML. AÑADIR 150 ML DE ALCOHOL AL 40 POR 100. PONER EN EL AGITADOR Y CALENTAR SUAVEMENTE. PROLONGAR LA AGITACION DURANTE UNA HORA AL MENOS. TRANSVASAR A UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML CON ALCOHOL DE 40 POR 100 A TRAVES DE UN EMBUDO Y UNA VARILLA. AÑADIR CONSECUTIVAMENTE 5 ML DE CADA UNO DE LOS REACTIVOS DE CARREZ Y ENRASAR. AGITAR Y DEJAR 10 MINUTOS EN REPOSO. CENTRIFUGAR 5 MINUTOS A 2.000 R.P.M. SEPARAR LA GRASA QUE SOBRENADE CON AYUDA DE UNA ESPATULA. FILTRAR EN UN MATRAZ EN UN VASO DE 500 ML, LAVANDO CON UNA PEQUEÑA PORCION DE AGUA. ESTE LIQUIDO DE LAVADO SE UNE AL INICIAL EN EL VASO. COLOCAR EN UNA PLACA Y EVAPORAR EL LIQUIDO HASTA 100 ML APROXIMADAMENTE PARA ELIMINAR EL ALCOHOL. DEJAR ENFRIAR Y LLEVAR EL LIQUIDO DE NUEVO AL MATRAZ DE 200 ML Y ENRASAR CON AGUA.

8.4.2. INTRODUCIR EN UN ERLENMEYER DE 250 ML Y AGITANDO SUAVEMENTE ENTRE ADICION Y ADICION: 10 ML EXACTAMENTE MEDIDOS DE SOLUCION 0,1 N DE NITRATO DE PLATA. 1 ML DE SOLUCION DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO. 1 ML DE SOLUCION DE SULFATO FERRICO AMONICO AL 4 POR 100. 10 ML DEL EXTRACTO PROBLEMA. 50 ML DE AGUA DESTILADA.

DEJAR REPOSAR DURANTE 10 MINUTOS EN LA OSCURIDAD. AÑADIR 1 ML DE NITROBENCENO PARA AGLOMERAR EL PRECIPITADO Y OBTENER UNA SOLUCION LIMPIA. VALORAR EL EXCESO DE NITRATO DE PLATA CON LA SOLUCION DE SULFOCIANURO 0,1 N, HASTA QUE SE PRODUZCA EL VIRAJE.

8.5. CALCULOS.

EL TANTO POR CIENTO DE CLORUROS PRESENTES EN LA MUESTRA, EXPRESADO EN CLORURO SODICO, VIENE DADO POR LA FORMULA.

(FORMULA OMITIDA)

9.1. PRINCIPIO.

EXTRACCION DE LA GRASA DE LA MUESTRA PREVIAMENTE HIDROLIZADA Y DESECADA, POR MEDIO DE HEXANO O ETER DE PETROLEO. ELIMINACION DEL DISOLVENTE POR EVAPORACION, DESECACION DEL RESIDUO Y POSTERIOR PESADA DESPUES DE ENFRIAR.

9.2. MATERIAL Y APARATOS.

9.2.1. ERLENMEYER DE 500 ML.

9.2.2. VIDRIOS DE RELOJ.

9.2.3. PLACA CALEFACTORA.

9.2.4. PAPEL DE FILTRO ALBET 242 (SIMBOLO OMITIDO) O SIMILAR.

9.2.5. EMBUDOS.

9.2.6. EXTRACTOS SOXHLET.

9.2.7. ESTUTA ELECTRICA.

9.2.8. BALANZA ANALITICA.

9.2.9. DESECADOR PROVISTO DE UN DESHIDRATANTE EFICAZ (GEL DE SILICE) CON INDICADOR DE HUMEDAD.

9.3. REACTIVOS.

9.3.1. N-HEXANO O ETER DE PETROLEO CON UN INTERVALO DE PUNTO DE EBULLICION 40-60 GRADOS C E INDICE DE BROMO INFERIOR A 1, O ETER ETILICO ANHIDRO EXENTO DE PEROXIDOS.

9.3.2. PIEDRA POMEZ.

9.3.3. ACIDO CLORHIDRICO 3 N.

9.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR CON APROXIMACION DE 1 MG, 2,5 G DE MUESTRA PREPARADA COMO EN EL METODO 1 E INTRODUCIRLOS EN UN ERLENMEYER DE 500 ML. AÑADIR 100 ML DE ACIDO CLORHIDRICO 3 N (9.3.4.) Y UNOS TROZOS DE PIEDRA POMEZ. CUBRIR LA BOCA DEL ERLENMEYER CON UN VIDRIO DE RELOJ, Y SOMETER LA MEZCLA A UNA EBULLICION SUAVE EN LA PLACA CALEFACTORA DURANTE 1 HORA. ENFRIAR Y FILTRAR SOBRE DOBLE FILTRO EVITANDO CUALQUIER PASO DE MATERIA GRASA AL FILTRADO. LAVAR EL RESIDUO CON AGUA FRIA HASTA DESAPARICION DE LA REACCION ACIDA. VERIFICAR QUE EN EL FILTRADO NO EXISTE MATERIA GRASA.

COLOCAR LOS PAPELES DE FILTRO CONTENIENDO EL RESIDUO SOBRE UN VIDRIO DE RELOJ Y DESECARLO DURANTE HORA Y MEDIA EN LA ESTUFA A 95-98 GRADOS C. UNA VEZ SECO EL CONJUNTO, INTRODUCIRLO EN EL CARTUCHO DE EXTRACCION, EXTRAYENDO CON EL SOXHLET CON ETER ETILICO DURANTE 6 HORAS, REGULANDO LA EBULLICION DE FORMA QUE SE PRODUZCAN 15 SIFONADAS AL MENOS EN CADA HORA. ELIMINAR EL DISOLVENTE EN EL ROTAVAPOR Y ELIMINAR EL RESTO DEL DISOLVENTE EN LA ESTUFA DURANTE HORA Y MEDIA A 75 GRADOS C. ENFRIAR EL MATRAZ CON LA GRASA EN DESECADOR, MATRAZ QUE PREVIAMENTE FUE TARADO, Y PESAR CUANDO SE ALCANZA LA TEMPERATURA AMBIENTE.

REPETIR EL CALENTAMIENTO Y LA PESADA HASTA QUE LA DIFERENCIA ENTRE DOS CONSECUTIVAS SEA MENOR DE 5 MG.

(FORMULA OMITIDA)

10 HUMEDAD

10.1. PRINCIPIO.

FORMACION DE UNA PASTA CON AYUDA DE ARENA Y ETANOL, QUE ES SOMETIDA PRIMERAMENTE UN PRESECADO EN BAÑO DE MARIA Y A CONTINUACION SECADA A 102 + - 2. C HASTA OBTENER UN PESO CONSTANTE.

10.2. MATERIAL Y APARATOS.

10.2.1. BALANZA ANALITICA.

10.2.2. CAPSULAS DE ACERO INOXIDABLE CON TAPA DE 60 MM DE DIAMETRO Y 25 MM DE ALTURA.

10.2.3. VARILLA FINA DE VIDRIO CON PUNTA APLASTADA, QUE ENTRE POR COMPLETO EN LA CAPSULA.

10.2.4. DESECADOR PROVISTO DE UN DESHIDRATANTE EFICAZ (GEL DE SILICE CON INDICADOR DE HUMEDAD).

10.2.5. BAÑO DE AGUA.

10.2.6. ESTUFA ELECTRICA REGULADA A 102 +- 2 GRADOS C.

10.3. REACTIVOS.

10.3.1. ARENA DE MAR LAVADA A LOS ACIDOS, CUYA GRANULOMETRIA ESTE COMPRENDIDA ENTRE 0,25 Y 1,4 MM.

10.3.2. ETANOL DEL 95 POR 100 EN VOLUMEN COMO MINIMO.

10.4. PROCEDIMIENTO.

SECAR LA CAPSULA CONTENIENDO UNA CANTIDAD DE ARENA IGUAL A 3-4 VECES EL PESO DE MUESTRA Y LA VARILLA DE VIDRIO, DURANTE 30 MINUTOS, EN LA ESTUFA REGULADA A 102 +- 2 GRADOS C.

SACARLA DE LA ESTUFA E INTRODUCIRLA EN EL DESECADOR, HASTA QUE ALCANCE LA TEMPERATURA AMBIENTE, Y PESAR EL CONJUNTO CON 0,1 MG DE APROXIMACION.

INTRODUCIR EN DICHA CAPSULA UN PESO DE MUESTRA PREPARADA SEGUN EL METODO 1 APROXIMADAMENTE 5 G Y PESAR DE NUEVO CON APROXIMACION DE 0,1 MG.

AÑADIR A LA CAPSULA 5 ML DE ETANOL (10.3.2) Y REMOVER LA MEZCLA CON LA VARILLA DE VIDRIO. COLOCAR LA CAPSULA AL BAÑO DE AGUA REGULANDOLO A UNA TEMPERATURA COMPRENDIDA ENTRE 60 Y 80 GRADOS C PARA EVITAR LAS POSIBLES PROYECCIONES, MANTENER EL CALENTAMIENTO HASTA QUE EL ALCOHOL SE EVAPORE. SECAR LA MUESTRA DURANTE CUATRO HORAS EN LA ESTUFA A 102 +- 2 GRADOS C. RETIRAR LA CAPSULA DE LA ESTUFA Y COLOCAR EN EL DESECADOR, HASTA QUE ALCANCE LA TEMPERATURA AMBIENTE. PESAR CON APROXIMACION DE 0,1 MG.

REPETIR LAS OPERACIONES DE SECADO HASTA PESO CONSTANTE.

EFECTUAR POR LO MENOS DOS DETERMINACIONES SOBRE LA MISMA MUESTRA.

(FORMULA OMITIDA)

10.6. OBSERVACIONES.

LA DIFERENCIA ENTRE LOS RESULTADOS DE DOS DETERMINACIONES SIMULTANEAS O REALIZADAS INMEDIATAMENTE UNA DESPUES DE LA OTRA EFECTUADAS POR EL MISMO ANALISTA, NO DEBE SER SUPERIOR A 0,1 G DE AGUA POR 100 G DE MUESTRA (0,1 POR 100).

10.7. REFERENCIAS.

1. NORMA INTERNACIONAL ISO R-1442.

11. AZUCARES TOTALES, REDUCTORES Y LACTOSA

(METODO DE LUFF-SCHOORL)

11.1 PRINCIPIO.

LOS AZUCARES SE DISUELVEN EN ETANOL DILUIDO O BIEN EN AGUA Y DESPUES DE LA ELIMINACION DEL ALCOHOL SE VALORAN POR EL METODO DE LUFF-SCHOORL ANTES Y DESPUES DE LA INVERSION.

11.2. MATERIAL Y APARATOS.

11.2.1. PIPETAS DE 1,2, 5, 10, 25 ML.

11.2.2. PROBETAS DE 50 ML.

11.2.3. MATRACES ERLENMEYER DE CUELLO ESMERILADO DE 300 ML.

11.2.4. BURETA CON DIVISIONES DE 0,1 ML.

11.2.5. REFRIGERANTES DE REFLUJO.

11.2.6. BAÑO DE ARENA.

11.2.7. BAÑO DE AGUA.

11.3.

REACTIVOS.

11.3.1. ETANOL DILUIDO AL 40 POR 100 (V/V) D 20 GRADOS C = 0,948 LLEVADO A PUNTO DE VIRAJE CON FENOLFTALEINA EN UNA PARTE ALICUOTA.

11.3.2. SOLUCION DE NARANJA DE METILO AL 0,1 POR 100 (P/V).

11.3.3. ACIDO CLORHIDRICO 4 N.

11.3.4. ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N.

11.3.5. HIDROXIDO SODICO 0,125 N.

11.3.6. REACTIVO DE LUFF-SCHOORL.

11.3.6.1. SOLUCION A.- 50G DE ACIDO CITRICO EN 500 ML DE AGUA.

11.3.6.2. SOLUCION B.- DISOLVER 143,8 G DE CARBONATO DE SODIO ANHIDRIDO EN 300 ML DE AGUA CALIENTE DEJANDO ENFRIAR.

11.3.6.3. SOLUCION C.- DISOLVER 25 G DE SULFATO DE COBRE PENTAHIDRATO EXENTO DE HIERRO EN 100 ML DE AGUA.

MEZCLAR CUIDADOSAMENTE LA SOLUCION A CON LA B, AÑADIENDO TAMBIEN CON SUAVE AGITACION LA SOLUCION C, AFORANDO EL CONJUNTO A 1.000 ML. DEJAR REPOSAR UNA NOCHE Y FILTRAR. EL PH DE LA SOLUCION DEBE SER ALREDEDOR DE 9,4.

COMPROBAR LAS CONCENTRACIONES, QUE DEBEN SER 0,1 N PARA EL COBRE Y 2N PARA EL CARBONATO SODICO.

11.3.7. SOLUCION DE TIOSULFATO SODICO 0,1 N CON FACTOR EXACTAMENTE CALCULADO.

11.3.8. SOLUCION DE ALMIDON.- PESAR 5 G DE ALMIDON SOLUBLE, HACIENDO UN ENGRUDO CON 30 ML DE AGUA HIRVIENDO; ESTE ENGRUDO SE VIERTE SOBRE 1L DE AGUA HIRVIENDO, MANTENIENDO DURANTE 3 MINUTOS LA EBULLICION, DEJAR ENFRIAR, Y AÑADIR 10 MG DE IODURO MERCURICO COMO AGENTE CONSERVADOR.

11.3.9. ACIDO SULFURICO 6 N.

11.3.10. GRANULOS DE PIEDRA POMEZ.

11.3.11. SOLUCION HIDROGLICERIDA DE INVERTASA, CONTENIENDO 2.750 UNIDADES/ML.

11.3.12. SUSPENSION DE LEVADURA (SACCHAROMYCES CEREVISIAE) 25 G DE DICHA LEVADURA FRESCA EN 100 ML DE AGUA. ESTA SOLUCION SE CONSERVA COMO MAXIMO UNA SEMANA EN EL REFRIGERADOR.

11.3.13. SOLUCIONES DE DEFECACION.

11.3.13.1. CARREZ I.- DISOLVER EN 50 ML DE AGUA 24 G DE ACETATO DE CINC (CH3COO)2 ZN.2H2O Y 3 G DE ACIDO ACETICO GLACIAL.

COMPLETAR A 100 ML CON AGUA DESTILADA.

11.3.13.2. CARREZ II.- DISOLVER EN 50 ML DE AGUA 10,6 G DE FERROCIANURO POTASICO FE (CN)6K4.3H2O COMPLETANDO A 100 ML CON AGUA DESTILADA.

11.3.14. ISOPENTANOL COMO ANTIESPUMANTE (OPCIONAL).

11.4. PROCEDIMIENTO.

11.4.1. PREPARACION DEL EXTRACTO.

COMO EN 8.4.1.

11.4.2. VALORACION DE AZUCARES REDUCTORES.

TOMAR CON UNA PIPETA UNA CANTIDAD DEL EXTRACTO NO SUPERIOR A 25 ML Y QUE CONTENGA MENOS DE 60 MG DE AZUCARES REDUCTORES EXPRESADOS EN GLUCOSA. SI FUERA PRECISO TOMAR UNA CANTIDAD MENOR DE 25 ML (CASO NO FRECUENTE EN PRODUCTOS A ASE DE CARNE) SE COMPLETA HASTA DICHOS 25 ML CON AGUA DESTILADA, DETERMINANDOSE EL CONTENIDO DE AZUCARES REDUCTORES SEGUN EL METODO DE LUFF-SCHOORL POSTERIORMENTE DESCRITO.

LOS RESULTADOS SE EXPRESAN EN GLUCOSA POR CIENTO.

11.4.3. VALORACION DE AZUCARES TOTALES, DESPUES DE LA INVERSION.

SE PUEDEN SEGUIR DOS METODOS:

11.4.3.1. METODO QUIMICO.- TOMAR POR MEDIO DE UNA PIPETA 50 ML DEL EXTRACTO EN UN MATRAZ DE 100 ML AFORADO, Y AÑADIR CUATRO GOTAS DE NARANJA DE METILO (11.3.2) Y DESPUES GOTA A GOTA ACIDO CLORHIDRICO 4 N (11.3.3.) HASTA VIRAJE NETO AL COLOR ROJO. AÑADIR POSTERIORMENTE 15 ML DE CLORHIDRICO 0,1 N (11.3.4.) Y LLEVAR AL BAÑO DE AGUA HIRVIENTE DURANTE 30 MINUTOS. ENFRIAR RAPIDAMENTE A 20 GRADOS C Y AÑADIR 15 ML DE NAOH O,125 N, O LA PRECISA PARA EL VIRAJE DEL INDICADOR. AFORAR A 100 ML CON AGUA DESTILADA.

TOMAR UNA CANTIDAD NO SUPERIOR A 25 ML QUE CONTENGA MENOS DE 60 MG DE AZUCARES TOTALES, EXPRESADOS EN GLUCOSA, COMO EN EL APARTADO 11.4.2. DETERMINANDOSE EL PORCENTAJE DE AZUCARES RECTORES SEGUN EL METODO DE LUFF-SCHOORL, QUE SE EXPRESA EN AZUCAR INVERTIDO O BIEN EN SACAROSA, MULTIPLICANDO EL VALOR OBTENIDO POR EL FACTOR 0,95.

11.4.3.2. METODO ENZIMATICO.- TOMAR 50 ML DEL EXTRACTO CORRESPONDIENTE EN UN MATRAZ DE 100 ML AFORADO, AÑADIR 2 ML DE SOLUCION HIDROGLICERIDA DE INVERTASA Y DEJAR REPOSAR UNA HORA A 50 GRADOS C EN ESTUFA ENFRIAR A 20 GRADOS C ENRASANDO EXACTAMENTE A 100 ML.

TOMAR UNA CANTIDAD NO SUPERIOR A 25 ML Y PROSEGUIR COMO EN LOS CASOS ANTERIORES Y CON LAS MISMAS ESPECIFICACIONES.

11.4.4. VALORACION DE LACTOSA.

TOMAR EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML, 50 ML DEL EXTRACTO CORRESPONDIENTE. AÑADIR 5 ML DE SUSPENSION DE LEVADURA (11.3.12.), HOMOGENEIZAR Y DEJAR DURANTE 2 HORAS EN UN BAÑO A 39 GRAD. C. ENFRIAR A 20 GRAD. C. AÑADIR 2,5 ML DE SOLUCION CARREZ I (11.3.13.1.) Y AGITAR, AÑADIR 2,5 ML DE SOLUCION CARREZ II (11.3.13.2.) Y AGITAR DE NUEVO. COMPLETAR EL VOLUMEN A 100 ML, MEZCLAR Y FILTRAR. TOMAR 25 ML DE FILTRADO COMO MAXIMO, Y CON UN CONTENIDO EN LACTOSA ENTRE 40 Y 80 MG INTRODUCIRLOS EN UN ERLENMEYER DE 300 ML.

PROCEDER DE LA MISMA FORMA CON UN ENSAYO EN BLANCO DE 5 ML DE LEVADURA.

DETERMINAR EL CONTENIDO EN LACTOSA SEGUN EL METODO DE LUFF-SCHOORL, LOS RESULTADOS SE EXPRESAN EN LACTOSA ANHIDRA POR CIENTO.

EL METODO SE BASA EN EL HECHO DE QUE EL SACCHAROMYCES CEREVISIAE HIDROLIZA TODOS LOS AZUCARES EXCEPTUANDO LA LACTOSA.

11.4.5. VALORACION SEGUN EL METODO DE LUFF-SCHOORL.

TOMAR CON LA PIPETA 25 ML EXACTOS DEL REACTIVO DE LUFF-SCHOORL Y VERTERLOS EN UN ERLENMEYER DE 300 ML SOBRE LAS CORRESPONDIENTES ALICUOTAS DE AZUCARES, AÑADIR UNOS GRAMOS DE PIEDRA POMEZ Y CALENTAR EN TELA METALICA CON MECHERO FUERTE DE MANERA QUE HIERVA DOS MINUTOS APOXIMADAMENTE, LLEVAR EL ERLENMEYER A UN BAÑO DE ARENA PREVIAMENTE CALENTADO DE FORMA QUE SE CALIENTE UNICAMENTE EL FONDO DEL RECIPIENTE, ADPTANDOSE UN REFRIGERANTE DE REFLUJO Y MANTENIENDO LA EBULLICION DURANTE 10 MINUTOS EXACTOS.

ENFRIAR RAPIDAMENTE, Y VALORAR A LOS 5 MINUTOS, AÑADIENDO 3 G DE IODURO POTASICO DISUELTO EN 2 ML DE AGUA, Y LENTAMENTE PARA EVITAR LAS PROYECCIONES, 25 ML DE ACIDO SULFURICO 6 N, VALORANDO EL IODO PUESTO EN LIBERTAD CON TIOSULFATO 0,1 N, HASTA OBTENER UN COLOR AMARILLO DEBIL, AÑADIR EL INDICADOR DED ALMIDON (11.3.8.) Y TERMINAR LA VALORACION ANALOGA EN BLANCO, MEZCLANDO 25 ML DEL REACTIVO DE LUFF-SCHOORL CON 25 ML DE AGUA, SIN PREVIA EBULLICION, Y CON LA ADICION DE IODURO POTASICO Y SULFURICO 6 N.

11.5. CALCULOS.

CON LA AYUDA DE LA TABLA 1 DETERMINAR LA CANTIDAD DE AZUCAR EN MG CORRESPONDIENTE A LA DIFERENCIA ENTRE LOS VOLUMENES DE TIOSULFATO EN ML CONSUMIDOS EN LA VALORACION EN BLANCO Y PROBLEMA.

(ANEXO OMITIDO)

11.6. OBSERVACIONES.

11.6.1. LOS RESULTADOS OBTENIDOS PARA AZUCARES TOTALES REALIZANDO LOS DOS TIPOS DE INVERSION SON SEMEJANTES. PERO SI EL ANALISIS NO SE REALIZA CON FRERCUENCIA, ES PREFERIBLE EL METODO QUIMICO, POR EL POSIBLE DETERIORO DE LA INVERTASA Y SU ALTO PRECIO.

11.6.2. LA DIFERENCIA ENTRE EL PORCENTAJE DE AZUCARES TOTALES Y EL DE AZUCARES REDUCTORES, MULTIPLICADO POR 0,95 DA EL CONTENIDO EN SACAROSA DE LA MUESTRA.

11.6.3. EL CONTENIDO EN AZUCARES REDUCTORES, EXCEPTUANDO LA LACTOSA SE OBTIENE MULTIPLICANDO EL VALOR DE ESTA, OBTENIDO SEGUN (11.4.4.) POR 0,675 Y RESTANDO ESTE RESULTADO DEL CONTENIDO EN AZUCARES REDUCTORES TOTALES.

(TABLA OMITIDA).

12. HIDROXIPROLINA

12.1. PRINCIPIO.

PREVIA HIDROLISIS EN MEDIO ACIDO DE LAS PROTEINAS Y OXIDACION DE LA HIDROSIPROLINA. EL DERIVADO FORMADO CON EL P-DIMETILAMINO-BENZALDEHIDO SE VALORA COLORIMETRICAMENTE.

12.2. MATERIAL Y APARATOS.

12.2.1. BALANZA ANALITICA.

12.2.2. MATRACES DE FONDO PLANO DE 250 ML DE CAPACIDAD.

12.2.3. REFRIGENANTES DE REFLUJO.

12.2.4. BAÑO DE ARENA.

12.2.5. AGITADOR MAGNETICO.

12.2.6. PH-METRO.

12.2.7. MATRACES AFORADOS DE 50, 100, 200 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

12.2.8. ERLENMEYER DE 250 ML DE CAPACIDAD.

12.2.9. TUBOS DE ENSAYO DE 16 X 160 MM, AFORADOS A 12 ML.

12.2.10. BAÑO DE MARIA.

12.2.11. ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO CAPACES PARA LECTURAS A 560 NM.

12.2.12. CUBETAS DE 1 CM DE PASO DE LUZ ESPECIFICAS PARA LUZ VISIBLE.

12.3. REACTIVOS.

12.3.1. PIEDRA POMEZ.

12.3.2. SOLUCION ACUOSA DE ACIDO CLORHIDRICO AL 50 POR 100 (V/V)(DILUIR A 1.000 ML, 500 ML DE SOLUCION CONCENTRADA DE ACIDO CLORHIDRICO DE DENSIDAD 1,19).

12.3.3. SOLUCION CONCENTRADA DE HIDROXIDO SODICO DE DENSIDAD 1,33 (400 G/L) (P/V).

12.3.4. SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 10 POR 100 (P/V).

12.3.5. ALCOHOL ISOPROPILICO PURO.

12.3.6. SOLUCION ACUOSA DE CLORAMINA T AL 10,5 POR 100 (P/V).

12.3.7. SOLUCION TAMPON DE PH = 6 (DISOLVER 34 G DE ACETATO SODICO ANHIDRO, 36,5 G DE CITRATO TRISODICO MONOHIDRATADO, 5,5 G DE ACIDO CITRICO EN 385 ML DE ALCOHOL ISOPROPILICO PURO Y ENRASAR A 1.000 ML CON AGUA DESTILADA.

12.3.8. SOLUCION OXIDANTE, QUE DEBE PREPARARSE EN EL MOMENTO DE SU EMPLEO, UN VOLUMEN DE LA SOLUCION 12.3.6 Y CUATRO VOLUMENES DE LA SOLUCION 12.3.7.

12.3.9. SOLUCION ACUOSA DE ACIDO PERCLORICO AL 17,5 POR 100.

12.3.10. SOLUCION DE P-DIMETILAMINOBENZALDEHIDO (P-DMAB) AL 5 POR 100 EN ALCOHOL ISOPROPILICO. ESTA SOLUCION SE CONSERVA UNA SEMANA A TEMPERATURA AMBIENTE.

12.3.11. L-HIDROXIPROLINA.

12.4. PROCEDIMIENTO.

12.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

PESAR CON 1 MG DE APROXIMACION P GRAMOS DE LA MUESTRA CONVENIENTEMEMTE HOMOGENEIZADA (APROXIMADAMENTE 3 G) SOBRE PAPEL DE FUMAR SIN ENGOMAR, E INTRODUCIR LA MUESTRA EN EL MATRAZ DE FONDO PLANO (12.2.2). AÑADIR PIEDRA POMEZ Y 50 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO AL 50 POR 100 (12.3.2). MONTAR LOS REFRIGERANTES DE REFLUJO Y COLOCARLOS EN EL BAÑO DE ARENA. CALENTAR DE FORMA QUE SE MANTENGA UNA EBULLICION SUAVE AL MENOS DURANTE SISTE HORAS. REFRIGERAR RAPIDAMENTE LOS MATRACES BAJO CORRIENTE DE AGUA. AJUSTAR EL CONTINIDO DE LOS MATRACES A UN PH COMPRENDIDO ENTRE 6 Y 7, AÑADIENDO Y AGITANDO FUERTEMENTE 28 ML DE LA SOLUCION CONCENTRADA DE HIDROXIDO SODICO, DEJAR ENFRIAR AL CHORRO DE AGUA Y LLEVAR AL PH ANTERIORMENTE INDICADO CON SOLUCION DILUIDA DE HIDROXIDO SODICO (12.3.4). TRANSFERIR EL CONTENIDO A UN MATRAZ AFORADO DE 200 ML Y ENRASAR DEJANDO EN REPOSO DURANTE UNA HORA. FILTRAR A TRAVES DE PAPEL DE FILTRO PLEGADO. TOMAR UNA ALICUOTA DEL FILTRADO Y DILUIRLA 10 O 20 VECES CON AGUA DESTILADA. ES CONVENIENTE REALIZAR AMBAS DILUCIONES, PORQUE PERMITEN OBTENER DOS VALORES SOBRE LA MISMA MUESTRA.

12.4.2. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.

LA COLORACION OBTENIDA SIGUE LA LEY DE BEER-LAMBERT CUANDO LA CONCENTRACION DE HIDROXIPROLINA SE ENCUENTRA COMPRENDIDA ENTRE 0 Y 20 (MICROGRAMOS/ML).

TENIENDO EN CUENTA LOS NUMEROSOS FACTORES QUE INFLUYEN EN LA FORMACION DEL DERIVADO COLOREADO, ES INDISPENSABLE CONSTRUIR PARA CADA DETERMINACION UNA CURVA PATRON, REALIZANDOSE EL DESARROLLO DEL COLOR AL MISMO TIEMPO SOBRE LAS DILUCIONES PROBLEMA Y LOS PATRONES.

PREPARAR UNA SOLUCION MADRE CONTENIENDO 400 (MICROGRAMOS/ML) DE HIDROXIPROLINA CON AGUA DESTILADA. A PARTIR DE ESTA SOLUCION, HACER DILUCIONES QUE CONTENGAN 5, 10 Y 20 (MICROGRAMOS/ML) CON AGUA DESTILADA. TOMAR UNA SERIE DE TUBOS DE ENSAYO AFORADOS A 12 ML Y PONER EN UNO DE ELLOS (TUBO TESTIGO) 1 ML DE AGUA DESTILADA. EN LOS TRES SIGUIENTES COLOCAR 1 ML DE LAS SOLUCIONES QUE CONTIENEN 5, 10 Y 20 (MICROGRAMOS/ML) DE HIDROXIPROLINA. EN LOS DOS SIGUIENTES 1 ML DE CADA UNA DE LAS DILUCIONES DILUIDAS DEL FILTRADO. AÑADIR A CADA TUBO SUCESIVAMENTE: 2 ML DE ISOPROPANOL PURO (12.3.5) Y 1 ML DE LA SOLUCION OXIDANTE RECIENTEMENTE PREPARADA (12.3.8) Y AGITAR. DEJAR REPOSAR DURANTE 10 MINUTOS, TRANSCURRIDO DICHO TIEMPO AÑADIR DE NUEVO A CADA TUBO: 3 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO PERCLORICO AL 17,5 POR 100 (12.3.9) Y 2 ML DE P-DMAB (12.3.10), HOMOGENEIZAR EL CONTENIDO DE LOS TUBOS Y LLEVARLOS AL BAÑO DE MARIA REGULADO A 60 GRADOS C, PERMANECIENDO EN EL 20 MINUTOS, RETIRARLOS DEL BAÑO Y ENFRIARLOS BAJO CORRIENTE DE AGUA. AJUSTAR HASTA 12 ML CON ISOPROPANOL Y AGITAR.

LEER LA DENSIDAD OPTICA DE CADA TUBO AJUSTANDO EL CERO CON EL TUBO TESTIGO A 560 NM.

TRAZAR LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON, COLOCANDO EN ABCISAS LAS ABSORBANCIAS Y ORDENADAS LAS CONCENTRACIONES EN (MICROGRAMOS/ML) DE HIDROXIPROLINA.

(FORMULA OMITIDA)

12.6. OBSERVACIONES.

12.6.1. CUANDO LA MUESTRA A ANALIZAR SEA DE ALTO CONTENIDO EN COLAGENO, EL TIEMPO DE EBULLICION DEBERA PROLONGARSE AL MENOS DURANTE NUEVE HORAS.

13. NITRITOS 13.1. PRINCIPIO.

DEL EXTRACTO OBTENIDO, ADICIONANDOLE ACIDO SULFANILICO Y (ALFA-NACTILAMINA), SE LEE LA INTENSIDAD DE LA COLORACION OBTENIDA MEDIANTE COLORIMETRIA O ESPECTROFOTOMETRIA.

13.2. MATERIAL Y APARATOS.

13.2.1. MATRACES AFORADOS DE 100 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

13.2.2. PROBETAS DE 100 O 200 ML DE CAPACIDAD.

13.2.3. BAÑO DE MARIA.

13.2.4. PAPEL DE FILTRO PLEGADO DE 15 CM DE DIAMETRO APROXIMADAMENTE.

13.2.5. TUBOS DE ENSAYO DE 150 X 25 MM.

13.2.6. MATRACES ERLENMEYER DE 300 ML DE CAPACIDAD.

13.2.7. ESPECTROFOTOMETRO CAPAZ DE LEER A 520 NM.

13.2.8. CUBETAS DE 1 CM DE PASO ESPECIFICAS PARA LUZ VISIBLE.

13.3. REACTIVOS.

13.3.1. SOLUCION PATRON DE NITRITO SODICO.-PESAR, CON APROXIMACION DE 1 MG, 1 G DE NITRITO SODICO, DISOLVER EN AGUA Y COMPLETAR HASTA 1.000 ML. TOMAR CON LA PIPETA 5 ML DE ESTA SOLUCION E INTRODUCIRLA EN OTRO MATRAZ AFORADO DE 1.000 ML. ENRASAR.

13.3.2. REACTIVO COLORIMETRICO.

13.3.2.1. SOLUCION I.-DISOLVER CALENTANDO AL BAÑO DE MARIA 6 G DE ACIDO SULFANILICO EN 200 ML DE ACIDO ACETICO GLACIAL Y 400 ML DE AGUA DESTILADA. AÑADIR 200 ML DE UNA SOLUCION DE CLORURO SODICO QUE CONTIENE 100 G/L DE CLORURO SODICO. DILUIR CON AGUA HASTA 1.000 ML.

13.3.2.2. SOLUCION II.-DISOLVER CALENTANDO AL BAÑO DE MARIA 0,3 G DE CLORURO DE (ALFA-NAFITILAMINA) EN 100 ML DE AGUA DESTILADA. FILTRAR SI ES NECESARIO Y AÑADIR 200 ML DE ACETICO GLACIAL. DILUIR HASTA 1.000 ML CON AGUA DESTILADA.

MANIPULAR CON PRECAUCION ESTA DISOLUCION POR SU CARACTER CANCERIGENO.

AMBAS SOLUCIONES (13.3.2.1. Y 13.3.2.2) DEBEN CONSERVARSE EN FRASCOS TOPACIO BIEN CERRADOS. EL REACTIVO COLORIMETRICO SE OBTIENE MEZCLANDO VOLUMENES IGUALES DE AMBAS SOLUCIONES.

13.4. PROCEDIMIENTO.

13.4.1. PREPARACION DEL EXTRACTO.-COMO EN 8.4.1.

13.4.2. VALORACION DE LA MUESTRA.-DEL EXTRACTO OBTENIDO EN 13.4.1, TOMAR 25 ML Y AÑADIR 1 G, APROXIMADAMENTE, DE CARBON ACTIVO SI ES NECESARIO DECOLORAR. FILTRAR HASTA QUE EL FILTRADO SEA TRANSPARENTE. DEL FILTRADO TOMAR UNA ALICUOTA DE 10 ML Y PONERLA EN UN TUBO DE ENSAYO 13.2.5. SI SE TOMAN MENOS DE 10 ML, COMPLETAR HASTA 10 ML CON AGUA DESTILADA. AÑADIR 10 ML DEL REACTIVO COLORIMETRICO, MEZCLAR Y DEJAR REPOSAR LA SOLUCION QUINCE MINUTOS A TEMPERATURA AMBIENTE AL ABRIGO DE LA LUZ.

A PARTIR DE LOS 20 MINUTOS Y ANTES DE 4 HORAS, MEDIR LA DENSIDAD OPTICA DE LA SOLUCION EN UNA CUBETA DE 1 CM DE PASO DE LUZ A 520 NM DE LONGITUD DE ONDA.

SI LA SOLUCION COLOREADA PROBLEMA PRESENTA UNA COLORACION SUPERIOR A LA DE LA SOLUCION PATRON MAS CONCENTRADA, TOMAR UNA ALICUOTA MENOR DE 10 ML.

EFECTUAR DOS DETERMINACIONES SOBRE LA MISMA MUESTRA.

13.4.3. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.-TOMAR DE LA SOLUCION PATRO (13.3.1.) ALICUOTAS DE 5, 10 Y 20 ML Y LLEVAR A 100 ML CON AGUA. EL CONTENIDO DE ESTAS SOLUCIONES ES, RESPECTIVAMENTE, DE 0,25, 0,50 Y 1 P. P. M. DE NITRITO SODICO.

TRANFERIR 10 ML DE CADA UNA DE ESTAS SOLUCIONES A UN TUBO DE ENSAYO (13.2.5), AÑADIR 10 ML DEL REACTIVO COLORIMETRICO Y PROCEDER A SU VALORACION COLORIMETRICA O ESPECTROFOTOMETRICA A 520 NM, LLEVANDO ABSOBANCIAS FRENTE A CONCENTRACIONES EXPRESADAS EN P. P. M. DE NITRITO SODICO.

13.5. CALCULO.

CALCULAR EL CONTENIDO EN NITRITOS DE LA MUESTRA EXPRESADO EN P. P. M. POR MEDIO DE LA FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

TOMAR COMO RESULTADO LA MEDIA DE LOS VALORES OBTENIDOS EN DOS DETERMINACIONES PARALELAS SI LAS CONDICIONES DE RESPONSABILIDAD SE CUMPLEN.

13.6. OBSERVACIONES.

LA DIFERENCIA ENTRE DOS DETERMINACIONES PARALELAS SOBRE UNA MISMA MUESTRA, REALIZADAS SIMULTANEAMENTE POR EL MISMO ANALISTA, NO DEBE SER SUPERIOR AL 10 POR 100 DEL CONTENIDO CALCULADO EN NITRITOS.

13.7. REFERENCIAS.

1. NORMA ISO/DIS 2918.

14 NITRATOS

14.1. PRINCIPIO.

AL REACCIONAR EN MEDIO SULFURICO LOS NITRATOS CON LA BRUCINA SE PRODUCE UNA COLORACION AMARILLA-MARRON, CUYA INTENSIDAD ES PROPORCIONAL AL CONTENIDO EN NITRATOS PRESENTES, LO QUE PERMITE SU VALORACION COLORIMETRICA O ESPECTROFOTOMETRICA.

14.2. MATERIAL Y APARATOS.

14.2.1. MATRAZ AFORADO DE 50 ML DE CAPACIDAD.

14.2.2. ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO CAPACES PARA LECTRURAS A 410 NM.

14.2.3. CUBETAS DE 1 CM DE PASO ESPECIFICAS PARA LUZ VISIBLE.

14.3. REACTIVOS.

14.3.1. SOLUCION PATRON DE NITRATOS.-DISOLVER 0,1629 G DE NITRATO POTASICO ANHIDRO EN AGUA Y ENRASAR A 1 L. 1 ML DE ESTA SOLUCION CONTIENE 0,1 MG DE NITRATO.

14.3.2. REACTIVO BRUCINA-ACIDO SULFANILICO.-DISOLVER 1 G DE BRUCINA Y 0,1 G DE ACIDO SULFANILICO EN UNOS 70 ML DE AGUA DESTILADA CALIENTE, AÑADIR 3 ML DE ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO, DEJAR ENFRIAR Y ENRASAR A 100 ML CON AGUA. LA SOLUCION DEBE GUARDARSE EN FRASCO COLOR TOPACIO.

14.3.3. SOLUCION DE ACIDO SULFURICO.-AÑADIR CON CUIDADO 500 ML DE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO A 75 ML DE AGUA DESTILADA. DEBE CONSERVARSE HERMETICAMENTE CERRADO.

14.4. PROCEDIMIENTO.

14.4.1. PREPARACION DEL EXTRACTO.-COMO EN 8.4.1.

14.4.2. VALORACION DE LA MUESTRA.-INTRODUCIR EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML DE CAPACIDAD 10 ML DEL EXTRACTO (14.4.1), 1 ML DEL REACTIVO (14.3.2.) Y 10 ML DEL REACTIVO (14,3.3.) MUY LENTAMENTE, MEZCLAR Y DEJAR EN REPOSO DURANTE DIEZ MINUTOS AL ABRIGO DE LA LUZ.

PASADO ESTE TIEMPO, AÑADIR AGUA DESTILADA, AGITANDO, HASTA COMPLETAR UNOS 40 ML Y DEJAR REPOSAR DURANTE QUINCE MINUTOS EN LA OSCURIDAD.

ENFRIAR EL MATRAZ EN UN BAÑO DE HIELO HASTA QUE ALCANCE LA TEMPERATURA AMBIENTE, PREFERIBLEMENTE TAMBIEN EN LA OSCURIDAD. A CONTINUACION, ENRASAR A 50 ML CON AGUA, HOMOGENEIZAR EL CONTENIDO DEL MATRAZ Y LEER LA ABSORBANCIA A 410 NM. EL CERO SE AJUSTA CON 20 ML DE AGUA SOMETIDA AL PROCESO ANTERIORMENTE DESCRITO.

14.4.3. PREPARACION DE LA CURVA PATRON. TOMAR DISTINTAS ALICUOTAS DE LA SOLUCION 14.3.1 Y TRATAR COMO EN 14.4.2.

14.5. CALCULOS.

LLEVAR LA ABOSRBANCIA OBTENIDA A LA CURVA PATRON Y EXPRESAR EL CORRESPONDIENTE CONTENIDO DE NITRATOS EN MG POR KG.

14.6. OBSERVACIONES.

14.6.1. PERIODICAMENTE RESULTA ACONSEJABLE CONFIRMAR O RECTIFICAR LOS VALORES DE LA CURVA PATRON, LO QUE ES ABSOLUTAMENTE NECESARIO CUANDO SE CAMBIA DE REACTIVOS.

14.6.2. EN LAS CONDICIONES CITADAS, SE PUEDEN MEDIR CONCENTRACIONES DE NITRATO COMPRENDIDAS ENTRE 50 Y 500 (MICROGRAMOS/L).

14.6.3. EL ACIDO SULFANILICO SE AÑADE AL REACTIVO 14.3.2 PARA EVITAR LA POSIBLE INTERFERENCIA DEL ION NITRITO. LAS INTERFERENCIAS DE IONES FERROSOS, FERRICOS Y MANGANOSOS SOLO SON APRECIABLES CUANDO SU CONCENTRACION ES SUPERIOR A 1 MG/L.

15. PH

15.1. PRINCIPIO.

MEDIDA DEL POTENCIAL ELECTRICO CREADO EN LA MENBRANA DE UN ELECTRODO DE VIDRIO, FUNCION DE LA ACTIVIDAD DE INONES HIDROGENO A AMBOS LADOS DE LA MEMBRANA. UTILIZAR COMO REFERENCIA UN ELECTRODO DE CALOMELANOS.

15.2. MATERIAL Y APARATOS.

15.2.1. PH-METRO CAPAZ DE DETERMINAR LA SEGUNDA CIFRA DECIMAL.

15.2.2. ELECTRODOS DE VIDRIO DE PUNTA FINA O CONVENCIONAL (SEGUN LA DUREZA DE LA MUESTRA).

15.2.3. ELECTRODO DE CALOMELANOS.

15.3. REACTIVOS.

15.3.1. DISOLUCION TAMPON DE PH = 4.

15.3.2. DISOLUCION TAMPON DE PH = 7.

15.4. PROCEDIMIENTO.

TOMAR UNA CANTIDAD DE MUESTRA PREPARADA SEGUN EL METODO 1 O BIEN DIRECTAMENTE, EN EL CASO DE MUESTRAS HOMOGENEAS, AÑADIR IGUAL CANTIDAD DE AGUA DESTILADA, MEZCLAR Y DEJAR REPOSAR DURANTE DIEZ MINUTOS.

AJUSTAR EL PH-METRO A LA TEMPERATURA DE TRABAJO CON LAS DISOLUCIONES 15.3.1 Y 15.3.2 E INTRODUCIR LOS ELECTRODOS DE VIDRIO Y DE REFERENCIA, SEPARADOS A MENOS 2 CM.

CONECTAR EL PH-METRO Y ESPERAR A QUE SE ESTABILICE.

15.5. EXPRESION DE LOS RESULTADOS. ANOTAR EL VALOR DE PH INDICADO POR EL APARATO.

REPETIR LA OPERACION DOS VECES AL MENOS.

15.6. OBSERVACIONES.

15.6.1. ES NECESARIA UNA LIMPIEZA ESCRUPULOSA DE LOS ELECTRODOS ENTRE DETERMINACIONES SUCESIVAS, LO QUE AL TRATARSE DE PRODUSTOS CON UN ALTO CONTENIDO EN MATERIA GRASA ES MAS LOBORIOSA QUE EN DISOLUCIONES DESENGRASADAS, REQUIRIENDO A VECES SER FROTADOS O SUMERGIDOS EN ALCOHOL, ETER DIETILICO, ETER DE PETROLEO, ETCETERA; SECARLOS CONVENIENTEMENTE Y LAVARLOS FINALMENTE CON AGUA DESTILADA; SECARLOS DE NUEVO, QUEDANDO ASI DISPUESTOS PARA UNA NUEVA LECTURA.

METODOS BIOLOGICOS

1. IDENTIFICACION DE ESPECIE ANIMAL

1.1. PRINCIPIO.

LAS PROTEINAS MUSCULARES DE LAS DISTINTAS ESPECIES ANIMALES, AUNQUE MUY SIMILARES ENTRE SI, TIENEN EN CADA GRUPO ZOOLOGICO UNA ESTRUCTURA ESOPECIFICA QUE PERMITE DIFERENCIAR CARMES DE ESPECIES DISTINTAS POR METODOS SEROLOGICOS (TECNICA DE UHLEN-HUTH).

SOLO ES APLICABLE A PRODUCTOS CRUDOS.

1.2. MATERIAL Y APARATOS.

1.2.1. TUBOS DE PRECIPITACION DE 20 X 4 MM.

1.2.2. GRADILLAS METALICAS PARA LOS TUBOS ANTERIORES.

1.2.3. PRECIPITOSCOPIO (CAMARA OSCURA CON LUZ INDIRECTA).

1.2.4. PIPETAS CAPILARES MUY FINAS.

1.2.5. PINZAS.

1.2.6. BISTURI.

1.2.7. TIJERAS.

1.2.8. GASA.

1.2.9. PAPEL DE FILTRO.

1.2.10. TUBOS DE ENSAYO.

1.2.11. ERLENMEYER DE 250 ML DE CAPACIDAD.

1.3. REACTIVOS.

1.3.1. SUERO FISIOLOGICO ESTERIL.

1.3.2. ANTISUEROS ESPECIFICOS (SU ESPECIFICIDAD DEBE SER CONTRASTADA EN EL MOMENTO DE SU UTILIZACION).

1.4. PROCEDIMMIENTO.

SEPARAR DEL PRODUCTO CARNICO ENTRE 5 Y 10 G DE CARNE MAGRA LO MAS EXENTA POSIBLE DE GRASA. PICAR EN TROZOS MUY PEQUEÑOS, PONIENDOSE A MACERAR EN SUERO FISIOLOGICO ESTERIL EN LA PROPORCION DE 1/10 MANTENER EL MACERADO PUESTO EN UN ERLENMEYER DE 250 ML EN FRIGORIFICO DURANTE 24 HORAS, AL OBJETO DE EVITAR LA PROLIFERACION BACTERIANA.

TRANSCURRIDAS LAS 24 HORAS, FILTRAR EL MACERADO A TRAVES DE GASA DE PAPEL DE FILTRO CUANTAS VECES SEA NECESARIO, HASTA OBTENER UN LIQUIDO TRANSPARENTE, SIN IMPORTAR QUE TENGA COLORACION PROPIA. DILUIR EL FILTRADO, QUE ESTABA A 1/10, HASTA 1/25 Y 1/50.

PONER EN UNA GRADILLA METALICA TRES TUBOS DE PRECIPITACION PARA LAS TRES DILUCIONES PREPARADAS. TOMAR CON PIPETA CAPILAR UNA PARA CADA DILUCION, PARTES DE LAS DISOLUCIONES (ANTIGENO PROBLEMA), LLEVANDOLO HASTA EL FONDO DE LOS TUBOS. COLOCAR SEGUIDAMENTE EL ANTISUERO QUE SE ENSAYA (ANTICUERPO ESPECIFICO CONOCIDO) EN LOS TRES TUBOS MEDIANTE PIPETA CAPILAR MUY FINA DE LA MANERA SIGUIENTE: PONER EL TUBO CONTENIENDO EL ANTIGENO PROBLEMA EN POSICION HORIZONTAL, LLEVANDO EN ESTE MOMENTO EN QUE SE VUELVE A PONER EL TUBO EN POSICION VERTICAL, CON LO QUE SALDRA UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE ANTISUERO QUE DESPLAZARA HACIA ARRIBA EL ANTIGENO, PERO SIN MEZCLARSE CON EL; VOLVER A PONER DE NUEVO EN POSICION HORIZONTAL EL TUBO, SACANDO RAPIDAMENTE LA PIPETA QUE CONTIENE EL ANTISUERO. EL TUBO DEBE ESTAR SIEMPRE EN POSICION HORIZONTAL A LA ENTRADA O LA SALIDA DE LA PIPETA CON EL ANTISUERO, EVITANDO DE ESTA FORMA QUE LOS DOS LIQUIDOS REACCIONANTES SE MEZCLEN. UTILIZAR UNA SOLA PIPETA PARA CADA ANTISUERO. ES CONVENIENTE PONER DOS TUBOS TESTIGOS, UNO PARA EL SUERO Y OTRO PARA EL ANTIGENO, TESTIGOS QUE NECESARIAMENTE DEBEN DAR SIEMPRE REACCION NEGATIVA.

1.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

LA REACCION POSITIVA SE PRODUCE CON LA APARICION DE UN ANILLO BLANQUECINO, OPALESCENTE, EN LA ZONA DE SEPARACION DE AMBOS LIQUIDOS REACCIONANTES ANTES DE 15 MINUTOS. REACCIONES POSITIVAS POSTERIORES A ESTE TIEMPO DEBEN CONSIDERARSE INESPECIFICAS. LA REACCION TIENE LUGAR, PARA UN MISMO ANTIGENO, A DISTINTOS TIEMPOS, SEGUN SEA EL TITULO DEL ANTISUERO EMPLEADO.

1.6. OBSERVACIONES.

1.6.1. LA LECTURA DE LOS RESULTADOS DEBE HACERSE CON LUZ INTENSA INDIRECTA Y SOBRE FONDO OSCURO, PREFERIBLEMENTE EN UN PRECIPITOSCOPIO.

1.7. REFERENCIAS.

1. NORMALIZACION DE TECNICAS EN BROMATOLOGIA SANITARIA. F. PEREZ FLOREZ. 1970.

ANEJO III

METODOS DE ANALISIS DE CEREALES Y DERIVADOS

16. ACIDO ASCORBICO (VITAMINA C)

(METODO CUALITATIVO)

16.1. PRINCIPIO.

ESTE METODO SIRVE PARA DETERMINAR LA PRESENCIA DE VITAMINA C EN HARINA Y CONSISTE EN LA APARICION DE PUNTOS BLANCOS SOBRE FONDO ROSA DEL REACTIVO SAL SODICA DEL 2,6 DICLOROFENOL INDOFENOL EN MEDIO ACIDO.

16.2. MATERIAL Y APARATOS.

16.2.1. PLACA PETRI DE 65 CM2.

16.3. REACTIVOS.

16.3.1. DISOLUCION ACUOSA AL 0,05 POR 100 DE LA SAL SODICA DEL 2,6 DICLOROFENOL INDOFENOL.

16.3.2. DISOLUCION ACUOSA AL 5 POR 100 DE ACIDO METAFOSFORICO.

16.4. PROCEDIMIENTO.

EXTENDER 10 G DE LA MUESTRA SOBRE UNA PLACA DE VIDRIO COMPACTANDOLA DE FORMA QUE QUEDE BIEN UNIFORME. ROCIAR POR COMPLETO CON LA DISOLUCION DEL ACIDO METAFOSFORICO Y A CONTINUACION HACER LO MISMO CON LA DISOLUCION DE LA SAL SODIC DEL 2,6 DICLOROFENOL INDOFENOL. AL CABO DE UNOS MINUTOS APARECEN UNOS PUNTOS BLANCOS MAS O MENOS GRANDES SOBRE EL FONDO ROSA.

18. FOSFORO

18.1. PRINCIPIO.

TRANSFORMACION DE LOS COMPUESTOS FOSFORADOS EN ORTOFOSFATOS Y POSTERIOR VALORACION COLORIMETRICA CON FOSFOMOLIBDOVANADATO.

18.2. MATERIAL Y APARATOS.

18.2.1. ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO QUE PERMITA LECTURAS A 430 NM.

18.2.2. CRISOLES DE PORCELANA, DE 35 MM DE DIAMETRO Y 45 MILIMETROS DE ALTURA, SIN TAPADERA.

18.2.3. MATRACES AFORADOS DE 100 Y 500 ML DE CAPACIDAD.

18.2.4. BAÑO DE AGUA.

18.2.5. ESTUFA DE DESECACION CON SENSIBILIDAD DE + - 1 GRADO C.

18.3. REACTIVOS.

18.3.1. AMONIACO CONCENTRADO DE DENSIDAD (FORMULA OMITIDA).

18.3.2. DISOLUCION DE MOLIBDATO AMONICO AL 10 POR 100 (P/V).

DISOLVER 100 G DE MOLIBDATO AMONICO EN AGUA CALIENTE; AÑADIR 10 ML DE AMONIACO CONCENTRADO DE (FORMULA OMITIDA).

O EN AGUA CALIENTE; AÑADIR 10 ML DE AMONIACO PARA ASEGURAR SU CONSERVACION Y COMPLETAR HASTA 1.000 MLADIR 10 ML DE AMONIACO CON AGUA DESTILADA.

18.3.3. ACIDO NITRICO DE DENSIDAD (FORMULA OMITIDA)

18.3.4. ACIDO NITRICO AL 10 POR 100 (P/V).-DISOLVER 16 ML DE ACIDO NITRICO. (FORMULA OMITIDA)

CO AL 10 POR 100 (P/V).-DISOLVER 16 ML DE ACIDO NITRICO. HASTA 100 ML CON AGUA DESTILADA.

18.3.5. DISOLUCION DE METAVANADATO DE AMONIO.-DISOLVER 2,35 GRAMOS DE METAVANADATO DE AMONIO EN 400 ML DE AGUA DESTILADA Y CALIENTE,. AÑADIR LENTAMENTE Y AGITANDO 20 ML DE LA DISOLUCION QUE CONTIENE 7 ML DE ACIDO NITRICO (FORMULA OMITIDA). Y 13 ML DE AGUA DESTILADA.

18.3.6. REACTIVO NITROMOLIBDOVANADATO.-MEZCLAR 200 ML DE LA DISOLUCION DE MOLIBDATO AMONICO AL 10 POR 100 Y 200 ML DE LA DISOLUCION DE METAVANADATO DE AMONIO, CON 134 ML DE ACIDO NITRICO (FORMULA OMITIDA). O EN SU LUGAR 192 DE ACIDO NITRICO (FORMULA OMITIDA). (FORMULA OMITIDA)

18.3.7. ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO DE DENSIDAD (FORMULA OMITIDA)

18.3.8. DISOLUCION PATRON DE FOSFORO.-PESAR 4,394 G DE FOSFATO MONOPOTASICO, PREVIAMENTE DESECADO EN ESTUFA A 100 GRADOS C DURANTE UNAS DOCE HORAS DISOLVER EN AGUA DESTILADA Y LLEVAR A UN VOLUMEN DE 1.000 ML EN UN MATRAZ AFORADO. 1 ML CORRESPONDE A 1.000 GAMMAS DE FOSFORO.

18.3.9. DISOLUCIONES PATRONES.-TOMAR 10 ML DE LA DISOLUCION ANTERIOR Y DILUIR CON AGUA DESTILADA HASTA EL ENRASE EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML, OBTENIENDOSE UNA CONCENTRACION DE 100 GAMMAS DE FOSFORO POR MILILITRO. TOMAR PARTES ALICUOTAS DE 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 Y 2,5 ML Y LLEVAR A UN VOLUMEN DE 10 ML CON AGUA DESTILADA. SU CONCENTRACION SERA DE 5, 10, 15, 20 Y 25 GAMMAS/ML. AÑADIR 10 ML DEL REACTIVO NITROMOLIBDOVANADATO Y PROCEDER COMO SE DESCRIBE EN EL METODO.

18.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR, CON UNA APROXIMACION DE + - 0,1 MG, DE 0,3 A 1,5 G DE MUESTRA EN UN CRISOL PREVIAMENTE CALCINADO Y TARADO. INTRODUCIR EL CRISOL EN LA MUFLA A UNA TEMPERATURA INFERIOR A 100 GRADOS C. AUMENTAR LA TEMPERATURA PAULATINAMENTE HASTA ALCANZAR LOS 550 GRADOS C; MANTENER ESTA TEMPERATURA DURANTE 2 HORAS. NO SE DEBE PASAR DE 550 GRADOS C, PARA EVITAR DECREPITACIONES Y VOLATILIZACIONES, YA QUE CUANDO EXISTEN CLORUROS EN EL PRODUCTO A ANALIZAR PUEDAN AFECTAR A LOS RESULTADOS. EL TIEMPO QUE DEBE PERMACER EL CRISOL CON LA MUESTRA EN LA MUFLA ES VARIABLE Y ESTARA DE ACUERDO CON LA NATURALEZA Y CON LA CANTIDAD DE LA MUESTRA. SUELEN SER SUFICIENTES 2 HORAS, PERO SI TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO LAS CENIZAS DEL CRISOL NO PRESENTAN EL COLOR BLANCO GRISACEO DESEADO, SACAR EL CRISOL DE LA DEL MUFLA Y DEJAR ENFRIAR DENTRO DE UN DESECADOR, AÑADIENDO POSTERIORMENTE UNAS GOTAS DE AGUA O, MEJOR UNAS GOTAS DE AGUA OXIGENADA DE 50 VOLUMENES. INTRODUCIR EL CRISOL EN LA ESTUFA DE DESECACION A 100 GRADOS C PARA ELIMINAR EL AGUA O EL AGUA OXIGENADA. ELIMINADA LA HUMEDAD, INTRODUCIR NUEVAMENTE EL CRISOL EN LA MUFLA A 550 GRADOS C.NADA LA HUMEDAD, INTRODUCIR NUEVAMENTE EL CRISOL EN LA DEJAR TRANSCURRIR EL TIEMPO NECESARIO HASTA QUE LAS CENIZAS CONTENIDAS EN EL CRISOL ALCANCEN EL COLOR DESEADO. SACAR EL CRISOL DE LA MUFLA Y LLEVAR A UN DESECADOR CON SUSTANCIAS DESECADORAS. DEJAR ENFRIAR HASTA LA TEMPERATURA AMBIENTE.

OBTENIDAS LAS CENIZAS, AÑADIR EN EL CRISOL UNA CANTIDAD DE ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO (18.3.7) HASTA QUE LAS CENIZAS QUEDEN CUBIERTAS EVAPORAR EL ACIDO CLORHIDRICO EN EL BAÑO DE AGUA A EBULLICION, HASTA SEQUEDAD, EN UN DISPOSITIVO ADECUADO PARA LA ELIMINACION DE VAPORES ACIDOS. DISOLVER EL RESIDUO EN 3 ML DE ACIDO NITRICO AL 10 POR 100 Y HERVIR EN EL BAÑO DE AGUA DURANTE 5 MINUTOS, UTILIZANDO EL DISPOSITIVO ADECUADO PARA LA ELIMINACION DE LOS VAPORES ACIDOS. NO SE DEBE DEJAR SECAR EL CONTENIDO PARA EVITAR LA HIDROLISIS DE LOS ORTOFOSFATOS QUE PRODUCIRIA REACCIONES COLOREADAS FILTRAR A TRAVES DE PAPEL, SOBRE UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML, LAVANDO CON AGUA DESTILADA LOS CRISOLES DONDE ESTABAN CONTENIDAS LAS CENIZAS Y DILUIR HASTA EL ENRASE.

PARA DESARROLLAR LA REACCION DE COLOR, COLOCAR, EN UNA CUBETA O TUBO DE ESPECTROFOTOMETRO O FOTOCOLORIMETRO, 10 ML DE LA DISOLUCION PROBLEMA Y AÑADIR 10 ML DEL REACTIVO NITROMOLIBDOVANADATO. AGITAR, DEJAR REPOSAR DURANTE DIEZ

MINUTOS. EFECTUAR LA LECTURA ESPECTROFOTOMETRICA O FOTOCOLORIMETRICA A 430 NM, UTILIZANDO COMO BLANCO LA MEZCLA DE 10 ML, DE AGUA DESTILADA Y 10 ML DE REACTIVO NITROMOLIBDOVANATO. LA COLORACION AMARILLA DESARROLLADA ES ESTABLE DURANTE VARIOS DIAS.

18.5. CALCULOS.

LEER EN EL ESPECTROFOTOMETRO O FOTOCOLORIMETRO Y BUSCAR SU CORRESPONDENCIA EN FOSFORO EN LA CURVA PATRON.

(FORMULA OMITIDA)

18.6. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO DE RACIONALIZACION Y NORMALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA UNE 64017.

19. DETECCION Y CUANTIFICACION DE HARINAS DE TRIGO COMUN ("TRITICUM VULGARE") EN SEMOLAS Y PASTAS ALIMENTICIAS

19.1. PRINCIPIOS.

EL METODO SE BASA EN LA DETECCION Y CUANTIFICACION DE UN COMPONENTE DESIGNADO CM1, DEL EXTRACTO CLOROFORMO-METANOL DEL ENDOSPERMO DE TRIGO O DE PRODUCTOS DERIVADOS DE EL, CUYO CONTROL GENETICO RADICA EN EL CROMOSOMA 1D DE "TRITICUM VULGARE" Y QUE POR TANTO NO SE ENCUENTRA EN " T. DURUM".

EL MENCIONADO EXTRACTO, AL QUE SE DESIGNA PROTEINA CM, SE FRACCIONA POR ELECTROFORESIS SOBRE GEL DE ALMIDON, Y EL COMPONENTE CM1 SE ESTIMA VISUALMENTE O SE CUANTIFICA DENSITOMETRICAMENTE.

19.2. MATERIAL Y APARATOS.

19.2.1. BALANZA ANALITICA.

19.2.2. EQUIPO DE ELECTROFORESIS.-FUENTE DE TENSION, CORRIENTE CONTINUA 0-500 V, -100 MA. PLACA DE VIDRIO DE 20 X 20 CM MARCOS DE PLASTICO DE 20 X 20 CM EXTERIOR, DE 18 X 18 CM INTERIOR Y DE 3 MM DE ESPESOR. DEPOSITOS DE ELECTRODOS DE 20 X 10 X 10 CENTIMETROS.

19.2.3. DENSITOMETRO DE REFLEXION EN EL CASO DE QUE SE QUIERA CUANTIFICAR.

19.2.4. TUBOS DE 8 X 50 MM O SIMILAR, CON TAPONES DE CORCHO.

19.2.5. GRADILLA.

19.2.6. DOS PLACAS DE ACERO INOXIDABLE DE 5 X 7 X 1 CM O DIMENSIONES SIMILARES.

19.2.7. JERINGA DE VIDRIO DE 1 ML DE CAPACIDAD.

19.2.8. CAPILARES DE 10 CM DE LARGO.

19.2.9. PLACA DE PORCELANA CON POCILLOS.

19.2.10. PROBETAS DE 100 ML Y 1.000 ML.

19.2.11. VASOS DE 500 ML Y DE 1.000 ML.

19.2.12. BAÑO DE AGUA CON TERMOMETRO.

19.2.13. CUBETA DE PLASTICO DE AL MENOS 25 X 25 X 5 CM.

19.3. REACTIVOS.

19.3.1. CLOROFORMO.

19.3.2. METANOL.

19.3.3. ETER DIETILICO LIBRE DE PEROXIDOS.

19.3.4. ETANOL DEL 70 POR 100.

19.3.5. PAPEL ALBET NUMERO 502, O SIMILAR, Y PAPEL DE FILTRO.

19.3.6. ALMIDON HIDROLIZADO PARA ELECTROFORESIS CONNAUGLIT O SIMILAR.

19.3.7. TAMPON LACTATO DE ALUMINIO-ACIDO LACTICO, 0,1 N, PH 3,2 EN UREA 3 M.- DILUIR 4,9 G DE LACTATO DE ALUMINIO EN AGUA DESTILADA, AÑADIR 10,6 ML DE ACIDO LACTIVO PURISIMO Y 180 G DE UREA, COMPLETANDO HASTA 1 LITRO CON AGUA DESTILADA. ESTE TAMPON SIRVE TANTO PARA EL GEL DE ALMIDON COMO PARA LOS COMPARTIMENTOS DE LOS ELECTRODOS.

19.3.8. SOLUCION DE NIGROSINA SOLUBLE EN AGUA AL 0,5 POR 100 EN ACETICO-AGUA (1/1) (V/V).

19.3.9. GEL DE ALMIDON.- MEZCLAR 24,5 G DE ALMIDON Y 180 ML DE TAMPON EN UN VASO DE 500 ML, AGITAR SUAVEMENTE CON UNA VARILLA EN BAÑO DE AGUA A 80+-3 GRADOS C HASTA QUE GELIFIQUE (2-3 MINUTOS). EL GEL CALIENTE SE VIERTE SOBRE UNA PLACA S DE VIDRIO A LA QUE SE HA SUPERPUESTO UN MARCO DE PLASTICO DE LAS MISMAS DIMENSIONES EXTERNAS QUE LA PLACA Y DE 3 MM DE ESPESOR, EXTENDER UNIFORMEMENTE CON LA VARILLA Y, FINALMENTE, PRENSAR SUAVEMENTE CON UNA PLACA DE VIDRIO DE LAS MISMAS DIMENSIONES SIN DEJAR BURBUJAS. DEJAR REPOSAR DURANTE AL MENOS 3 HORAS.

19.4. PROCEDIMIENTO.

19.4.1. EXTRACCION Y PREPARACION PARA ELECTROFORESIS DE LA PROTEINA CM.- PESAR 50 MG DE HARINA, SEMOLA, GRANO O PASTA ALIMENTICIA Y TRANSFERIRLOS O UN TUBO DE 8 X 50 MM O SIMILAR. EL GRANO Y LA PASTA SE APLASTAN POR PRESION ENTRE DOS PLACAS DE ACERO INOXIDABLE ANTES DE SER TRANSFERIDAS AL TUBO. AÑADIR APROXIMADAMENTE 0,5 ML DE ETER DIETILICO EN CADA TUBO Y DEJAR REPOSAR DURANTE NO MENOS DE 30 MINUTOS, AGITANDO OCASIONALMENTE. DESPUES DE LA ULTIMA AGITACION SE DEJA SEDIMENTAR POR GRAVEDAD Y EL SOBRENADANTE SE ELIMINA CON LA AYUDA DE UNA JERINGA. EL DISOLVENTE RESIDUAL SE DEJA EVAPORAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE O EN UNA ESTUFA A 35 GRADOS C DURANTE 10 MINUTOS. AGREGAR APROXIMADAMENTE 0,25 ML DE CLOROFORMO-METANOL (2/1) (V/V) A CADA TUBO, TAPAR Y DEJAR REPOSAR DURANTE 2 HORAS, AGITANDO OCASIONALMENTE.

DESPUES DE LA ULTIMA AGITACION, DEJAR SEDIMENTAR POR GRAVEDAD Y TRANSFERIR EL EXTRACTO SOBRENADANTE CON UN CAPILAR A UNA PIEZA DE PAPEL ALBET NUMERO 502 O SIMILAR, DE DIMENSIONES 3 X 10 MM. CON EL CAPILAR SE SATURA EL PAPEL, QUE SE DEJA EVAPORAR ANTES DE UNA NUEVA ADICION (VER 19.6.4), REPITIENDO LA OPERACION HASTA AGOTAR EL SOBRENADANTE. PARA ESTA OPERACION, LAS PIEZAS DE PAPEL A LAS QUE SE VAN A TRANSFERIR LAS DISTINTAS MUESTRAS SE DEPOSITAN EN DISTINTOS POCILLOS DE UNA PLACA DE PORCELANA O SIMILAR. SE RECOMIENDA REALIZAR LA TRANSFERENCIA ENTRE 10 Y 20 MUESTRAS SIMULTANEAMENTE.

19.4.2. ELECTROFORESIS SOBRE GEL DE ALMIDON DE LA PROTEINA CM.- SEPARAR CUIDADOSAMENTE UNA DE LAS PLACAS DE VIDRIO CON LA AYUDA DE UNA ESPATULA Y RECUBRIR LA SUPERFICIE EXPUESTA DEL GEL CON UN PLASTICO FINO. MARCAR EN DICHA SUPERFICIE UNA FILA DE RANURAS (1 CM DE LARGO CADA UNA) A 3 CM DE UNO DE LOS BORDES DEL GEL. ALOJAR EN DICHA RANURA LAS PIEZAS DE PAPEL ALBET NUMERO 502 O SIMILAR QUE PORTAN LAS MUESTRAS, PREVIAMENTE IMPREGNADAS CON TAMPON. DISPONER EL GEL HORIZONTALMENTE APOYADO SOBRE LAS CUBETAS DE ELECTRODOS Y ESTABLECER LA CONEXION ELECTRICA MEDIANTE PUENTES DE PAPEL DE FILTRO (20 PAPELES DE DIMENSIONES APROPIADAS SUPERPUESTOS).

19.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

19.5.1. DETECCION DE TRIGO EXAPLOIDE.

LA ELECTROFORESIS DEL EXTRACTO CM DE TRIGO EXAPLOIDE ("T. VULGARE") MUESTRA TRES BANDAS DESIGNADAS CM1, CM2 Y CM3, MIENTRAS QUE LA DE TRIGO TETRAPLOIDE ("T. DURUM") SOLO PRESENTA DOS CM2 Y CM3.

EL TRIGO EXAPLOIDE SE DETECTA EN UNA MEZCLA POR LA APARICION DE CM1 EN EL PERFIL ELECTROFORETICO. PARA EL TAMAÑO DE MUESTRA ANTERIORMENTE PROPUESTO, CM1 SE DETECTA EN MEZCLA DE 10-15 POR 100. USANDO MUESTRAS DE TAMAÑO DOBLE, EL UMBRAL DE DETECCION SE REDUCE PROPORCIONALMENTE.

19.5.2. CUANTIFICACION DE TRIGO EXAPLOIDE EN MEZCLAS.- LA ACOTACION DEL PORCENTAJE DE "T. VULGARE" EN UNA MEZCLA SE BASA EN LA CUANTIFICACION DE LA RELACION CM1, CM2 Y EN LA ESTIMACION DE LA VARIABILIDAD INTRAESPECIFICA DE CM1 Y CM2.

EN LA FIGURA 1-A SE PRESENTA LA FORMA DE ACOTAR GRAFICAMENTE EL PORCENTAJE DE TRIGO EXAPLOIDE EN MEZCLAS BASANDOSE EN LA MEDIDA DE LA RELACION CM1, CM2 MEDIANTE DENSITOMETRIA DE REFLECTANCIA CON LUZ DE 620 MM. EN LA FIGURA 1-B SE REPRESENTA LA VARIACION DE LA AMPLITUD DE LA ACOTACION SEGUN EL VALOR OBNTENIDO.

UNA ESTIMACION SEMICUANTITATIVA, MAS IMPRECISA QUE LA ANTERIOR, PUEDE OBTENERSE POR COMPARACION VISUAL DEL PROBLEMA CON UNA SERIE DE MEZCLAS CONOCIDAS QUE PUEDEN INCORPORARSE AL MISMO GEL.

19.6. OBSERVACIONES.

19.6.1- LAS CONDICIONES DE ELECTROFORESIS SON 10 V/CM DURANTE SEIS HORAS.

19.6.2. LA TINCION SE REALIZA CON NIGROSINA AL 0,05 POR 100 EN ACETICO.- AGUA (1/1) (V/V) DURANTE 14-16 HORAS EN UNA CUBETA DE PLASTICO DE DIMENSIONES APROPIADAS, DEJANDO EL GEL CON LA CARA OPUESTA A LA DE LA INSERCION HACIA ARRIBA.

19.6.3. LA DECOLORACION DEL FONDO SE REALIZA EN POCOS MINUTOS CON ETANOL AL 70 POR 100.

19.6.4. CUANDO SE MANEJAN 10-20 MUESTRAS, DESPUES DE UNA TRANSFERENCIA SE DEVUELVE EL CAPILAR AL TUBO Y SE PASA A LA MUESTRA SIGUIENTE. CUANDO SE LLEGA A LA MUESTRA FINAL, YA SE HA EVAPORADO LA PRIMERA Y ESTA EN CONDICIONES DE UNA NUEVA TRANSFERENCIA.

19.7. REFERENCIAS.

1. R. GARCIA FAURE Y F. GARCIA OLMEDO: "A NEW METHOD FOR DE ESTIMATION OF COMMON WHEAT IN PASTA PRODUCTS". LEBENSM. WIS. U. TECHNOL. VOL. 2. 1969.

(GRAFICOS OMITIDOS)

20. DETECCION DE HARINAS DEGRADADAS POR EL ATAQUE DE PENTATOMIDOS.

20.1. PRINCIPIO.

SE DETECTA LA DEGRADACION DE LA CALIDAD PANADERA DE LA MASA DE HARINA MEDIANTE LA DETERMINACION DEL EXCESO DE ACTIVIDAD PROTEOLITICA.

20.2. MATERIAL Y APARATOS.

COMO EN 14.2.

20.3. REACTIVOS.

COMO EN 14.3.

20.4. PROCEDIMIENTO.

COMO EL 14.4 CON LAS SIGUIENTES MODIFICACIONES:

20.4.1. EL NUMERO DE PIEZAS DE MASA SERAN SEIS.

20.4.2. TRANSCURRIDO EL TIEMPO NORMAL DE 26 MINUTOS DEL COMIENZO DE AMASADO, EXTRAER TRES PIEZAS DE LA CAMARA DEL ALVEOGRAFO Y ANALIZARLAS OBTENIENDO SUS CORRESPONDIENTES CURVAS. EL RESTO DE LAS PIEZAS SE ANALIZAN SOBRE EL MISMO PAPEL DESPUES DE UN PERIODO DE REPOSO DE TRES HORAS.

SI ALGUNO DE LOS ALVEOLOS O CURVAS FUERA CLARAMENTE ANORMAL DEBE DESECHARSE LA CURVA.

20.5. EXPRESION DE LOS RESULTADOS.

SI EXISTE UNA ACTIVIDAD PROTEOLITICA EXCESIVA, LA SEGUNDA SERIE DE CURVAS PRESENTARA MENOR EXTENSIBILIDAD Y TENACIDAD, SIENDO MAYOR LA DIFERENCIA ENTRE ELLAS, A MAYOR ACTIVIDAD.

CUANTIFICAR ESTA ACTIVIDAD CALCULANDO LA DEGRADACION DE W Y G EN LA FORMA SIGUIENTE:

CALCULAR LOS VALORES DE ESTOS INDICES POR SEPARADO PARA LA PRIMERA SERIE DE CURVAS (CON TIEMPO DE REPOSO NORMAL) WO Y GO Y PARA LA SEGUNDA (CON TIEMPO DE REPOSO DE 3 HORAS) W1 Y G1.

(FORMULAS OMITIDAS)

20.6. REFERENCIAS.

1. HARINAS. ACTIVIDAD PROTEOLITICA. H-80277-A. MINISTERIO DEL AIRE.

ANEJO IV

METODOS DE ANALISIS DE FERTILIZANTES

16(B9. FOSFORO SOLUBLE EN AGUA

(COLORIMETRIA)

16(B).1. PRINCIPIO.

EXTRAER EL FOSFORO SOLUBLE EN AGUA DE LA MUESTRA Y DETERMINAR SU CANTIDAD MIDIENDO ESPECTROFOTOMETRICAMENTE LA ABSORBANCIA DEL COMPLEJO COLOREADO QUE FORMA EL ION ORTOFOSFATO CON EL MOLIBDENO.

NO ES APLICABLE A LAS ESCORIAS BASICAS NI A LOS ABONOS QUE PRODUCEN SOLUCIONES COLOREADAS O QUE CONTENGAN OTROS IONES ADEMAS DEL ORTOFOSFATO QUE FORMEN COMPLEJO COLOREADOS CON EL MALIBDOVANADATO.

16(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

16(B).2.1. MATRACES AFORADOS DE 100 ML DE CAPACIDAD.

16(B).2.2. BURETAS DE 20 ML DE CAPACIDAD.

16(B).2.3. PIPETAS DE 20 ML DE CAPACIDAD.

16(B).2.4. ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO CAPACES PARA LECTURAS A 400 NM.

16(B).3. REACTIVOS.

16(B).3.1. SOLUCIONES DE FOSFATO MONOPOTASICO PURO Y SECO (A 105 GRADOS C DURANTE DOS HORAS) QUE CONTENGAN DE 0,4 A 1,0 MG DE P2O5/ML CON INTERVALOS DE 0,1 MG/ML. PREPARAR SEMANALMENTE LAS SOLUCIONES DE 0,4 A 0,7 MG DE P2O5/ML.

16(B).3.2. ACIDO NITRICO.

16(B).3.3. SOLUCION DE MOLIBDOVANADATO.- DISOLVER 40 G DE MOLIBDATO VANADATO AMONICO TETRAHIDRATO EN 400 ML DE AGUA CALIENTE Y ENFRIAR. DISOLVER 2 G DE METAVANADATO AMONICO EN 250 ML DE AGUA CALIENTE, ENFRIAR Y AÑADIR 450 ML DE ACIDO PERCLORICO DEL 70 POR 100. AÑADIR GRADUALMENTE Y AGITANDO LA SOLUCION DE MOLIBDATO A LA SOLUCION DE METAVANADATO Y DILUIR A 2 L.

16(B).4. PROCEDIMIENTO.

16(B).4.1. PREPARACION DE LA SOLUCION.- PONER UN GRAMO DE MUESTRA SOBRE UN FILTRO DE 9 CM DE DIAMETRO Y LAVAR CON PEQUEÑAS PORCIONES DE AGUA HASTA OBTENER, APROXIMADAMENTE, 250 ML DE FILTRADO. DEJAR PASAR CADA PORCION A TRAVES DEL FILTRO ANTES DE AÑADIR OTRA NUEVA Y SI EL FILTRADO NO PUEDE COMPLETARSE AL CABO DE UNA HORA, APLICAR SUCCION. SI EL FILTRADO ESTA TURBIO AÑADIR DE 1 A 2 ML DE ACIDO NITRICO. ENRASAR A 250 ML CON AGUA DESTILADA Y MEZCLAR. PARA MUESTRAS CON MENOS DEL 5 POR 100 DE P2O5 DILUIR A 250 ML Y PARA MUESTRAS QUE CONTENGAN MAS DEL 5 POR 100 DE P2O5 DILUIR A UN VOLUMEN TAL QUE UNA ALICUOTA DE 5 O 10 ML CONTENGA DE 2 A 5 MG DE P2O5.

16(B).4.2. MUESTRAS QUE CONTIENEN MENOS DEL 5 POR 100 DE P2O5.- INTRODUCIR EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML UNA ALICUOTA DE 5 ML DE LA SOLUCION PROBLEMA (16(B).4.1) Y 5 ML DE LA SOLUCION PATRON DE FOSFATO QUE CONTENGA 2 MG DE P2O5. DESARROLLAR COLOR COMO EN 16(B).5.1 Y DETERMINAR LA ABSORBANCIA CORRESPONDIENTE DE LA MISMA MANERA QUE PARA LAS SOLUCIONES PATRONES DE FOSFATOS 16(B).6.1, AJUSTANDO EL APARATO A CERO DE ABSORBANCIA CON EL PATRON DE 2 MG. LEER EL CONTENIDO DE P2O5 DE LA SOLUCION PROBLEMA LLEVANDO EL VALOR DE LA ABSORBANCIA A LA CURVA PATRON (16(B).6.1).

COMO SERIES DE SOLUCIONES PROBLEMAS, VACIAR Y RELLENAR LA CELULA DE REFERENCIA CON EL PATRON DE 2 MG DESPUES DE CADA DETERMINACION.

16(B).4.3. MUESTRAS QUE CONTIENEN MAS DE 5 POR 100 DE P2O5. TOMAR ALICUOTA DE 5 O 10 ML DE LA SOLUCION PROBLEMA (PARA QUE CONTENGA DE 2 A 5 MG DE P2O5) (16(B)4.1.) E INRTRODUCIR EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML SIN ADICION DE SOLUCION PATRON DE FOSFATO Y PROCEDER COMO EN 16(B).4.2.

16(B).5. CALCULO.

16 (B).5.1. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.- TOMAR ALICUOTAS DE LOS SIETE PATRONES DE FOSFATO MONOPOTASICO (16(B).3.1) (CONTENIENDO DE 2-5 MG DE P2O5/ALICUOTA) EN MATRACES AFORADOS DE 100 ML Y AÑADIR 45 ML DE AGUA. A CONTINUACION, Y DENTRO DE CINCO MINUTOS CUANDO SE TRATA DE SERIES, AÑADIR 20 ML DE MOLIBDOVANADATO CON UNA BURETA O PIPETA, ENRASAR Y MEZCLAR. DEJAR REPOSAR DIEZ MINUTOS. LEER A 400 NM.

(FORMULA OMITIDA)

16(B).6. OBSERVACIONES.

16(B).6.1. INTRODUCIR EN MATRACES AFORADOS DE 100 ML ALICUOTAS DE 5 ML DE LAS SOLUCIONES DE FOSFATO 16(B).3.1 QUE CONTENGA 2 Y 3,5 MG DE P2O5/ALICUOTA, RESPECTIVAMENTE, Y DESARROLLAR COLOR COMO EN 16(B).5.1. AJUSTAR EL APARATO PONIENDO A CERO LA ABSORBANCIA CON LA SOLUCION PATRON DE 2 MG Y DETERMINAR LA ABSORBANCIA PARA LA SOLUCION PATRON DE 3,5 MG (ESENCIAL QUE LA ABSORBANCIA DE ESTA ULTIMA SEA PRACTICAMENTE IDENTICA AL VALOR QUE LE CORRESPONDE EN LA CURVA PATRON).

16(B).7. REFERENCIAS.

1. A. O. A. C.: "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". ED. 1970, PAGINA 14/20.032.

17(B). FOSFORO SOLUBLE EN AGUA Y EN CITRATO AMONICO NEUTRO

(ASIMILABLE) (COLORIMETRIA)

17(B).1. PRINCIPIO.

DESPUES DE SEPARAR EL FOSFORO SOLUBLE EN AGUA DE LA MUESTRA, SOMETER EL RESIDUO A UNA EXTRACCION CON DISOLUCION NEUTRA DE CITRATO AMONICO. EL FOSFORO ASIMILABLE PUEDE DETERMINARSE EN LA DISOLUCION OBTENIDA AL REUNIR LOS EXTRACTOS ACUOSOS Y DE CITRATO AMONICO.

NO ES APLICABLE A AQUELLOS ABONOS QUE DESPUES DE TRATARLOS CON LA MEZCLA ACIDA TERNARIA CONSERVEN ALGO DE COLOR O AQUELLOS QUE CONTENGAN OTROS IONES ADEMAS DEL ORTOFOSFATO QUE FORMEN COMPLEJOS COLOREADOS CON EL MOLIBDOVANADATO.

17(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

17(B).2.1. MATRACES AFORADOS DE 500 ML DE CAPACIDAD.

17(B).2.2. MATRACES AFORADOS DE 200 ML.

17(B).2.3. MATRACES AFORADOS DE 250 ML.

17(B).2.4. ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO CAPACES PARA LECTURAS A 400 NM.

17(B).2.5. PLACA CALEFACTORA.

17(B).3. REACTIVOS.

17(B).3.1. SOLUCIONES DE FOSFATO MONOPOTASICO PURO Y SECO (A 105 GRADOS C DURANTE DOS HORAS) QUE CONTENGAN DE 0,4 A 1,0 MG DE P2O5/ML CON INTERVALOS DE 0,1 MG/ML. PREPARAR SEMANALMENTE LAS SOLUCIONES DE 0,4 A 0,7 MG DE P2O5/ML.

17(B).3.2. MEZCLA ACIDA TERNARIA.- AÑADIR 20 ML DE ACIDO SULFURICO A 100 ML DE ACIDO NITRICO, MEZCLAR Y AÑADIR 40 ML DE ACIDO PERCLORICO AL 70 POR 100.

17(B).3.3. MOLIBDOVANADATO MODIFICADO.- DISOLVER 40 G DE MOLIBDATO AMONICO EN 400 ML DE AGUA CALIENTE Y ENFRIAR. DISOLVER 2 G DE METAVANADATO AMONICO EN 250 ML DE AGUA CALIENTE, ENFRIAR Y AÑADIR 250 ML DE ACIDO PERCLORICO DEL 70 POR 100. AÑADIR GRADUALMENTE AGITANDO LA SOLUCION DE MOLIBDATO A LA SOLUCION DE METAVANADATO Y ENRASAR A 2 LITROS.

17(B).3.4. SOLUCION DE CITRATO AMONICO NEUTRO.- DEBE TENER UN PESO ESPECIFICO DE 1,09 A 20 GRADOS C Y UN PH IGUAL A 7,0 DETERMINADO ELECTROMETRICAMENTE.

DISOLVER 370 G DE ACIDO CITRICO CRISTALIZADO EN 1,5 LITROS DE AGUA Y CASI NEUTRALIZAR, AÑADIENDO 345 ML DE HIDROXIDO AMONICO (DE 28 A 29 POR 100 DE NH3). SI LA CONCENTRACION DE AMONIACO ES MENOR DEL 28 POR 100 AÑADIR MAYOR VOLUMEN Y DISOLVER EL ACIDO CITRICO EN UN VOLUMEN MAS PEQUEÑO DE AGUA. ENFRIAR Y COMPROBAR EL PH. AJUSTAR A PH = 7 CON HIDROXIDO AMONICO (1 + 7) O CON DISOLUCION DE ACIDO CITRICO. SI ES PRECISO DILUIR LA DISOLUCION HASTA QUE EL PESO ESPECIFICO SEA DE 1,09 A 20 GRADOS C. EL VOLUMEN SERA APROXIMADAMENTE DE 2 LITROS.

CONSERVAR EN FRASCOS HERMETICAMENTE CERRADOS Y COMPROBAR EL PH DE VEZ EN CUANDO, REAJUSTANDOLO SI DIFIERE DE 7,0.

17(B).4. PROCEDIMIENTO.

17(B).4.1. PREPARACION DE LA SOLUCION.- PONER UN GRAMO DE MUESTRA SOBRE UN PAPEL DE FILTRO DE 9 CM DE DIAMETRO Y LAVAR POR GRAVEDAD SOBRE UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML CON 12 PORCIONES DE AGUA DE 10 ML. DEJAR QUE CADA PORCION PASE A TRAVES DEL FILTRO ANTES DE AÑADIR MAS. DEJAR ESCURRIR EL PAPEL COMPLETAMENTE Y DESPUES ENJUAGAR EL EMBUDO CON 10 ML DE AGUA DESTILADA.

TRATAR EL RESIDUO INSOLUBLE EN AGUA CON LA SOLUCION DE CITRATO AMONICO NEUTRO, TRANSFIRIENDO EL FILTRO Y EL RESIDUO, DENTRO DEL INTERVALO DE UNA HORA, A UN MATRAZ DE 200 O 250 ML QUE CONTENGA 100 ML DE CITRATO AMONICO PREVIAMENTE CALENTADO A 65 GRADOS C. CERRAR HERMETICAMENTE EL MATRAZ CON UN TAPON DE GOMA BLANDA, AGITAR VIGOROSAMENTE HASTA REDUCIR A PULPA EL PAPEL Y QUITAR LA PRESION LEVANTANDO MOMENTANEAMENTE EL TAPON. A CONTINUACION COLOCAR EL MATRAZ CERRADO EN UN BAÑO AGITADOR A 65 GRADOS C EXACTAMENTE Y AGITAR DURANTE UNA HORA (LA ACCION DEL APARATO DEBE SER TAL QUE LA DISPERSION DE LA MUESTRA HA DE SER MANTENIDA CONTINUAMENTE EN LA SOLUCION DE CITRATO Y QUE ESTA SOLUCION BAÑE CONTINUAMENTE LAS SUPERFICIES INTERNAS DEL TAPON Y DEL MATRAZ). QUITAR EL MATRAZ DEL APARATO Y TRANSFERIR SU CONTENIDO AL QUE TIENE LA FRACCION SOLUBLE EN AGUA. ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE INMEDIATAMENTE ENRASAR Y MEZCLAR COMPLETAMENTE Y DEJAR EN REPOSO POR LO MENOS DOS HORAS ANTES DE TOMAR LA ALICUOTA.

17(B).4.2. MUESTRAS QUE CONTIENEN MENOS DEL 5 POR 100 DE P2O5.- TOMAR UNA ALICUOTA DE 10 ML EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 125 ML. AÑADIR 5 ML DE MEZCLA ACIDA TERNARIA, AGITAR EL MATRAZ CON MOVIMIENTO ROTATORIO, HERVIR SUAVEMENTE DURANTE QUINCE MINUTOS Y DIGERIR A 150-200 GRADOS C HASTA QUE LA SOLUCION QUEDE CON UNA SAL BLANCA E INCOLORA. EVAPORAR HASTA HUMOS BLANCOS Y CONTINUAR CALENTANDO DURANTE CINCO MINUTOS. ENFRIAR Y AÑADIR 15 ML DE AGUA Y HERVIR CINCO MINUTOS. TRASVASAR EL CONTENIDO DEL ERLENMEYER A UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML, DILUIR A 50 ML, AGITAR CON MOVIMIENTOS ROTATORIOS Y ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE. AÑADIR 5 ML DE LA SOLUCION PATRON DE FOSFATO QUE CONTENGA 2 MG DE P2O5 Y 20 ML DE LA SOLUCION DE MOLIBDOVANADATO MODIFICADO. DILUIR A 100 Y CONTINUAR COMO EN 16(B).4.2.

17(B).4.3. MUESTRAS QUE CONTIENEN MAS DEL 5 POR 100 DE P2O5.

INTRODUCIR EN UN MATRAZ DE 100 ML UNA ALICUOTA DE 5 O 10 ML DE TAL FORMA QUE DICHA ALICUOTA CONTENGA DE 2 A 5 MG DE P2O5 Y DIGERIR LA MUESTRA COMO EN 17(B).4.2.

CONTINUAR COMO EN 17(B).4.2, PERO SIN AÑADIR SOLUCION PATRON DE FOSFATO.

17(B).5. CALCULO.

17(B).5.1. PREPARACION DE LA CURVA PATRON COMO EN 16(B).5.1.

17(B).5.2. MUESTRAS QUE CONTIENEN MENOS DEL 5 POR 100 DE P2O5 (COMO EN 16(B).5.2).

17(B).5.3. MUESTRAS QUE CONTIENEN MAS DEL 5 POR 100 DE P2O5 (COMO EN 16(B).5.3).

17(B).6. REFERENCIAS.

1. A. O. A. C.: "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". ED. 1970, PAGINA 15/2.046.

22. BORO SOLUBLE EN ACIDO.

22.1. PRINCIPIO.

CONSISTE EN PASAR EL BORO A BO3H3, EL CUAL PUEDE SER VALORADO CON UN ALCALI FUERTE, PREVIA EXALTACION DE SU ACIDEZ POR FORMACION DE UN ION COMPLEJO CON UNA SUSTANCIA POLIHIDROXILADA (MANITOL O SORBITOL).

22.2. MATERIAL Y APARATOS.

22.2.1. BALANZA ANALITICA.

22.2.2. PH-METRO O SIMILAR.

22.2.3. VASO DE 250 ML.

22.3. REACTIVOS.

22.3.1. SOLUCION PATRON DE ACIDO BORICO.

DISOLVER 1 G DE BO3H3 EN H2O Y LLEVAR A 1 LITRO.

1 ML CONTENDRA 0,1748 MG DE B.

22.3.2. SOLUCION PATRON DE NAOH.

PREPARAR UNA SOLUCION DE CONCENTRACION 0,025 N LIBRE DE CO2 Y A CONTINUACION SE TITULA DE LA SIGUIENTE MANERA: PIPETEAR 25 ML DE LA SOLUCION PATRON DE BO3H3 DEPOSITANDOLOS EN UN ERLENMEYER DE 250 ML. AÑADIR 3 G DE CLNA E INDICADOR ROJO DE METILO, DILUYENDOSE CON AGUA DESTILADA HASTA 150 ML; CALENTAR HASTA EBULLICION PARA EXPULSAR EL CO2, ENFRIAR Y TITULAR POTENCIOMETRICAMENTE COMO EN 22.4. REALIZAR UN BLANCO REPITIENDO LA TITULACION CAMBIANDO LOS 25 ML DE LA SOLUCION PATRON DE BO3H3 POR 25 ML DE AGUA. PARA DETERMINAR LA EQUIVALENCIA EN B SE EFECTUAN LOS SIGUIENTES CALCULOS:

MG B/ML = 4,369/ML DE LA SOLUCION DE NAOH-ML GASTADOS EN EL BLANCO.

ESTA SOLUCION SE DEBE PRESERVAR DEL CO2 ATMOSFERICO.

22.3.3. SOLUCION DEL INDICADOR ROJO DE METILO.

DISOLVER 0,1 MG DE ROJO DE METILO EN 50 ML DE ALCOHOL, DILUIR HASTA 100 ML CON AGUA Y FILTRAR SI ES NECESARIO.

22.3.4. CLH.

22.3.5. CLH 0,5 N.

22.3.6. CLH 0,02 N.

22.3.7. SOLUCION DE (NO3)2 PB AL 10 POR 100.

22.3.8. NAOH 0,5 N.

22.3.9. NAOH 0,025 N.

22.3.10. CLNA.

22.3.11. MANITOL O SORBITOL.

22.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR LA MUESTRA CON EXACTITUD DE 1 MG (22.6.1), DEPOSITANDO LA CANTIDAD DE SUSTANCIA PESADA EN UN VASO DE 250 ML. AÑADIR, APROXIMADAMENTE, 50 ML DE H2O Y 3 ML DE CLH. CALENTAR A EBULLICION Y MANTENER ESTA DURANTE UN TIEMPO SUFICIENTE COMO PARA DESCOMPONER LOS CARBONATOS. MANTENER A CONTINUACION LA SOLUCION CALIENTE SIN LLEGAR A EBULLICION DURANTE EL PROCEDIMIENTO DE ELIMINACION DE POSIBLES FOSFATOS. AÑADIR UNOS 10 ML DE SOLUCION DE (NO3)2 PB AL 10 POR 100 O 1 ML POR CADA 1,2 POR 100 DE P2O5 SI EL CONTENIDO DE ESTE SE CONOCE Y ES SUPERIOR AL 12 POR 100. AÑADIR CO3H NA HASTA NEUTRALIZAR. SEGUIDAMENTE AÑADIR UNAS CUANTAS GOTAS DE ROJO DE METILO Y CONTINUAR AÑADIENDO CO3H NA HASTA CONSEGUIR UN VIRAJE ALCALINO DEL ROJO DE METILO (AMARILLO O LIGERAMENTE ANARANJADO). A CONTINUACION CALENTAR LA MEZCLA AL BAÑO DE MARIA DURANTE TREINTA MINUTOS, AÑADIENDO PEQUEÑAS CANTIDADES DE CO3H NA SI FUERA NECESARIO PARA MANTERNER EL COLOR (22.6.2). DESPUES DE LA NEUTRALIZACION Y EL PERIODO DE CALENTAMIENTO, TENDREMOS DE 40-50 ML DE SOLUCION. FILTRAR LA SOLUCION EN CALIENTE, RECOGIENDOLA SOBRE UN ERLENMEYER DE 250 ML, LAVANDO EL FILTRO CON AGUA CALIENTE. SE ACIDIFICA CON UNAS CUANTAS GOTAS DE CLH Y CALENTAR BREVEMENTE PARA EXPULSAR EL CO2. NEUTRALIZAR LA SOLUCION EN CALIENTE CON NAOH 0,5 N Y ACIDIFICAR DE NUEVO CON CLH 0,5 N, AÑADIENDO 0,3-0,5 ML DE EXCESO. DILUIR 150 ML, APROXIMADAMENTE, Y CALENTAR DE NUEVO A EBULLICION DURANTE UNOS MINUTOS PARA EXPULSAR EL CO2 QUE PUEDA QUEDAR. ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE CON AGUA FRIA. NEUTRALIZAR LA MEZCLA CON NAOH 0,5 N Y COLOCAR DENTRO DEL VASO LOS ELECTRODOS Y AGITADOR MAGNETICO.

COMENZAR A AGITAR Y AJUSTAR A PH = 6,30 MEDIANTE LA ADICION DE NAOH 0,25 N O CLH 0,02 N Y SEGUN SE REQUIERA (22.6.3). UNA VEZ QUE EL PH SE MANTENGA A 6,30, SE PROCEDE A EFECTUAR LA LECTURA EN LA BURETA DE NAOH 0,25 N; AÑADIR 20 G DE MANITOL O DE CRISTALES DE D-SORBITOL Y EFEDCTUAR LA VALORACION CON SOSA 0,25 N HASTA OBTENER NUEVAMENTE EL PH 6,30 (DESCONECTAR EL PH-METRO DEJANDO LA LECTURA A 6,30 CUANDO SE AÑADE EL MANITOL, CONECTANDOLO DE NUEVO CUANDO EL INDICADOR SE ACERCA A SU PUNTO FINAL, CONTINUANDO AÑADIENDOLE CUIDADOSAMENTE SOLUCION PATRON DE NAOH HASTA QUE LA AGUJA DEL GALVANOMETRO VUELVA A CERO). DE ESTA MANERA, CON PRACTICA, SE TRABAJA SIN SOBREPASAR EL PUNTO FINAL DE LA TITULACION. CUANDO SE ALCANZA EL PUNTO FINAL, SE EFECTUA DE NUEVO LA LECTURA DE LA CANTIDAD DE NAOH GASTADO. EFECTUAR UN BLANCO CON TODOS LOS REACTIVOS A EXCEPCION DE LA MUESTRA A ANALIZAR.

22.5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN APLICANDO LA SIGUIENTE FORMULA:

%B=(ML DE NAOH GASTADOS EN LA DETERMINACION - ML BLANCO) . (MG B/ML DE SOLUCION DE NAOH)/10G MUESTRA.

22.6. OBSERVACIONES.

22.6.1. PARA MUESTRAS DE HASTA 0,45 POR 100 DE CONTENIDO EN B, PESAR 1G. PARA CONTENIDOS MAS ALTOS, PESAR MENOS, PERO GUARDANDO APROXIMADAMENTE, ESTA PROPORCION.

22.6.2. SI EL COLOR DE LA SOLUCION PLIDECE DEBIDO A LA PRESENCIA DE NITRATOS, AÑADIR MAS ROJO DE METILO. POR EL CONTRARIO, SI DICHO COLOR SE OCURECE DEBIDO A LA MATERIA ORGANICA, SE ACONSEJA SEGUIR LA NEUTRALIZACION POR MEDIO DE LA TECNICA DEL INDICADOR EXTERNO.

22.6.3. EL PH SE DEBE MANTENER; DE NO OCURRIR ASI, SERIA DEBIDO A UNA EXPULSION INCOMPLETA DEL CO2.

22.7. REFERENCIAS.

1. A.O.A.C.: "OFFICIAL METOHODS OF ANALYSIS". ED. 1970, PAGINA 24/2.103.

23. BORO SOLUBLE EN AGUA

23.1. PRINCIPIO.

CONSISTE EN PASAR EL BORO A BO3H3, EL CUAL PUEDE SER VALORADO CON UNA ALCALI FUERTE, PREVIA EXALTACION DE SU ACIDEZ POR FORMACIO DE UN ION COMPLEJO CON UNA SUSTANCIA POLIHIDROXILADA (MANITOL O SORBITOL).

23.2 MATERIAL Y APARATOS.

23.2.1. MATRACES DE 250 ML.

23.2.2. PAPEL DE FILTRO WHATMAN NUMERO 40, O SIMILAR.

23.2.3. MATRACES DE 500 ML.

23.2.4. TITULADOR AUTOMATICO.

23.3. REACTIVOS.

23.3.1. BA (OH)2.

23.3.2. SOLUCION DE CL2BA AL 10 POR 100.

23.3.3. COADYUVANTE DE FILTRACION INERTE.

23.3.4. ACIDO CLORIHIDRICO (1 + 5).

23.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR 2,5 G DE MUESTRA Y DEPOSITARLA EN UN ERLENMEYER DE 250 ML. AÑADIR 125 ML DE H2O, CALENTANDO A EBULLICION DURANTE DIEZ MINUTOS, FILTRANDO A CONTINUACION A TRAVES DE PAPEL WHATMAN NUMERO 40, O PAPEL SIMILAR, RECOGIENDOSE EL FILTRADO SOBRE UN ERLENMEYER DE 400 ML. LAVAR BIEN EL FILTRO CON SEIS PORCIONES H2O CALIENTE Y DILUIR HASTA 200 ML CON H2O. CALENTAR EL FILTRADO HASTA EBULLICIO. AÑADIR SEGUIDAMENTE 15 ML DE SOLUCION DE CL2BA AL 10 POR 100 CON OBJETO DE PRECIPITAR LOS FOSFATOS Y SULFATOS. AÑADIR A CONTINUACION BA(OH)2 EN POLVO CON CUIDADO Y AGITANDO CONSTANTEMENTE HASTA CONSEGUIR UN PH ALCALINO (USANDO COMO INDICADOR FENOLFTALEINA) Y AÑADIENDO EXCESO DE BA (OH)2. CALENTAR A EBULCION DURANTE SESENTA MINUTOS O MAS PARA EXPULSAR EL NH3 (MUESTRAS QUE TENGAN FUERTE COLOR DEBIDO A LA MATERIA ORGANICA SERAN MANTENIDAS EN EBULLICION DURANTE UN TIEMPO MAS PROLONGADO). SI ES NECESARIO, AÑADIR AGUA CON OBJETO DE MANTENER EL VOLUMEN DE 150 ML.

AÑADIR UNA O DOS CUCHARADAS DE UN COADYUVANTE DE FILTRACION IERTE Y FILTRAR MEDIANTE SUCCION DA TRAVES DE PASTA DE PAPEL PRENSADO, RECOGIENDOLO SOBRE UN ERLENMEYER DE 500 ML. LAVAR EL PRECIPITADO CON SEIS PORCIONES H2O HIRVIENDO. AÑADIR CIH (1 + 5) HASTA DECOLORAR LA FENOLFTALEINA) QUE CONTENIA EL FILTRADO. AÑADIR ROJO DE METILOY, MEDIANTE SUCESIVAS ADICIONES DE CIH, LLEVARLO A COLOR ROSA. AÑADIR PLATO POROSO Y EL AGITADOR, CUBRIR CON VIDRIO DE RELOJ Y CALENTAR DURANTE CINCO MINUTOS A EBULLCION PARA EXPULSAR EL CO2. ENDRIAR CON AGUA TENIENDO LA PRECAUCION DE MANTENEROLO CUBIERTO CON EL VIDRIO DEL RELOJ. LAVAR AGITADOR, VIDRIO DE RELOJ Y ERLENMEYER COMENZANDO LA TITULACION AÑADIENDO SOLUCION PATRON DE NAOH 0,05 N HASTA COLOR AMARILLO DEL ROJO DE MTILO (23.3.2). AÑADIR 20G DE D-MANITOL Y 1 ML O MAS DE FENOLFTALEINA, AGITAR Y LAVAR LAS PAEREDES DEL ERLENMEYER. EFECTUAR LA TITULACION HASTA VIRAJE ROSA DEL INDICADOR. EFECTUAR UN BLANCO REPITIENDO TODAS LAS OPERACIONES EFECTUADAS CON LA MUESTRA.

23.5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN B APLICANDO LA SIGUIENTE FORMULA:

1 ML DE NAOH 0,05 N= 0,000540 G DE B=

= 0,00477 G NA2B4O7. 10 H2O

23.6. REFERENCIAS.

1. A. O. A. C.: "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". ED. 1970, PAGINA 25/2.016.

24. DETERMINACION DEL MAGNESIO

(POR ABSORCION ATOMICA)

24.1. PRINCIPIO.

CONSITE EN SOLUBILIZAR EL MG DE LA MUESTRA CON DIFERENTES ACIDOS, SEGUN EL TIPO DE FERTILIZANTE, Y SE MIDE SU ABSORCION A 285,2 NM, REFIRENDOLA A LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON.

24.2. MATERIAL Y APARATOS.

24.2.1. MATRACES AFORADOS DE 50, 100 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

24.2.2. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

LONGITUD DE ONDA: 285,2 NM.

GASES: AIRE-C2H2.

RANGO: 0,2-2 UG/ML.

24.3. REACTIVOS.

24.3.1. SOLUCION PATRON DE MG 1.000 UG/ML.- PESAR 1.000 MG DE METAL PURO MG, AGREGAR 50 ML DE AGUA Y AÑADIR LENTAMENTE 10 ML DE CLH. DILUIR A UN LITRO.

24.3.2. SOLUCION DE LANTANO AL 5 POR 100.- 50 G DE LA POR LITRO DE CLH, APROXIMADAMENTE, DEL 5 POR 100. DISOLVER 58,65 G DE LA2O3 EN 250 ML DE CLH (1:1) DILUYENDO A UN LITRO CON AGUA DESTILADA.

24.3.3. CLH.

24.3.4. CLH 2 N.

24.3.5. CLH 0,5 N.

24.3.6. ALH (1 : 1).

24.3.7. CLO4H AL 70 POR 100 D=1,67. 24.3.8. ACIDO FLUORHIDRICO.

24.3.9. METANOL.

24.4. PROCEDIMIETO.

24.4.1. MATERIALES INORGANICOS Y MEZCLA DE FERTILIZANTES.

DISLOVER 1 G DE MUESTRA MUY BIEN HOMOGNEIZADA E INTRODUCIR EN UN ERLENMEYER DE 150 ML; AÑADIR 10 ML DE CLH CONCENTRADO. EVAPORAR LA SOLUCION A CASI SEQUEDAD POR EBULLCICION. REDISOLVER EL RESIDUO EN 20 ML DE CLH 2 N, HIRVIENDOLO PARA SU DISOLUCION SI ES NECESARIO. FILTRAR A TRAVES DE PAPEL RAPIDO RECOGIENDOLO EN UN MATRAZ DE 100 ML, LAVANDO EL PAPEL DE FILTRO Y EL ERLENMEYER CON AGUA. MEDIR LA ABSORBANCIA DE ESTA SOLUCIO DIRECTAMENTE O DILUIR CON CLH 0,5 N PARA OBTENER SOLUCIONES QUE ENTREN DENTRO DEL RANGO DEL APARATO.

24.4.2. FERTILIZANTES QUE CONTENGAN MATERIA ORGANICA.- PESAR 1 G DE MUETRA Y PONERLA EN UNA CAPSULA DE PORCELANA; CALENTAR EN LA MUFLA A 500 GRADOS C DURANTE UNA HORA. AÑADIR SEGUIDAMENTE 10 ML DE CLH Y CONTINUAR COMO EN 24.4.1.

24.4.3. FERTILIZANTES QUE CONTENTAN ELEMENTOS FRITADOS.

DISOLVER 1 G, O MENOS, DE MUESTRA BIEN PULVERIZADA EN 5 ML DE CLO4H Y 5 ML DE FH. EVAPORAR A EBULLICION HASTA DESAPARICION DE LOS HUMOS DENSOS DEL CLO4H. DILUIR CUIDADOSAMENTE CON H2O, FILTRAR Y PROCEDER COMO EN 24.4.1. ALTERNATIVAMENTE SE DISUELVE LA MUESTRA EN 10 ML DE CLH, 5 ML DE FH Y 10 ML DE METANOL. EVAPORAR A SEQUEDAD. AÑADIR 5 ML DE CLH Y VOLVER A EVAPORAR. REPETIR LA ADICION DE CLH Y LA SUBSIGUIENTE EVAPORACION. DISOLVER EL RESIDUO COMO EN 24.4.1.

24.4.4. DETERMINACION.- (EL P PUEDE INTERFERIR AL MG CON LLAMA DE AIRE C2H2. SE ELIMINA LA INTERFERENCIA POR ADICION DE LA SOLUCION DE LANTANO A LAS SOLUCIONES PREPARADAS A PARTIR DE LA MUESTRA Y A LAS SOLUCIONES PATRONES, DE MANERA QUE LAS DILUCIONES FINALES CONTENGAN, AL MENOS, 1 POR 100 DE LA).

AJUSTAR LAS CONDICIONES OPTIMAS DEL APARATO. SE PUEDE UTILIZAR PARA EVITAR DILUCIONES UNA LINEA SECUNDARIA MENOS SENSIBLE. LEER, POR LO MENOS, CUATRO PUNTOS DE LA CURVA DE CALIBRADO DESUES DE MEDIR CADA GRUPO DE 6-12 MUESTRAS.

RESTABLECER EL CERO CON AGUA CADA VEZ QUE SEA NECESARIO. SE DEBE EFECTUAR UNA CURVA DE CALIBRADO ANTES Y DESPUES DE EFECTUAR LA MEDIDA DE CADA GRUPO DE MUESTRAS. DIBUJANDOSE LA CURVA DE CALIBRADO CON ABSORCIONES CONTRA CONCENTRACIONES EXPRESADAS EN UG/ML.

24.5. CALCULOS.

PORCENTAJE DE ELEMENTO = (UG/ML) X (F/PESO DE LA MUESTRA. 104 SIENDO F= ML DE LA DILUCION ORIGINAL.

X ML DE LA DILUCION FINAL/ML DE LA ALICUOTA TOMADA.

ESTA FORMULA SE UTILIZARA CUANDO EL VOLUMEN ORIGINAL DE 100 ML SE DILUYA.

24.6. REFERENCIAS.

1. A. O. A. C.: "OFFICIAL METOHODS OF ANALYSIS". ED. 1970, PAGINA 24/2.O97.

25. AZUFRE LIBRE

25.1. PRINCIPIO.

EXTRACCION DEL AZUFRE CON SULFURO DE CARBONO, OXIDACION DEL AZUFRE O SULFATO Y POSTERIOR PRECIPITACION DEL SULFATO MEDIANTE CLORURO BARICO.

25.2. MATERIAL Y APARATOS.

25.2.1. VASO DE 250 ML.

25.2.2. EXTRACTOR TIPO SOXHLET.

25.2.3. HORNO ELECTRICO REGULABLE.

25.2.4. BAÑO DE AGUA.

25.2.5. PAPEL WHATMAN NUEMRO 42 O SIMILAR O FILTRO GOOCH.

25.3. REACTIVOS.

25.3.1. SULFURO DE CARBONO.

25.3.2. SOLUCION SATURADA DE BROMO EN TETRACLORURO DE CARBONO.

25.3.3. ACIDO NITRICO CONCENTRADO.

25.3.4. ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO.

25.3.5. ACIDO CLORHIDRICO AL 2 POR 100.

25.3.6. SOLUCION DE AZUL DE BROMOFENOL.- DISOLVER 0,1 G DE AZUL DE BROMOFENOL EN 1,5 ML DE HIDROXIDO SODICO 0,1 N Y DILUIR A 25 ML CON AGUA DESTILADA.

25.3 7. HIDROXIDO AMONICO CONCENTRADO.

25.3.8. SOLUCION DE CLORURO DE BARIO AL 10 POR 100.- DISOLVER 100 G DE BA CL22H2O EN 900 ML DE AGUA DESTILADA. FILTRAR A TRAVES DE PAPEL WHATMAN NUMERO 42 O EQUIVALENTE.

25.4. PROCEDIMIENTO.

EXTRAER 1 G DE MUESTRA CON SULFURO DE CARBONO EN EL EXPTRACTOR SOXHLET Y DEJAR DRENAR EL CARTUCHO AL MENOS DOCE VECES. TRANSFERIR EL EXTRACTO A UN VASO DE 250 ML Y EVAPORAR EL SULFURO DE CARBONO EN CORRIENTE DE AIRE A TEMPERATURA AMBIENTE. CALENTAR EN ESTUFA DURANTE VEINTE MINUTOS A 60-70 GRADOS C Y DEJAR ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE; UNA VEZ FRIO, AÑADIR 10 ML DE LA SOLUCION 25.3.2 Y DEJAR TAPADO DURANTE VEINTE MINUTOS, AGITANDO VARIAS VECES. AÑADIR 15 ML DE ACIDO NITRICO Y DEJAR TAPADO DE NUEVO DURANTE TREINTA MINUTOS, VOLVIENDO A AGITAR SUAVEMENTE. EVAPORAR EN BAÑO DE AGUA HIRVIENDO HASTA REDUCIR EL VOLUMEN APROXIMADAMENTE A 5 ML, AÑADIR 20 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y EVAPORAR IGUALMENTE HASTA REDUCIR EL VOLUMEN A 5 ML. AÑADIR 50 ML DE AGUA, FILTRAR Y LAVAR EL FILTRO CON ACIDO CLORHIDRICO AL 2 POR 100. AÑADIR AL FILTRADO DOS GOTAS DE AZUL DE BROMOFENOL Y DESPUES HIDORXIDO AMONICO HASTA EL PRIMER CAMBIO DE COLOR. AÑADIR LENTAMENTE ACIDO CLORHIDRICO HASTA REACCION NETAMENTE ACIDA MAS CINCO GOTAS EN EXCESO; DILUIR A 150 ML CON AGUA, CALENTAR A EBULLCION Y AÑADIR LENTAMENTE GOTA A GOTA LA SOLUCION 25.3.8 APROXIMADAMENTE HASTA EL 50 POR 100 DE EXCESO. TAPAR EL VASO Y PONERLO AL BAÑO DE AGUA HIRVIENDO DURANTE UNA HORA COMO MINIMO, ENFRIAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE Y FILTRAR A TRAVES DE PAPEL DE FILTRO WHATMAN NUMERO 42 O EQUIVALENTE O DE UN FILTRO GOOH PREVIAMENTE DESECADO POR CALCINACION A 800 GRADOS C, AL MENOS, DURANTE VEINTE MINUTOS. LAVAR DIEZ VECES EL FILTRO CON AGUA CALIENTE, DESECAR Y CALCINAR A 800 GRADOS C HASTA PESO CONSTANTE.

LTRO CON AGUA CALIENTE, DESECAR Y CALCINAR A 800 GRADOS C HASTA PESO 25.5. CALCULO.

(FORMULA OMITIDA)

25.6. REFERENCIAS.

1. ASOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS", 1975, 2.149, PAG. 29.

26 AZUFRE TOTAL

26.1. PRINCIPIO. OXIDACION DEL AZUFRE O SULFATO Y POSTERIOR PRECIPITACION DEL SULFATO CON CLORURO BARICO.

26.2. MATERIAL Y APARATOS.

26.2.1. VASO DE 250 ML.

26.2.2. PAPEL WHATMAN NUMERO 42 O SIMILAR O FILTRO GOOH.

26.2.3. BAÑO DE AGUA.

26.2.4. HORNO ELECTRICO REGULABLE.

26.3. REACTIVOS.

26.3.1. SOLUCION DE CLORURO DE BARIO AL 10 POR 100.- DISOLVER 100 G DE BA CL2-2H2O EN 900 ML DE AGUA DESTILADA. FILTRAR A TRAVES DE PAPEL WHATMAN NUMERO 42 O EQUIVALENTE.

26.3.2. SOLUCION DE BROMO AL 10 POR 100.-DISOLVER 10 G DE BROMO EN 90 G DE TETRACLORURO DE CARBONO Y AGITAR HASTA HOMOGENEIDAD. GUARDAR EN FRASCO CON TAPON DE VIDRIO.

26.3.3. ACIDO NITRICO CONCENTRADO.

26.3.4. ACIDO CLOHIDRICO CONCENTRADO.

26.3.5. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA AL 1 POR 100.

26.4. PROCEDIMIENTO.

26.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.-PESAR UNA CANTIDAD DE MUESTRA QUE CONTENGA ENTRE 50-150 MG DE AZUFRE Y COLOCARLA DENTRO DE UN VASO DE 250 ML DE CAPACIDAD. A CONTINUACION AÑADIR 20 ML DE LA SOLUCION 26.3.2. MEZCLAR, AGITANDO EL VASO A INTERVALOS DE CINCO MINUTOS, DURANTE MEDIA HORA. AÑADIR 15 ML DE ACIDO NITRICO Y MEZCLAR DE LA MISMA FORMA QUE ANTERIORMENTE. EVAPORAR EN BAÑO DE AGUA HIRVIENDO HASTA REDUCIR EL VOLUMEN A 1-2 ML. AÑADIR 15 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y 10 ML DE H2O Y EVAPORAR HASTA SEQUEDAD EN BAÑO DE AGUA. AÑADIR 10 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y 50 ML DE H2O, CALENTARLO HASTA EBULLICION Y HERVIR DURANTE CINCO MINUTOS, A CONTINUACION FILTRAR A TRAVES DE PAPEL WHATMAN NUMERO 42 O EQUIVALENTE. LAVAR EL PAPEL CON 20 ML DE AGUA CALIENTE, EFECTUANDO ESTA OPERACION DIEZ VECES.

26.4.2. DETERMINACION.-A PARTIR DEL FILTRADO OBTENIDO SEGUN 26.4.1, CALENTAR HASTA EBULLICION Y AÑADIR 5-6 GOTAS DE LA SOLUCION 26.3.1. PASADO UN MINUTO, AÑADIR LENTAMENTE UNA CANTIDAD DE LA SOLUCION 26.3.1, EQUIVALENTE AL CONTENIDO SUPUESTO DE AZUFRE (1 ML = 0,014 G DE S), MAS 5 ML EN EXCESO. LLEVAR A EBULLICION SUAVE DURANTE UNA HORA; PASADO ESTE TIEMPO, RETIRAR Y DEJAR REPOSAR DURENTA QUINCE-VEINTE MINUTOS HASTA LA SEDIMENTACION DEL PRECIPITADO, A CONTINUACION FILTRAR A TRAVES DE UN FILTRO DE GOOCH, PREVIAMENTE DESECADO POR IGNICION Y TARADO, O PAPEL WHATMAN NUMERO 42 O EQUIVALENTE. LAVAR CON AGUA CALIENTE HASTA QUE 10 ML DEL FILTRADO NO PRECIPITE AL AÑADIR 3 ML DE NITRATO DE PLATA AL 1 POR 100. A CONTINUACION DESECAR E INCINERAR A 800 GRADOS C HASTA PESO CONSTANTE.

26.5. CALCULO.

CALCULAR EL CONTENIDO EN AZUFRE EN TANTO POR CIENTO.

(FORMULA OMITIDA)

26.6 REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS 1975, 2.148, PAG. 39.

27. AZUFRE DE SULFATOS

27.1. PRINCIPIO.

SOLUBILIZACION DEL SULFATO EN MEDIO ACIDO, Y PRECIPITACION CON CLORURO BARICO. APLICACION A FERTILIZANTES COMPUESTOS, SULFATO POTASICO Y SULFATO MAGNESICO.

27.2. MATERIAL Y APARATOS.

27.2.1. VASOS DE 250 ML.

27.2.2. PAPEL WHATMAN NUMERO 42, O SIMILAR, O FILTRO GOOCH.

27.2.3. BAÑO DE AGUA.

27.2.4. HORNO ELECTRICO REGULABLE.

27.3. REACTIVOS.

27.3.1. SOLUCION DE CLORURO DE ABRIO AL 10 POR 100.-DISOLVER 100 G DE BA CL2.2H2O EN 900 ML DE AGUA DESTILADA. FILTRAR A TRAVES DE PAPEL ALBET NUMERO 242 O EQUIVALENTE.

27.3.2. ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO.

27.3.3. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA AL 1 POR 100.

27.4. PROCEDIMIENTO.

27.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.-PESAR CON EXACTITUD DE 0,1 MG UNA CANTIDAD DE MUESTRA QUE CONTENGA 0,1 A 0,2 G DE SO4, PASAR A UN VASO DE 250 ML Y AÑADIR 25 ML DE ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO Y 50 ML DE H2O. HERVIR DURANTE DIEZ MINUTOS.

A CONTINUACION, FILTRAR A TRAVES DE PAPEL WHTAMAN NUMERO 42 O EQUIVALENTE. LAVAR CON UNAS DIEZ PORCIONES DE 10 ML DE AGUA CALIENTE.

27.4.2. DETERMINACION.-EL FILTRADO OBTENIDO SE CALIENTE HASTA EBULLICION Y SE AÑADEN CINCO-SEIS GOTAS DE SOLUCION 27.3.1. PASADO UN MINUTO AÑADIR LENTAMENTE UNA CANTIDAD DE SOLUCION.

27.3.1, EQUIVALENTE AL CONTENIDO SUPUESTO DE AZUFRE (1 ML = 0,042 G DE SO4) MAS 5 ML EN EXCESO. LLEVAR A EBULLICION SUAVE DURANTE UNA HORA, PASADO ESTE TIEMPO RETIRAR Y DEJAR REPOSAR DURANTE QUINCE-VEINTE MINUTOS HASTA LA SEDIMENTACION DEL PRECIPITADO, A CONTINUACION FILTRAR A TRAVES DE UN FILTRO GOOCH, PREVIAMENTE DESECADO POR CALCINACION Y TARADO, O PAPEL ALBERT NUMERO 242 O EQUIVALENTE. LAVAR CON AGUA CALIENTE HASTA QUE 10 ML DE FILTRADO NO PRECIPITEN AL AÑADIRLE 3 ML DE LA SOLUCION 27.3.3. A CONTINUACION, DESECAR Y CALCINAR A 800. HASTA PESO CONSTANTE.

27.5. CALCULO.

CALCULAR EL CONTENIDO EN AZUFRE O SULFATO EN TANTO POR CIENTO.

(FORMULA OMITIDA)

27.6 REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS 1975, 2.148, PAG. 29.

28. CLORUROS

(SOLUBLES EN AGUA)

28.1. PRINCIPIO.

SOLUBILIZACION DE LOS CLORUROS EN AGUA Y SUBSIGUIENTE VALORACION CON NITRATO DE PLATA EN PRESENCIA DE CROMATO POTASICO.

28.2. MATERIAL Y APARATOS.

28.2.1. MATERIAL NECESARIO PARA FILTRACION.

28.2.2. MATRAZ AFORADO DE 250 ML DE CAPACIDAD.

28.2.3. VASO DE PRECIPITADOS DE 150 ML DE CAPACIDAD.

28.2.4. MATERIAL NECESARIO PARA VOLUMETRIA.

28.3. REACTIVOS.

28.3.1. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA.-DISOLVER 5 G DE NITRATO DE PLATA RECRISTALIZADO Y ENRASAR CON AGUA A 1.000 ML. TITULAR DICHA SOLUCION CON CLORURO SODICO, DE MANERA QUE 1 ML DE LA SOLUCION DE NITRATO DE PLATA EQUIVALGA A 0,001 G DE CLORO.

28.3.2. INDICADOR DE CROMATO POTASICO AL 5 POR 100 (P/V).-DISOLVER 5 G DE CROMATO POTASICO EN 100 ML DE AGUA.

28.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR 2,5 G DE MUESTRA Y PONERLA SOBRE UN PAPEL DE FILTRO DE 11 CM, LAVAR A CONTINUACION CON SUCESIVAS PORCIONES DE AGUA HIRVIENDO HASTA SU COMPLETO LAVADO; APROXIMADAMENTE SE EMPLEAN UNOS 250 ML DE AGUA.

RECOGER EL FILTRADO SOBRE UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML, ENFRIAR Y ENRASAR CON AGUA.

TOMAR 50 ML DE FILTRADO Y LLEVARLOS A UN VASO DE PRECIPITADOS DE 150 ML DE CAPACIDAD, AÑADIR 1 ML INDICADOR DE CROMATO POTASICO AL 5 POR 100 (P/V), AJUSTAR EL PH ENTRE 6 Y 7 Y VALORAR CON LA SOLUCION DE NITRATO DE PLATA (28.3.1.) HASTA COLOR ROJO CONSTANTE DE CROMATO DE PLATA.

28.5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN CLORO EXPRESADO EN GRAMOS:

(FORMULA OMITIDA)

SIENDO:

V = VOLUMEN EN ML GASTADOS DE LA SOLUCION DE NITRATO DE PLATA.

28.6. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". ED. 1975, 39, PAG. 24.

29. CINC

29.1. PRINCIPIO.

SOLUBILIZAR EL ZN DE LA MUESTRA CON DIFERENTES ACIDOS, SEGUN EL TIPO DE FERTILIZANTE, Y MEDIR SU ABSORCION A 213,8 NM, REFIRIENDOLA A LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON.

29.2. MATERIAL Y APARATOS.

29.2.1. VASO DE PRECIPITADO DE 150 ML DE CAPACIDAD.

29.2.2. MATRACES AFORADOS DE 100 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

29.2.3. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

LONGITUD DE ONDA: 213,8 NM.

GASES: AIRE-ACETILENO.

RANGO: 0,5-5 PPM.

29.2.4. CAPSULA O CRISOL DE PLATINO.

29.2.5. CAPSULA O CRISOL DE PORCELANA.

29.3. REACTIVOS.

29.3.1. SOLUCION PATRON DE CINC DE 1.000 PPM.-DISOLVER EN 10 ML DE ACIDO CLORHIDRICO 6 N, 1.000 G DE CINC METAL Y LLEVA A 1.000 ML CON AGUA DESTILADA.

29.3.2. ACIDO CLORHIDRICO.

29.3.3. ACIDO CLORHIDRICO 6 N.

29.3.4. ACIDO CLORHIDRICO 2 N.

29.3.5. ACIDO CLORHIDRICO 0,5 N.

29.3.6. ACIDO FLUORHIDRICO.

29.3.7. ACIDO PERCLORICO.

29.3.8. METANOL.

29.4. PROCEDIMIENTO.

29.4.1. MATERIALES INORGANICOS Y FERTILIZANTES COMPUESTOS.-DISOLVER 1 G DE MUESTRA BIEN MOLIDA EN 10 ML DE ACIDO CLORHIDRICO UTILIZANDO UN VASO DE PRECIPITADO DE 150 ML. SOMETER A EBULLICION HASTA CASI SEQUEDAD, SIN DEJAR QUE LA EVAPORACION SEA COMPLETA. REDISOLVER EL RESIDUO EN 20 ML DE ACIDO CLORHIDRICO DE 2 N CALENTANDO A EBULLICION SI ES NECESARIO. FILTRAR, A TRAVES DE PAPEL DE FILTRADO RAPIDO, SOBRE UN MATRAZ DE 100 ML, LAVANDO COMPLETAMENTE EL PAPEL Y EL RESIDUO CON AGUA DESTILADA. MEDIR LA ABSORCION DE LA DISOLUCION DIRECTAMENTE, O EN CASO NECESARIO DILUIR CON ACIDO CLORHIDRICO 0,5 N HASTA CONSEGUIR UNA SOLUCION DENTRO DEL RANGO DE LA CURVA DE CALIBRADO.

29.4.2. FERTILIZANTES CONTENIENDO MATERIA ORGANICA.-PESAR 1 G DE MUESTRA EN UNA CAPSULA DE PORCELANA Y CALENTAR EN UNA MUFLA EN CORRIENTE DE AIRE DURANTE UNA HORA A 500 GRADOS C; ROMPER LA PASTA Y DISOLVER EN 10 ML DE ACIDO CLORHIDRICO COMO EN 29.4.1.

29.4.3. FERTILIZANTES FRITADOS QUE CONTENGAN MICROELEMENTOS.-DISOLVER 1 G DE MUESTRA BIEN MOLIDA EN 5 ML DE ACIDO PERCLORICO Y 5 ML DE ACIDO FLUORHIDRICO. CALENTAR A EBULLICION HASTA APARICION DE HUMOS DENSOS DE ACIDO PERCLORICO, DILUIR CUIDADOSAMENTE CON AGUA DESTILADA, FILTRAR Y PROCEDER COMO EN 29.4.1.

ALTERNATIVAMENTE TAMBIEN SE PUEDE DISOLVER LA MUESTRA EN 10 ML DE ACIDO CLORHIDRICO, 5 ML DE ACIDO FLUROHIDRICO Y 10 ML DE METANOL. EVAPORAR A SEQUEDAD. AÑADIR 5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y EVAPORAR. REPETIR LA ADICION DE ACIDO CLORHIDRICO Y LA EVAPORACION. DISOLVER EL RESIDUO COMO EN 29.4.1.

29.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

29.6. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. ED. 1975, PAGINAS 22-23.

30. COBRE

30.1. PRINCIPIO.

SOLUBILIZAR EL CU DE LA MUESTRA CON DIFERENTES ACIDOS, SEGUN EL TIPO DE FERTILIZANTE, Y MEDIR SU ABSORCION A 324,7 NM REFIRIENDOLA A LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON.

30.2. MATERIAL Y APARATOS.

30.2.1. VASO DE PRECIPITADO DE 150 ML DE CAPACIDAD.

30.2.2. MATRACES AFORADOS DE 100 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

30.2.3. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

LONGITUD DE ONDA: 324,7 NM.

GASES: AIRE-ACETILENO.

RANGO: 2-20 PPM.

30.2.4. CAPSULA O CRISOL DE PLATINO.

30.2.5. CAPSULA O CRISOL DE PORCELANA.

30.3. REACTIVOS.

30.3.1. SOLUCION PATRON DE COBRE DE 1.000 PPM.-DISOLVER EN LA MINIMA CANTIDAD POSIBLE DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO 1.000 G DE COBRE METAL Y AÑADIR 5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO. EVAPORAR SIN LLEGAR A TOTAL SEQUEDAD Y DILUIR A 1.000 ML CON ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N.

30.3.2. ACIDO CLORHIDRICO.

30.3.3. ACIDO NITRICO.

30.3.4. ACIDO CLORHIDRICO 2 N.

30.3.5. ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N.

30.3.6. ACIDO CLORHIDRICO 0,5 N.

30.3.7. ACIDO FLUORHIDRICO.

30.3.8. ACIDO PERCLORICO.

30.3.9. METANOL.

30.4. PROCEDIMIENTO.

30.4.1. MATERIALES INORGANICOS Y FERTILIZANTES COMPUESTOS (COMO EN 29.4.1.).

30.4.2. FERTILIZANTES CONTENIENDO MATERIA ORGANICA (COMO EN 29.4.2.).

30.4.3. FERTILIZANTES FRITADOS QUE CONTENGAN MICROELEMENTOS (COMO EN 29.4.3.).

30.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

30.6. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. 49 ED. 1975, PAGINAS 22-23.

31. SODIO

31.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DEL SODIO POR FOTOMETRIA DE LLAMA.

31.2. MATERIAL Y APARATOS.

31.2.1. FOTOMETRO DE LLAMA Y ACCESORIOS.

31.2.2. MATRACES AFORADOS DE 100, 250, 500 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

31.3. REACTIVOS.

31.3.1. SOLUCION DE OXALATO AMONICO.-AÑADIR A 40 G DE OXALATO AMONICO AGUA DESTILADA HASTA 1.000 ML Y DISOLVER.

31.3.2. INDICADOR ROJO DE METILO.-DISOLVER 0,2 G DE ROJO DE METILENO EN 100 ML DE ALCOHOL.

31.3.3. CLORURO SODICO.-DESECAR DURANTE DOS HORAS A 105 GRADOS C.

31.3.4. ACIDO NITRICO AL 1 POR 100 (V/V).

31.4. PROCEDIMIENTO.

31.4.1. PREPARACION DE LA SOLUCION DE LA MUESTRA DE FERTILIZANTES (COMPUESTOS SULFATO MAGNESICO Y SULFATO POTASICO).

PESAR 2,5 G DE MUESTRA (PARA CONTENIDOS MENORES DEL 4 POR 100 EN SODIO) O 1,25 G (PARA CONTENIDOS ENTRE 4-20 POR 100). INTRODUCIRLA EN UN MATRAZ AFORADO DE 150 ML DE CAPACIDAD, AÑADIR 125 ML DE AGUA Y 50 ML DE LA SOLUCION 31.3.1; LLEVAR A CONTINUACION A EBULLICION DURANTE TREINTA MINUTOS, DEJAR ENFRIAR Y ENRASAR CON AGUA, AGITAR Y FILTRAR. TRANSFERIR A CONTINUACION 25 ML (PARA CONTENIDOS MENORES DEL 4 POR 100 EN SODIO) O 10 ML (PARA CONTENIDOS COMPRENDIDOS ENTRE 4 Y 20 POR 100 EN SODIO) DE DICHA SOLUCION A UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML DE CAPACIDAD, ENRASAR CON AGUA Y AGITAR. MEDIR A CONTINUACION REFIRIENDO LA LECTURA A LA CURVA PATRON 31.4.2.1. O 31.4.2.2, REPRESENTADAS EN EMISION Y CONCENTRACIONES.

31.4.2. PREPARACON DE LA CURVA PATRON.

31.4.2.1. SOLUCION PATRON PARA MUESTRAS CON CONTENIDOS IGUAL O SUPERIORES AL 1 POR 100 EN SODIO.-DISOLVER 1,2716 G DE CLORURO SODICO EN AGUA Y ENRASAR A 5OO ML; ESTA SOLUCION CORRESPONDE A 1.000 PPM DE SODIO. TOMAR ALICUOTAS DE LA SOLUCION PATRON DE MANERA QUE CUBRAN UN RANGO COMPRENDIDO ENTRE 0 Y 40 PPM CON INTERVALOS DE 5 PPM.

31.4.2.2. SOLUCION PATRON PARA MUESTRAS CON CONTENIDOS INFERIORES AL 1 POR 100 DE SODIO.-PROCEDER COMO EN 31.4.2.1, PERO CUBRIENDO UN RANGO COMPENDIDO ENTRE 0 Y 10 PPM CON INTERVALOS DE 2 PPM.

31.5. CALCULO.

(FORMULA OMITIDA)

31.6. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". 1975, 50. 2.134, PAG. 29.

32. HIERRO

32.1. PRINCIPIO.

SOLUBILIZAR EL FE DE LA MUESTRA CON DIFERENTES ACIDOS, SEGUN EL TIPO DE FERTILIZANTE, Y MEDIR SU ABSORCION A 248,3 NM, REFIRIENDOLA A LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON.

32.2. MATERIAL Y APARATOS.

32.2.1. VASO DE PRECIPITADO DE 150 ML DE CAPACIDAD.

32.2.2. MATRAZ AFORADO DE 100 ML DE CAPACIDAD.

32.2.3. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

LONGITUD DE ONDA: 248,3 NM.

GASES: AIRE-ACETILENO.

RANGO: 2-20 PPM.

32.2.4. CAPSULA O CRISOL DE PLATINO.

32.2.5. CAPSULA O CRISOL DE PORCELANA.

32.3. REACTIVOS.

32.3.1. SOLUCION PATRON DE FE DE 1.000 PPM.-DISOLVER CALENTANDO A EBULLICION 1.000 G DE FE PURO EN 30 ML DE CLH 6 N, AGREGADO EN SUCESIVAS PROPORCIONES. DILUIR HASTA 1.000 ML CON H2O DESTILADA. DILUIR CON CLH 0,5 N PREPARANDO CUATRO PATRONES, AL MENOS, CENTRO DEL RANGO DE DETECCION.

32.3.2. ACIDO CLORHIDRICO.

32.3.3. ACIDO CLORHIDRICO 6 N.

32.3.4. ACIDO CLORHIDRICO 2 N.

32.3.5. ACIDO CLORHIDRICO 0,5 H.

32.3.6. ACIDO FLUORHIDRICO.

32.3.7. ACIDO PERCLORICO.

32.3.8. METANOL.

32.4. PROCEDIMIENTO.

32.4.1. MATERIALES INORGANICAS Y FERTILIZANTES COMPUESTOS (COMO EN 29.4.1.).

32.4.2. FERTILIZANTES CONTENIENDO MATERIA ORGANICA (COMO EN 29.4.2.).

32.4.3. FERTILIZANTES FRITADOS QUE CONTENGAN MICROELEMENTOS (COMO EN 29.4.3).

32.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

32.6. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". ED. 1975, 42, PAGS. 22-23.

33 MANGANESO

33.1. PRINCIPIO.

SOLUBILIZAR EL MN DE LA MUESTRA CON DIFERENTES ACIDOS, SEGUN EL TIPO DE FERTILIZANTE, Y MEDIR SU ABSORCION A 279,5 NM, REFIRIENDOLA A LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON.

33.2. MATERIAL Y APARATOS.

33.2.1. VASO DE PRECIPITADO DE 150 ML DE CAPACIDAD.

33.2.2. MATRACES AFORADOS DE 100 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

33.2.3. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

LONGITUD DE ONDA: 279.5 NM.

GASES: AIRE-ACETILENO.

RANGO: 2-20 PPM.

33.2.4. CAPSULA O CRISOL DE PLATINO.

33.2.5. CAPSULA O CRISOL DE PORCELANA.

33.3. REACTIVOS.

33.3.1. SOLUCION PATRON DE MANGANESO DE 1.000 PPM.-DISOLVER EN 30 ML DE ACIDO CLORHIDRICO 6 N, 1,582 G DE BIOXIDO DE MANGANESO, LLEVAR A EBULLICION HASTA EVAPORACION DEL ACIDO CLORHIDRICO Y ENRASAR A 1.000 ML CON AGUA DESTILADA.

33.3.2. ACIDO CLORHIDRICO.

33.3.3. ACIDO CLORHIDRICO 6 N.

33.3.4. ACIDO CLORHIDRICO 2 N.

33.3.5. ACIDO CLORHIDRICO 0,5 N.

33.3.6. ACIDO FLUORHIDRICO.

33.3.7. ACIDO PERCLORICO.

33.3.8. METANOL.

33.4. PROCEDIMIENTO.

33.4.1. MATERIALES INORGANICOS Y FERTILIZANTES COMPUESTOS (COMO EN 29.4.1.).

33.4.2. FERTILIZANTES CONTENIENDO MATERIA ORGANICA (COMO EN 29.4.2).

33.4.3. FERTILIZANTES FRITADOS QUE CONTENGAN MICROELEMENTOS (COMO EN 29.4.3).

33.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

33.6. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". ED. 1975. 42, PAGS. 22-23.

34(A) CALCIO SOLUBLE EN ACIDO

(VOLUMETRIA)

34 (A). 1. PRINCIPIO.

SE DETERMINA EL CALCIO SOLUBLE EN ACIDO NITRICO Y CLORHIDRICO, MEDIANTE UNA VALORACION DEL OXALATO CALCICO FORMADO, CON PERMANGANATO POTASICO.

APLICABLE A CONCENTRACIONES SUPERIORES AL 0,1 POR 100.

34(A).2. MATERIAL Y APARATOS.

34(A).2.1. MATRACES AFORADOS DE 250 ML.

34(A).2.2. VASOS DE PRECIPITADO DE 250 ML.

34(A).2.3. PAPEL DE FILTRO CUANTITATIVO O CRISOLES GOOCH.

34(A).2.4. BURETA DE 25 ML.

34(A).3. REACTIVOS.

34(A).3.1. ACIDO NITRICO.

34(A).3.2. ACIDO CLORHIDRICO.

34(A).3.3. SOLUCION INDICADOR AZUL DE BROMOFENOL.-MEZCLAR 0,1 G DE AZUL DE BROMOFENOL CON 1,5 ML DE HIDROXIDO SODICO 0,1 N Y DILUIR A 25 ML.

34(A).3.4. AMONIACO DILUIDO (1 : 4) (V/V).

34(A).3.5. ACIDO CLORHIDRICO DILUIDO (1 : 4) (V/V).

34(A).3.6. SOLUCION SATURADA DE OXALATO AMONICO.

34(A).3.7. ACIDO SULFURICO.

34(A).3.8. SOLUCION VALORADA DE PERMANGANATO POTASICO 0,1 N.

34(A).3.9. AMONIACO DILUIDO (1 : 50) (V/V).

34(A).4. PROCEDIMIENTO.

PESAR 2,50 G DE MUESTRA Y PASARLOS A UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML, AÑADIR 30 ML DE ACIDO NITRICO Y 10 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y HERVIR TREINTA MINUTOS. ENFRIAR, DILUIR, AFORAR Y FILTRAR SI ES NECESARIO. LLEVAR 25 ML DE LA SOLUCION A UN VASO Y DILUIR A 100 ML. AÑADIR DOS GOTAS DE AZUL DE BROMOFENOL. AÑADIR SOLUCION DE AMONIACO DILUIDO (1 : 4) HASTA QUE EL INDICADOR CAMBIE DEL AMARILLO AL VERDE (NO AL AZUL). SI SE HA SOBREPASADO ESTE PUNTO, RETROCEDER CON CLORHIDRICO (1 : 4) (PH 3,5 A 4;0). DILUIR A 150 ML, LLEVAR A EBULLICION Y A30 ML DE SOLUCION SATURADA CALIENTE DE OXALATO AMONICO, LENTAMENTE Y CON AGITACION CONSTANTE. SI EL COLOR CAMBIA DEL VERDE AL AZUL O AL AMARILLO DE NUEVO, AJUSTAR AL VERDE CON ACIDO CLORHIDRICO (1 : 4). SI PASA AL AMARILLO, AJUSTAR CON AMONIACO DILUIDO (1/4) AL VERDE. DIGERIR EN BAÑO DE AGUA DURANTE UNA HORA, O DEJAR TODA LA NOCHE Y ENFRIAR A TEMPERTURA AMBIENTE. FILTRAR EL LIQUIDO SOBRANTE A TRAVES DEL PAPEL CUANTITATIVO O CRISOL GOOCH O FILTRO DE VIDRIO FRITADO Y LAVAR EL PRECIPITADO CON AMONIACO DILUIDO (1 : 50).

COLOCAR EL PEPEL O EL CRISOL CON EL PRECIPITADO, EN EL VASO ORIGINAL Y AÑADIR UNA MEZCLA DE 125 ML DE AGUA Y 5 ML DE ACIDO SULFURICO. CALENTAR A UNOS 70 GRAD. C Y VALORAR CON SOLUCION DE PERMANGANATO POTASICO 0,1 N, HASTA PERSISTENCIA DE COLOR ROSA DEBIL. CORREGIR CON UN BLANCO Y CALCULAR COMO CALCIO.

34(A).5. CALCULO. (FORMULA OMITIDA)

34(A).6. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". 1975, 40, PAG. 24.

34(B). CALCIO SOLUBLE EN ACIDO (ABSORCION ATOMICA)

34(B).1. PRINCIPIO.

SE DETERMINA EL CALCIO SOLUBLE EN ACIDO, POR ABSORCION ATOMICA EN DISOLUCIONES AL 1 POR 100 DE LANTANO Y ACIDO CLORHIDRICO 0,5 N.

34(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

34(B).2.1. VASOS DE PRECIPITADO DE 150 ML.

34(B).2.2. MATRACES AFORADOS DE 25, 250 Y 1.000 ML.

34(B).2.3. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

LONGITUD DE ONDA: 422,7 NM.

GASES: AIRE-ACETILENO.

RANGO: 2-20 PPM.

34(B).2.4. CAPSULA O CRISOL DE PLATINO.

34(B).2.5. CAPSULA O CRISOL DE PORCELANA.

34(B).3. REACTIVOS.

34(B).3.1. SOLUCION PATRON DE 25 PPM DE CALCIO.-DISOLVER 1,249 G DE CARBONATO CALCICO EN LA MINIMA CANTIDAD DE ACIDO CLORHIDRICO 3 N. DILUIR A 1 LITRO. TOMAR 50 ML DE ESTA SOLUCION Y DILUIR A 1 LITRO.

34(B).3.2. SOLUCION DE LANTANO (5O G LA/1).-DISOLVER 58,65 GRAMOS DE OXIDO DE LANTANO EN 250 ML DE ACIDO CORHIDRICO, AÑADIENDO EL ACIDO LENTAMENTE. DILUIR AL 1 LITRO.

34(B).3.3. ACIDO NITRICO.

34(B).3.4. ACIDO CLORHIDRICO.

34(B).3.5. ACIDO CLORHIDRICO 0,5 N.

34(B).3.6. ACIDO CLORHIDRICO 2 N.

34(B).3.7. ACIDO FLUORHIDRICO.

34(B).3.8. ACIDO PERCLORICO.

34(B).3.9. METANOL.

34(B).4. PROCEDIMIENTO.

34(B).4.1. MATERIALES INORGANICOS Y FERTILIZANTES COMPUESTOS. PESAR 2,50 G DE MUESTRA EN UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML, AÑADIR 30 ML DE ACIDO NITRICO Y 10 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y HERVIR DURANTE TREINTA MINUTOS. ENFRIAR, DILUIR A VOLUMEN, MEZCLAR Y FILTRAR SI ES NECESARIO. MEDIR LA ABSORCION DE LA DISOLUCION FILTRADA, PREVIAMENTE DILUIDA CON ACIDO CLORHIDRICO 0,5 N, HASTA CONSEGUIR UNA SOLUCION DENTRO DEL RANGO DE LA CURVA DE CALIBRADO, HABIENDO AÑADIDO LA CANTIDAD DE SOLUCION DE LANTANO PARA HACER LA SOLUCION FINAL AL 1 POR 100 EN LANTANO.

34(B).4.2. FERTILIZANTES CONTENIENDO MATERIA ORGANICA.-COMO EN 29.4.2, PERO AÑADIENDO LA CANTIDAD DE SOLUCION DE LANTANO NECESARIA PARA OBTENER UNA SOLUCION FINAL AL 1 POR 100.

34(B).4.3. FERTILIZANTES FRITADOS QUE CONTENGAN MICROELEMENTOS.-COMO EN 29.4.3, PERO AÑADIENDO LANTANO COMO SE INDICA EN EL PARRAFO ANTERIOR.

34(B).4.4. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.-TOMAR 0,5, 10, 15 Y 20 ML DE LA SOLUCION PATRON DE CALCIO (34(B).3.1.) Y PASARLOS A MATRACES AFORADOS DE 25 ML. AÑADIR A CADA UNO 5 ML DE SOLUCION PATRON DE LANTANO (34(B).3.2.) Y DILUIR A 25 ML. ESTAS SOLUCIONES CONTIENEN, RESPECTIVAMENTE, 0,5, 10, 15 Y 20 PPM DE CA Y 1 POR 100 DE LA.

34(B).5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

34(B).6. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS. "OFFICIAL METHODS OF ANALYSIS". 1975, 40, PAG. 24.

ANEJO V

METODOS DE ANALISIS DE PRODUCTOS FITOSANITARIOS

METODOS FISICOS

1. ESTABILIDAD DE UNA EMULSION

(DILUCION 5 POR 100 V/V)

1.1. PRINCIPIO.

LA ESTABILIDAD DE UNA EMULSION OBTENIDA DISPERSANDO EL CONCENTRADO EMULSIONABLE EN AGUA PATRON SE ESTIMA POR EL VOLUMEN DE ACEITE O DE CREMA QUE SE SEPARA CUANDO SE MANTIENE LA EMULSION EN REPOSO DURANTE VEINTICUATRO HORAS. TAMBIEN SE DETERMINA LA CAPACIDAD DE REEMULSION DEL SISTEMA AL CABO DE VEINTICUATRO HORAS.

EL PROCEDIMIENTO DESCRITO EN ESTE METODO ES DE APLICACION A CUALQUIER CONCENTRADO EMULSIONABLE QUE DE LUGAR AL DILUIRLO CON AGUA A EMULSIONES DEL TIPO ACEITE EN AGUA.

1.2. MATERIAL Y APARATOS.

1.2.1. PROBETA GRADUADA DE 100 ML CON TAPON DE VIDRIO. EL VOLUMEN ENTRE LA MARCA DE LOS 100 ML Y EL FONDO DEL TAPON NO DEBE SER MAYOR DE 40 ML NI MENOR DE 35 ML (1.5.1).

1.2.2. BAÑO DE AGUA DE DIMENSIONES ADECUADAS PARA PERMITIR LA INMERSION HASTA EL CUELLO EN POSICION VERTICAL, DE VARIAS PROBETAS GRADUADAS DE 100 ML Y CON TEMPERATURA MANTENIDA A 30 +- 1 GRADO C (1.5.2).

1.2.3. LAMPARA AJUSTABLE (1.5.6).

1.2.4. PROBETAS GRADUADAS DE 5 ML.

1.3. REACTIVOS.

1.3.1. AGUA PATRON.-342 PPM DE DUREZA, PH = 6 A 7 CA/MG = 80/20 (P/P) (3.6.1).

1.3.1.1. CARBONATO CALCICO, CON UNA RIQUEZA NO MENOR DEL 99 POR 100; CALENTAR DURANTE DOS HORAS A 400 GRADOS C ANTES DE PESAR.

1.3.1.2. OXIDO DE MAGNESIO, CON UNA RIQUEZA NO MENOR DEL 99 POR 100. SECAR DURANTE DOS HORAS A 105 GRADOS C ANTES DE PESAR.

1.3.1.3. SOLUCION AMONIACAL, APROXIMADAMENTE 1 N.

1.3..1.4. ACIDO CLORHIDRICO, SOLUCIONES 0,1 N Y 1 N.

1.3.1.5. HIDROXIDO SODICO 0,1 N.

1.3.1.6. ROJO DE METILO, AL 0,1 POR 100.

1.3.1.7. SOLUCION A.-SOLUCION DE ION CALCICO 0,04 M.

PESAR CON EXACTITUD 4 G DE CARBONATO CALCICO Y TRANSFERIDO A UN ERLENMEYER DE 500 ML CON UN MINIMO DE AGUA DESTILADA. COLOCAR UN PEQUEÑO EMBUDO EN LA BOCA DEL FRASCO. AÑADIR LENTAMENTE ACIDO CLORHIDRICO (82 ML DE SOLUCION 1,0 N) AL FRASCO, A TRAVES DEL EMBUDO Y REMOVER EL CONTENIDO.

CUADO SE DISUELVA TODO EL CARBONATO CALCICO, DILUIR LA SOLUCION APROXIMADAMENTE A 400 ML CON AGUA DESTILADA Y HERVIR PARA ELIMINAR EL EXCESO DE DIOXIDO DE CARBONO. ENFRIAR LA SOLUCION, AÑADIR INDICADOR ROJO DE METILO (DOS GOTAS) Y NEUTRALIZAR HASTA COLOR NARANJA CON LA SOLUCION AMONIACAL AÑADIDA GOTA A GOTA. TRANSFERIR CUANTITATIVAMENTE A UN MATRAZ AFORADO DE 1.000 ML, ENRASAR CON AGUA DESTILADA, MEZCLAR Y ALMACENAR EN UN FRASCO DE POLIETILENO. UN ML DE ESTA SOLUCION CUANDO SE DILUYE HASTA 1.000 ML, DA UN AGUA QUE CONTIENE 4 PPM DE DUREZA, EXPRESADA COMO CARBONATO CALCICO.

1.3.1.8. SOLUCION B.-SOLUCION DE ION MAGNESIO 0,04 M.

PESAR CON EXACTITUD OXIDO DE MAGNESIO (1,613 G) Y TRANSFERIR A UN ERLENMEYER CON UN MINIMO DE AGUA DESTILADA. PONER UN PEQUEÑO EMBUDO EN LA BOCA DEL ERLENMEYER Y AÑADIR LENTAMENTE ACIDO CLORHIDRICO (82 ML DE UNA SOLUCION 1 N).

CALENTAR, LENTAMENTE, HASTA DISOLVER, Y CUANDO TODO EL OXIDO DE MAGNESIO ESTE EN SOLUCION DILUIR APROXIMADAMENTE A 400 ML CON AGUA DESTILADA Y HERVIR PLARA ELIMINAR EL DIOXIDO DE CARBONO.

ENFRIAR, AÑADIR UNA SOLUCION DE ROJO DEMETILO (DOS GOTAS) Y NEUTRALIZAR HASTA COLOR NARANJA CON LA SOLUCION AMONIACAL.

TRANSFERIR CUANTITATIVAMENTE A UN MATRAZ AFORADO DE 1.000 ML, ENRASAR CON AGUA DESTILADA, MEZCLAR Y ALMACENAR EN UN FRASCO DE POLIETILENO. UN ML DE ESTA SOLUCION, CUANDO SE DILUYE HASTA 1.000 ML, DA UN AGUA QUE CONTIENE 4 PPM DE DUREZA, EXPRESADA COMO CARBONATO CALCICO.

1.3.1.9. PREPARACION.-LLEVAR 68,5 ML DE SOLUCION A Y 17,0 ML DE SOLUCION B A UN VASO DE PRECIPITADOS DE 1.000 ML Y DILUIR A 800 ML, APROXIMADAMENTE, CON AGUA DESIONIZADA. USANDO UN PH-METRO, AJUSTAR LA SOLUCION A PH 6 A 7, AÑADIENDO GOTA A AGOTA HIDROXIDO DE SODIO 0,1 N. TRANSFERIR LA SOLUCION CUANTITATIVAMENTE A UN MATRAZ AFORADO DE 1.000 ML Y ENRASAR CON AGUA DESIONIZADA.

EL PH DESPUES DE AJUSTE DEBERA ESTAR PROXIMO A 6,5, LO QUE PERMITE CUALQUIER LIGERA VARIACION DURANTE EL ALMACENAMIENTO.

USAR AGUA DESIONIZADA.

1.4. PROCEDIMIENTO.

1.4.1. EMULSIONABILIDAD.

EN UNA PROBETA GRADUADA DE 100 ML PONER AGUA PATRON A 30 +- 1 GRADO C (1.5.3) HASTA LA MARCA DE LOS 95 ML. VERTER EL CONCENTRADO EMULSIONABLE (1.5.4) POCO A POCO (5 ML DE UNA PROBETA GRADUADA) SOBRE LA SUPERFICIE DEL AGUA, COLOCAR EL TAPON E INVERTIR LA PROBETA UNA VEZ (1.5.5).

DESPUES DE TREINTA SEGUNDOS OBSERVAR SI LA MEZCLA SE HA EMULSIONADO ESPONTANEAMENTE, DANDO 100 ML DE UNA EMULSION QUE APARECE AL EXAMEN VISUAL COMO UNIFORME. ANOTAR SI SE PRODUCE ESPUMA.

1.4.2. ESTABILIDAD DE LA EMULSION EN REPOSO.

INVERTIR LA PROBETA DIEZ VECES (1.5.5) Y DEJAR LA PROBETA Y SU CONTENIDO EN REPOSO EN EL BAÑO DE AGUA A 30 GRADOS +- 1 GRADO C (1.5.3) DURANTE VEINTICUATRO HORAS.

EN EL BAÑO DE AGUA A 30 GRADOS +- 1 GRADO C (1.5.3) DURANTE VEINTICUATRO ANOTAR EL VOLUMEN (1.5.6), SI EXISTE, DE ACEITE LIBRE (1.5.7), ESPUMA Y CREMA FORMADOS TANTO EN LA PARTE SUPERIOR COMO EN EL FONDO DE LA PROBETA, A LOS TREINTA MINUTOS Y A LAS DOS Y VEINTICUATRO HORAS.

1.4.3. REEMULSION TRAS UN REPOSO DE VEINTICUATRO HORAS.

AL CABO DE LAS VEINTICUATRO HORAS, INVERTIR LA PROBETA DIEZ VECES (1.5.5). DEJARA EN REPOSO DURANTE TREINTA SEGUNDOS Y OBSERVAR SI EL ACEITE, ESPUMA, CREMA O MATERIAS SOLIDAS ENCONTRADAS TRAS EL REPOSO DE VEINTICUATRO HORAS SE HAN REEMULSIONADO, DANDO 100 ML DE UNA EMULSION QUE APARECE AL EXAMEN VISULA (1.5.6) COMO UNIFORME.

1.4.4. ESTABILIDAD FINAL DE LA EMULSION.

DEJAR EN REPOSO LA PROBETA DURANTE UN PLAZO ADICIONAL DE TREINTA MINUTOS.

ANOTAR EL VOLUMEN, SI EXISTE, DE ACEITE LIBRE, ESPUMA, CREMA O MATERIAS SOLIDAS PRESENTES AL CABO DEL PERIODO DE TREINTA MINUTOS.

1.5. OBSERVACIONES.

1.5.1. LA PROBETA DEBE ESTAR LIMPIA Y LIBRE DE GRASA.-LIMPIAR LA PROBETA CON UNA SOLUCION ACUOSA QUE CONTENGA 5 POR 100 DE ACIDO FLUORHIDRICO, 30 POR 100 DE ACIDO NITRICO Y 2 POR 100 DE TEEPOL. AGITAR DURANTE VEINTE SEGUNDOS. ENJUAGAR CON AGUA DESTILADA Y ESCURRIR.

PRECAUCION.-LA MEZCLA ANTERIOR ES CORROSIVA Y NO DEBE PONERSE EN CONTACTO CON LA PIEL. NO DEJAR LA MEZCLA EN LA PROBETA DURANTE MAS DE TREINTA SEGUNDOS.

1.5.2. LA PROBETA DEBERA ESTAR SUJETA DE TAL FORMA QUE NO ESTE EN CONTACTO CON EL RECIPIENTE DEL BAÑO. LA ARMADURA DEL MOTOR NO DEBERA SUJETARSE A LAS PAREDES DEL BAÑO.

1.5.3. A MENOS QUE SE ESPECIFIQUE OTRA COSA.

1.5.4. EL CONCENTRADO EMULSIONABLE DEBE ESTAR A LA MISMA TEMPERATURA QUE EL AGUA PATRON QUE SE VA A USAR PARA LA DILUCION (30 +- 1 GRADO C SI NO SE INDICA OTRA COSA).

1.5.5. LA EXPRESION "INVERTIR LA PROBETA", COMO SE USA MAS ARRIBA, INDICA QUE LA PROBETA TAPADA SE INCLINA A MANO 180 GRADOS Y LUEGO SE VUELVE A SU POSICION INICIAL, COMPLETANDO LA OPERACION EN UNOS DOS SEGUNDOS, APROXIMADAMENTE.

1.5.6. PARA ILUMINAR LA PROBETA DEBE USARSE UNA LAMPARA AJUSTABLE PROVISTA DE UNA BOMBILLA PERLADA DE 6O WATIOS. LA POSICION Y EL ANGULO DE LA LUZ DEBEN AJUSTARSE PARA CONSEGUIR LA VISION OPTIMA DE LOS LIMITES DE LAS FASES. CON FRECUENCIA ES MAS FACIL DE VER ESTO CON LUZ REFLEJADA QUE CON LUZ INCIDENTE.

1.5.7. SI INICIALMENTE SE ENCUENTRA DIFICULTAD PARA DISTINGUIR ENTRE ACEITE Y CREMA, PUEDE USARSE UN COLORANTE SOLUBLE EN LA FASE OLEOSA, PERO LOS ENSAYOS FINALES DEBEN HACERSE SIN LA ADICION DE COLORANTES. SE HA COMPROBADO QUE LOS COLORANTES QUE DAN UNA COLORACION AZUL OSCURA EN LOS HIDROCARBUROS AROMATICOS SON LOS MAS ADECUADOS PARA ESTE PROPOSITO. EL COLORANTE (O,1 POR 100) DEBE AÑADIRSE AL CONCENTRADO EMULSIONABLE ANTES DE HACER EL ENSAYO. SI EXISTE ACEITE, EL COLORANTE LO COLOREARA DE AZUL OCURO; SI SE HA PRODUCIDO CREMA, EL COLORANTE DARA UNA CAPA AZUL PALIDO; SI NO SE HA PRODUCIDO CREMA O MUY POCA, NO SE ORIGINARA NINGUNA BANDA DE COLOR DEFINIDO.

1.6. REFERENCIA.

1. CIPAC ED. 1970. MT-36 Y MT-18.

2. ESTABILIDAD DE UNA EMULSION

(DILUCION DE APLICACION)

2.1. PRINCIPIO.

COMO EN 1.1. DE LOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS FISICOS.

EL PROCEDIMIENTO DESCRITO EN ESTE METODO ES DE APLICACION A LOS CONCENTRADOS EMULSIONABLES, QUE AL SER DILUIDOS A SUS DOSIS DE APLICACION DEN LUGAR A EMULSIONES DEL TIPO DE ACEITE EN AGUA.

2.2. MATERIAL Y APARATOS.

2.2.1. VASOS DE PRECIPITADOS DE 250 ML CON UN DIAMETRO INTERIOR DE 6 CM.

2.2.2. BURETAS DE 50 ML, GRADUADAS EN 0,1 ML.

2.2.3. PROBETAS DE 100 ML, GRADUADAS EN 1,0 ML.

2.2.4. BAÑO DE AGUA (COMO 1.2.2).

2.3. REACTIVOS.

2.3.1. AGUA PATRON (COMO 1.3.1).

2.4. PROCEDIMIENTO.

A 70 ML DE AGUA PATRON, COLOCADOS EN UN VASO DE PRECIPITADOS A LA TEMPERATURA ESPECIFICADA (2.5.2), AÑADIR, POR MEDIO DE UNA BURETA, EL PRODUCTO A ENSAYAR A VELOCIDAD DE UNOS 5 ML CADA DOCE SEGUNDOS. DURANTE LA ADICION, AGITAR CON UNA VARILLA DE VIDRIO (A LA VELOCIDAD DE UNAS TRES VUELTAS POR SEGUNDO) Y DIRIGIR CONSTANTEMENTE EL FLUJO DEL CONCENTRADO HACIA EL CENTRO Y NO CONTRA LA PARED DEL VASO. AÑADIR LA CANTIDAD SUFICIENTE DE CONCENTRADO PARA QUE CUANDO A CONTINUACION SE LLEVE EL VOLUMEN TOTAL A 100 ML SE OBTENGA LA DILUCION RECOMENDADA PARA LA APLICACION POR EL SUMINISTRADOR.

LLEVAR EL VOLUMEN A 100 ML, AÑADIENDO AGUA PATRON CON OTRA BURETA. TRANSFERIR INMEDIATAMENTE LA EMULSION DILUIDA A UNA PROBETA GRADUADA LIMPIA Y SECA Y MANTENER A ESTA, ASI COMO EL CONTENIDO, EN REPOSO ABSOLUTO A LA TEMPERATURA ESPECIFICADA +- 1 GRADO C (2.5.2) DURANTE UNA HORA. ANOTAR CUALQUIER CAMBIO QUE SE OBSERVE EN LA EMULSION DILUIDA Y EL VOLUMEN DE CUALQUIER MATERIA QUE SE QUE HUBIERA SEPARADO.

REPETIR LA OPERACION POR COMPLETO UTILIZANDO AGUA DESTILADA EN LUGAR DE AGUA PATRON.

2.5. OBSERVACIONES.

2.5.1. A MENOS QUE SE ESPECIFIQUE OTRA COSA.

2.5.2. SI NO SE ESPECIFICA OTRA COSA LA TEMPERATURA DEBE SER 30 GRADOS +- 1 GRADO C.

NO SE ESPECIFICA OTRA COSA LA TEMPERATURA DEBE SER 30 GRADOS +- 1 2.6. REFERENCIA.

1. CIPAC. ED. 1970. MT-20.

3. SUSPENSABILIDAD DE POLVOS MOJABLES

3.1. PRINCIPIO.

LA SUSPENSABILIDAD SE DEFINE COMO LA CANTIDAD DE MATERIA ACTIVA SUSPENDIDA, DESPUES DE UN TIEMPO DADO, EN UNA COLUMNA DE LIQUIDO DE ALTURA DETERMINADA, EXPRESADA COMO PORCENTAJE DE CANTIDAD DE MATERIA ACTIVA EN LA SUSPENSION ORIGINAL.

PREPARAR UNA SUSPENSION DE CONCENTRACION CONOCIDA EN AGUA PATRON O AGUA DESTILADA, COLOCAR DENTRO DE UNA PROBETA A TEMPERATURA CONSTANTE Y DEJAR REPOSAR DURANTE CIERTO TIEMPO. EXTRAER LAS 9/10 PARTES SUPERIORES Y DETERMINAR EL CONTENIDO DE MATERIA ACTIVA EN LA 1/10 PARTE RESTANTE, CALCULANDO DESPUES EL CONTENIDO DE LAS 9/10 PARTES SUPERIORES.

EL METODO ES APLICABLE PARA SUSPENSIONES QUE CONTENGAN HASTA EL 1 POR 1OO DE MATERIA ACTIVA.

3.2. MATERIAL Y APARATOS.

3.2.1. PROBETA DE 250 ML DE TAPON ESMERILADO (FIG. 3.1).-LA DISTANCIA ENTRE LAS GRADUACIONES 0 Y 250 ML DEBERA ESTAR ENTRE 20 Y 21,5 CM Y ENTRE LA SEÑAL DE 250 ML Y EL TAPON DEBERA EXISTIR UNA DISTANCIA DE 4 A 6 CM.

3.2.2. TUBO DE VIDRIO DE SUCCION DE 40 CM DE LONGITUD Y 5 MM DE DIAMETRO INTERIOR, FINALIZANDO POR UN EXTREMO CON UNA ANCHURA DE 2 A 3 MM; EL OTRO EXTREMO DEL TUBO SE CONECTA A VACIO.

3.2.3. VASOS DE PRECIPITADOS DE 250 ML.

3.2.4. CRONOMETRO.

3.2.5. BAÑO DE AGUA A 30 GRADOS +- 1 GRADO C.

3.3. REACTIVOS.

COMO EN 1.3.1.

3.4. PROCEDIMIENTO.

3.4..1. PREPARACION DE LA SUSPENSION.

PESAR SUFICIENTE CANTIDAD DE MUESTRA PARA HACER 250 ML DE SUSPENSION EN AGUA, A UNA CONCENTRACION RECOMENDADA EN LAS NORMAS DE USO SUGERIDAS PARA EL PRODUCTO. CUANDO SE RECOMIENDAN DISTINTAS CONCENTRACIONES, SE DEBE REALIZAR LA DETERMINACION DE SUSPENSIBILIDAD A LAS CONCENTRACIONES MAXIMA Y MINIMA. LA MUESTRA SE DISPERSA CON O SIN PAPILLA, DE ACUERDO CON LAS NORMAS DE USO QUE ACOMPAÑAN AL PRODUCTO. SI NO SE DICE LO CONTRARIO, SE USARA EL METODO 3.4.1.2.

(GRAFICO OMITIDO)

3.4.1.1. CON PAPILLA.-COLOCAR LA MUESTRA PESADA EN UN VASO, AÑADIR UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE AGUA PATRON (ALREDEDOR DE 5 ML) Y MEZCLAR DURANTE DOS MINUTOS CON UNA VARILLA DE VIDRIO CON TOPE DE GOMA, HASTA PRODUCIR UNA PASTA UNIFORME. AÑADIR AGUA PATRON (50 ML A 30 GRADOS +- 1 GRADO C), GOTA A GOTA, MIENTRAS SE REMUEVE LA MEZCLA Y DEJAR LA SUSPENSION EN REPOSO DURANTE TRECE MINUTOS, EN UN BAÑO DE AGUA A LA MISMA TEMPERATURA.

3.4.1.2. SIN PAPILLA.-AÑADIR, LENTAMENTE, LA MUESTRA PESADA AL VASO QUE CONTIENE EL AGUA PATRON (50 ML A 30 GRADOS +- 1 GRADO C). AGITAR MANUALMENTE CON MOVIMIENTO CIRCULAR A RAZON DE 2 VECES POR SEGUNDO, DURANTE DOS MINUTOS. DEJAR REPOSAR LA SUSPENSION DURANTE TRECE MINUTOS EN UN BAÑO DE AGUA A LA MISMA TEMPERATURA.

3.4.2. DETERMINACION DE LA SEDIMENTACION.-TRANSFERIR LA SUSPENSION PREPARADA EN 3.4.1, CUANTITATIVAMENTE, A UNA PROBETA QUE HAYA SIDO CALENTADA PREVIAMENTE A 30 GRADOS C; ENRASAR A 250 ML CON AGUA PATRON A 30 GRADOS +- 1 GRADO C Y PONER EL TAPON. MANUALMENTE, INVERTIR LA PROBETA 30 VECES EN UN MINUTO.

COLOCAR LA PROBETA EN POSICION VERTICAL Y LIBRE DE TODA VIBRACION EN UN BAÑO DE AGUA, SIN QUE LE DE DIRECTAMENTE LA LUZ DEL SOL. DESPUES DE TREINTA MINUTOS (SALVO QUE SE ESPECIFIQUE LO CONTRARIO) SEPARAR 225 ML (9/10 PARTES) DEL CONTENIDO EN DIEZ A QUINCE SEGUNDOS, USANDO EL TUBO DE VIDRIO DE ABSORCION CONECTADO A VACIO, TENIENDO CUIDADO DE NO AGITAR O REMOVER EL SEDIMENTO DE LA PROBETA. ASEGURARSE DE QUE EL FINAL DEL TUBO DE SUCCION VAYA SIEMPRE UNOS POCOS MILIMETROS POR DEBAJO DE LA SUPERFICIE DEL LIQUIDO (3.6.2).

3.4.3. DETERMINACION DE LA MATERIA ACTIVA.-DETERMINAR EL CONTENIDO DE MATERIA ACTIVA EN LA MUESTRA ORIGINAL Y EN LOS 25 ML RESTANTES DE LA PROBETA, POR EL METODO DADO EN LO METODOS DE ANALISIS PRESCRITOS PARA CADA PESTICIDA.

3.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

3.6. OBSERVACIONES.

3.6.1. A MENOS QUE SE ESPECIFIQUE OTRA COSA, LA PRUEBA DEBERA REALIZARSE EN AGUA PATRON. 3.6.2. EL TUBO DE SUCCION DEBERA SER CONECTADO A TRAVES DE UNA LLAVE DE DOS VIAS A UN FRASCO DE SEGURIDAD. LA LLAVE DEBERA CERRARSE SUAVEMENTE, CUANDO LAS 9/10 PARTES DE LA SUSPENSION HAYAN SIDO SEPARADAS, PARA EVITAR REMOVER EN LA 1/10 PARTE RESTANTE.

3.7. REFERENCIA.

1. CIPAC. ED. 1970. MT-15.

4. DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION

4.1. PRINCIPIO.

LA MUESTRA SE CALIENTA EN TUBO CAPILAR A VELOCIDAD CONTROLADA EN UN BAÑO LIQUIDO CON AGITADOR Y SE OBSERVAN LAS TEMPERATURAS DE FORMACION DEL MENISCO Y DE TOTAL LICUEFACCION DE LA MUESTRA.

PUNTO DE MENISCO ES LA TEMPERATURA A LA CUAL TIENE LUGAR LA LICUEFACCION DE LA SUSTANCIA, LO CUAL VIENE INDICADO POR LA FORMACION DE UN MENISCO DEFINIDO.

PUNTO DE LICUEFACCION ES LA TEMPERATURA A LA CUAL LA SUSTANCIA ESTA COMPLETAMENTE FUNDIDA, LO QUE SE OBSERVA POR LA DESAPARICION DE LA FASE SOLIDA.

INTERVALO DE FUSION ES EL INTERVALO ENTRE LA TEMPERATURA A LA CUAL LA SUSTANCIA COMIENZA A CONTRAERSE O A FORMAR GOTAS EN LA PARED DEL TUBO CAPILAR Y LA TEMPERATURA A LA QUE LA SUSTANCIA ESTA COMPLETAMENTE FUNDIDA, QUE ES EL PUNTO DE LICUEFACCION.

4.2. MATERIAL Y APARATOS.

4.2.1. APARATO DE PUNTO DE FUSION (FIG. 4.1).

(FIGURA OMITIDA)

FIG.4.1.-APARATO DE PUNTO DE FUSION Y AGITADOR.

4.2.1.1. DESCRIPCION DEL APARATO PARA DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION:

A) TUBO DE VIDRIO EN U, CONTENIENDO FLUIDO DE SILICONA.

B) MATERIAL RIGIDO PARA FIJACION.

C) CAJA DE ALUMINIO O LATON.

(FIGURA OMITIDA)

FIG. 4.2.-DIAGRAMA ESQUEMATICO DEL CIRCUITO DE CALENTAMIENTO

A) LAMPARA DE 6 VOLTIOS, 0,3 A.

B) TRANSFORMADOR DE 6,3 VOLTIOS, 0,5 A.

C) INTERRUPTOR MONOFASICO.

D) Y E) INTERRUPTORES BIFASICOS.

F) TRANSFORMADOR DE 48 VOLTIOS, 2 A DE SALIDA.

G) TRANSFORMADOR DE VOLTAJE DE SALIDA VARIABLE. SI ESTA CALIBRADO EN SU VOLTAJE DE SALIDA, EL TRANSFORMADOR F, LOS INTERRUPTORES D Y C Y EL AMPERIMETRO I PUEDEN OMITIRSE.

H) RESISTENCIA VARIABLE DE 8 A 10 OHMS.

I) AMPERIMETRO DE 2 A DE CORRIENTE ALTERNA.

J) RESISTENCIA DE CALENTAMIENTO. K) FUSIBLE DE 2 AMPERIOS.

M) MOTOR DE UNAS 375 R.P.M.

4.2.1.2. CONSTRUCCION DEL APARATO PARA LA DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION:

CONSTRUIR EL TUBO EN U, DE 2,5 CM DE DIAMETRO, DE VIDRIO, BOROSILICATO O SIMILAR. PONER UNA CAPA DE AMIANTO, EN FORMA DE PAPEL O CINTA, ALREDEDOR DE LA PARTE INFERIOR DE UNA DE LAS RAMAS Y ENROLLAR SOBRE ELLA UNA RESISTENCIA DE 7 OHMS POR METRO, EN UNA LONGITUD DE 4 CM SOBRE EL TUBO Y CON 4 ESPIRALES POR CM. LA RESISTENCIA TOTAL DEBE SER DE UNOS 25 OHMS.

D) LAMPARA DE 6 VOLTIOS, 0,3 A. ABERTURA DE 4 X 1,5 CM EN UN LADO DE LA CAJA METALICA PARA TRANSMITIR LUZ A LA MUESTRA.

E) AGITADOR DE VIDRIO DE EJE DE 6 MM DE (SIMBOLO OMITIDO).

F) MOTOR DE UNAS 375 R.P.M.

G) GOMA FLEXIBLE.

H) TERMOMETRO CONTRASTADO DE 0 GRADOS A 300 GRADOS GRADUADO EN DIVISIONES DE 1 GRADO C (4.6.2).

ASTADO DE 0 GRADOS A 300 GRADOS GRADUADO EN DIVISIONES DE I) CAMISA DE VIDRIO DE 3,8 CM DE LONGITUD Y 0,3 MM DE SEPARACION A LAS PAREDES, APOYADA EN LOS TOPES SALIENTES.

J) RESISTENCIA DE CALENTAMIENTO ARROLLADA SOBRE PAPEL DE AMIANTO.

K) ALIMENTACION ELECTRICA DESDE UNA FUENTE DE VOLTAJE VARIABLE.

L) CAMISA DE TUBO DE VIDRIO PARA EL EJE DEL AGITADOR.

M) VENTANA DE OBSRVACION EN LA CAJA METALICA.

N) TUBO CAPILAR CONTENIENDO LA MUESTRA Y AJUSTANDO AL TERMOMETRO POR MEDIO DE UN ANILLO DE GOMA. DEBERA ESTAR SECO, DE PARED DELGADA, DE VIDRIO BOROSILICATO, CERRADO POR UN EXTREMO Y DE DIAMETRO INTERIOR DE 1 MM APROXIMADAMENTE, DE 0,1 A 0,5 MM DE ESPESOR DE PARED Y DE UNA LONGITUD SUFICIENTE PARA QUE EL EXTREMO ABIERTO QUEDE POR ENCIMA DE LA SUPERFICIE, DEL LIQUIDO EN EL TUBO DE CALENTAMIENTO. COMO MINIMO, DEBERA TENER 12 CM DE LONGITUD. LOS CAPILARES SE GUARDARAN CERRADOS POR AMBOS EXTREMOS, CORTANDOLOS TAN SOLO CUANDO SE PRECISEN.

EL APARATO CONSISTE EN UN TUBO DE VIDRIO EN U CON TUBO DE CONEXION SUPERIOR ENTRE LAS DOS RAMAS, DE FORMA QUE UN LIQUIDO, CALENTADO POR UNA RESISTENCIA EXTERNA Y PROPULSADO Y MEZCLADO POR UN AGITADOR SITUADO EN UNA DE LAS RAMAS, CIRCULA ALREDEDOR DEL TUBO CON LA MUESTRA Y DEL TERMOMETRO COLOCADOS EN LA SEGUNDA RAMA. LA MUESTRA COLOCADA EN UN TUBO CAPILAR SE AJUSTA AL TERMOMETRO DE MODO QUE EL BULBO Y EL TUBO ESTEN SITUADOS JUNTOS EN EL BAÑO EN UNA POSICION FIJA PARA SU OBSERVACION. UNA LAMPARA ILUMINA LA MUESTRA DURANTE LA DETERMINACION.

LOS CIRCUITOS ELECTRICOS PARA CONTROLAR LA VELOCIDAD DE CALENTAMIENTO Y LA CIRCULACION EN EL BAÑO LIQUIDO SE DESCRIBEN EN LA FIGURA 4.2 Y DEBEN SER CONVENIENTEMENTE MONTADOS EN UNA CAJA METALICA. FIJANDO EL APARATO DEL PUNTO DE FUSION A LA SUPERFICIE SUPERIOR DE LA CAJA METALICA SE PUEDE TRASLADAR COMO UNA SOLA UNIDAD.

FIJAR FIRMEMENTE EL TUBO EN U DENTRO DE UN RECIPIENTE METALICO DE APROXIMADAMENTE 15 X 10 X 5 CM, USANDO UN MATERIAL RIGIDO AISLANTE TAL COMO FIBRE DE AMIANTO O LANA DE 4 VIDRIO. ADAPTAR A LA CAJA UN SOPORTE LATERAL CONTENIENDO UNA PEQUEÑA LAMPARA ELECTRICA, DE FORMA QUE LA MUESTRA SE ILUMINE A TRAVES DE UNA ABERTURA EN EL RECIPIENTE PRINCIPAL Y LAS OBSERVACIONES PUEDAN REALIZARSE POR MEDIO DE UNA SEGUNDA ABERTURA EN LA PARTE FRONTAL DE LA CAJA.

MONTAR EL MOTOR DE AGITACION SOBRE LA RAMA DEL TUBO U PROVISTA DE LA RESISTENCIA DE CALENTAMIENTO MEDIANTE UN SOPORTE ADECUADO. COLOCAR EL AGITADOR DE VIDRIO EN EL TUBO U Y ACOPLARLO POR MEDIO DE UN TROZO DE GOMA AL EJE DEL MOTOR. EL VASTAGO DE VIDRIO GIRATORIO SE INTRODUCE POR MEDIO DE UNA GUIA DE VIDRIO A TRAVES DEL CORCHO DE LA RAMA DEL TUBO EN U. EL TUBO CAPILAR Y EL BULBO DEL TERMOMETRO SE COLOCAN EN EL CENTRO DE LA PARTE VISIBLE DE LA SEGUNDA RAMA DEL TUBO, POR MEDIO DE UN CORCHO. EN ESTA POSICION, LA MUESTRA QUEDA TOTALMENTE ILUMINADA POR LA LAMPARA Y PUEDE SER OBSERVADA CLARAMENTE A TRAVES DE LA VENTANA DE LA PARTE FRONTAL.

4.3. REACTIVOS.

4.3.1. FLUIDO DE SILICONA (4.6.1).

4.4. PROCEDIMIENTO.

4.4.1. CALIBRADO DEL APARATO.

LLENAR EL TUBO EN U CON FLUIDO DE SILICONA DE UN TIPO ADECUADO (4.6.1) HASTA EL NIVEL INDICADO EN LA FIGURA 4.1. CON EL AGITADOR Y EL TERMOMETRO EN POSICION PONER EN MARCHA EL AGITADOR, HACIENDO PASAR UNA CORRIENTE DE 0,1 A, A TRAVES DE LA RESISTENCIA. LEER LA TEMPERATURA DEL BAÑO A INTERVALOS FIJOS. DESPUES, COMENZANDO POR 0,1 A PARA LA CORRIENTE DE CALENTAMIENTO Y OBSERVANDO EL ASCENSO DE TEMPERATURA HASTA QUE SE ALCANCE LA MAXIMA, REPITIENDO EL INCREMENTO DE 0,1 A, SE PUEDEN OBTENER UNA SERIE DE CURVAS DE CALENTAMIENTO, FIGURA 4.3.

(GRAFICO OMITIDO)

FIG. 4.3. CURVAS DIVERSAS DE CALENTAMIENTO A AMPERAJE CONSTANTE.

EL EXAMEN DE ESTAS CURVAS DE CALENTAMIENTO INDICARA PARA CADA INTERVALO DE TEMPERATURAS LA INTENSIDAD DE CORRIENTE NECESARIA PARA CONSEGUIR UNA VELOCIDAD DE CALENTAMIENTO DE 2 GRADOS C POR MINUTO.

4.4.2. DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION.

PREPARAR LA MUESTRA PULVERIZANDOLA EN UN MORTERO, SECARLA EN CAPA DELGADA A LA TEMPERATURA Y TIEMPO INDICADOS Y VOLVER A MOLER SI ES NECESARIO. POR OTRA PARTE, CUANDO LA TEMPERATURA DE DESECACION NO SE ESPECIFICA, SECARLA A UNA TEMPERATURA BASTANTE INFERIOR A SU PUNTO DE FUSION, BAJO PRESION REDUCIDA O BIEN SOBRE UN DESECANTE APROPIADO. GUARDAR LA MUESTRA EN UN DESECADOR.

PASAR UNA PORCION A UNO DE LOS TUBOS CAPILARES, AGITARLO DE FORMA QUE PASE EL POLVO HACIA LA EXTREMIDAD CERRADA Y COMPRIMIRLO LIGERAMENTE GOLPEANDO EL TUBO SOBRE UNA SUPERFICIE DURA, PARA QUE FORME UNA COLUMNA DE 2 A 4 MM DE ALTURA (4.6.3.).

SUJETAR EL CAPILAR AL TERMOMETRO CON UNA ANILLA DE GOMA Y, SI FUERA NECESARIO, OTRO TUBO SIMILAR CONTENIENDO LA MUESTRA PATRON, DE FORMA QUE LA MUESTRA QUEDE SITUADA EN LA MITAD DEL BULBO. COLOCARLOS EN LA RAMA IZQUIERDA DEL TUBO EN U, DE TAL FORMA QUE EL NIVEL DEL LIQUIDO LLEGUE A LA MARCA DE INMERSION. CONECTAR A LA RED DEL MOTOR DEL AGITADOR, EL CIRCUITO DE CALENTAMIENTO Y LA LAMPARA PARA ILUMINAR LA MUESTRA. HALLAR EL PUNTO DE FUSION APROXIMADO Y SELECCIONAR EL GRADO APROPIADO DE CALENTAMIENTO A PARTIR DE LAS CURVAS CALIBRADAS. AJUSTAR EL CALENTAMIENTO, A RAZON DE 3 A 5 GRADOS C POR MINUTO, HASTA ALCANZAR UNOS 5 GRADOS C POR DEBAJO DEL PUNTO DE FUSION Y ENTONCES DISMINUIR LA CORRIENTE ELECTRICA PARA LOGRAR LA SUBIDA ESPECIFICA DE TEMPERATURA. SI NO ESTA ESPECIFICADA LA VELOCIDAD DE CALENTAMIENTO, ADOPTAR LA DE 2 GRAD. C POR MINUTO.

PARA LA OBSERVACION DEL PUNTO DE FUSION ES MUY CONVENIENTE UTILIZAR UNA LUPA MANUAL O FIJA.

4.5. CALCULO.

LA TEMPERATURA DE LA PARTE EMERGENTE DEL TERMOMETRO SE DETERMINA COLOCANDO EL BULBO DE UN SEGUNDO TERMOMETRO EN CONTACTO CON LA PARTE QUE EMERGE Y EN UN LUGAR DE ESTA SITUADO APROXIMADAMENTE EN EL PUNTO MEDIO DE LA COLUMNA DE MERCURIO QUE SOBRESALE DEL LIQUIDO.

LA CORRECCION VIENE DADA POR LA SIGUIENTE ECUACION:

(FORMULA OMITIDA)

LA TEMPERATURA CORREGIDA SE TOMA COMO EL PUNTO DE FUSION DE LA SUSTANCIA.

A MENOS QUE SE INDIQUE OTRA COSA, EL PUNTO DE MENISCO SE TOMA COMO EL PUNTO DE FUSION DE LA MUESTRA. CUANDO EL PUNTO DE FUSION EN LA ESPECIFICACION O METODO DE ANALISIS VIENE DADO COMO UN INTERVALO, EL PUNTO DE FUSION DE LA SUSTANCIA DEBERA ESTAR COMPRENDIDO EN DICHO INTERVALO.

4.6. OBSERVACIONES.

4.6.1. PARA EL INTERVALO DE TEMPERATURAS DE 20 A 200 GRADOS C ES ADECUADO UN FLUIDO DE SILICONA DE 20 CENTIPOISES. PARA TEMPERATURAS HASTA 300 GRADOS DEBE UTILIZARSE UN FLUIDO DE SILICONA DE 50 CENTIPOISES.

4.6.2. PARA MAYOR PRECISION EN LAS LECTURAS SE USARAN TERMOMETROS CONTRASTADOS GRADUADOS EN DIVISIONES DE 0,2 GRADOS C Y DE ESCALAS ADECUADAS.

4.6.3. CUANDO SE DETERMINAN PUNTOS DE LICUEFACCION, ESTA LONGITUD NO DEBE SOBREPASARSE, YA QUE PUEDEN COMETERSE ERRORES SUPERIORES A 0,8 GRADOS C.

4.7. REFERENCIA.

1. CIPAC ED. 1970. MT-2.

5. DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION DEL ACIDO 2,4 DICLORO FENOXIACETICO PROCEDENTE DE ESTER

5.1. PRINCIPIO.

POR SAPONIFICACION DEL ESTER SE AISLA EL ACIDO Y SE DETERMINA SU PUNTO DE FUSION COMO EN 4.1.

5.2. MATERIAL Y APARATOS.

5.2.1. MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML CON BOCA ESMERILADA.

5.2.2. REFRIGERANTE DE REFLUJO, CUYO EXTREMO INFERIOR ESTE CORTADO RECTO Y ACABE EN LA PARTE ESMERILADA DE LA BOCA DEL MATRAZ PARA QUE EL REFLUJO LAVE LAS PAREDES DEL MISMO.

5.2.3. EMBUDOS DE DECANTACION DE 250 ML.

5.2.4. CAPSULA DE EVAPORACION.

5.2.5. PROBETA GRADUADA DE 10 ML.

5.2.6. ESTUFA REGULABLE A 105 GRADOS C.

5.2.7. BAÑO DE AGUA.

5.2.8. APARATO PARA LA DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION. COMO 4.2.

5.2.9. PLACA DE CALEFACCION CON AGITADOR MAGNETICO.

5.2.10. MATRAZ AFORADO DE 250 ML.

5.3. REACTIVOS.

5.3.1. ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO.

5.3.2. ETER ETILICO.

5.3.3. ETANOL DEL 95 POR 100.

5.3.4. HIDROXIDO DE LITIO 1 N.

5.4. PROCEDIMIENTO.

5.4.1. CALIBRADO DEL APARATO. COMO EN 4.4.1.

5.4.2. DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION.

PESAR LA CANTIDAD DE MUESTRA NECESARIA PARA OBTENER 0,5 G DE ACIDO, 2,4 D EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML. ADICIONAR 5 ML DE ETANOL Y 12,5 ML DE SOLUCION DE HODRIXIDO DE LITIO 1 N. COLOCAR EL REFRIGERANTE Y CALENTAR CON AGITACION DURANTE UNA HORA A REFLUJO INTENSO. ENFRIAR Y TRASVASAR CON AGUA DESTILADA A UN EMBUDO DE DECANTACION DE 250 ML. EL VOLUMEN FINAL SERA DE UNOS 60 ML. EXTRAER CON 15 ML DE ETER ETILICO, DEJANDO UN TIEMPO DE DECANTACION DE TREINTA MINUTOS (HASTA OBTENER UNA SEPARACION TOTAL DE LAS DOS FASES) Y TRANSVASAR LA FASE ACUOSA A UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML. LAVAR LA FASE ETEREA CON (2 X 5 ML) DE AGUA, DEJANDO UN TIEMPO DE DECANTACION DE QUINCE MINUTOS DESPUES DE CADA LAVADO.

TRASVASAR LAS SOLUCIONES DE LAVADO AL MATRAZ AFORADO Y ENRASAR CON AGUA DESTILADA Y AGITAR. DESECHAR LA FASE ETEREA. TOMAR CON PIPETA 100 ML Y LLEVAR A UN EMBUDO DE DECANTACION DE 250 ML. AÑADIR 1,5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y EXTRAER TRES VECES CON 12,5 ML DE ETER ETILICO CADA VEZ, DEJANDO EN CADA DECANTACION UN TIEMPO DE REPOSO DE QUINCE MINUTOS.

PASAR LA TOTALIDAD DE LOS EXTRACTOS ETEREOS A LA CAPSULA DE EVAPORACION Y EVAPORAR EL ETER EN BAÑO DE AGUA. DESECHAR EL RESIDUO EN ESTUFA A 105 GRADOS C, DURANTE CUATRO HORAS. DESPRENDER, CUANTO SEA POSIBLE, EL ACIDO DE LA CAPSULA, MEDIANTE UNA ESPATULA Y MEZCLAR CUIDADOSAMENTE EL ACIDO PULVERIZADO. CONTINUAR COMO EN 4.4.2.

5.5. CALCULO.

COMO EN 4,5.

5.6. REFERENCIA.

1. CIPAC. ED. 1970. 1.3/5/M/1,5.

6. DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION DEL ACIDO 2,4 DICLORO FENOXIACETICO PROCEDENTE DE SAL AMINA

6.1. PRINCIPIO.

POR ACIDIFICACION DE LA SAL, SE AISLA EL ACIDO Y SE DETERMINA SU PUNTO DE FUSION COMO EN 4.1.

6.2. MATERIAL Y APARATOS.

COMO EN 5.2.1, 5.2.3, 5.2.4, 5.2.5, 5.2.6, 5.2.7, 5.2.8.

6.3. REACTIVOS.

COMO EN 5.3.1, 5.3.2.

6.4. PROCEDIMIENTO.

6.4.1. CALIBRADO DEL APARATO COMO EN 4.4.1.

6.4.2. DETERMINACION DEL PUNTO DE FUSION.

PESAR LA CANTIDAD DE MUESTRA NECESARIA PARA OBTENER 0,5 G DEL ACIDO, 2,4 D EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML. DILUIRLO CON AGUA DESTILADA HASTA UN VOLUMEN DE UNOS 80 ML Y TRASPASARLA A UN EMBUDO DE DECANTACION DE 250 ML, EMPLEANDO UN VOLUMEN DE UNOS 20 ML DE AGUA DESTILADA PARA HACER EL TRASPASO CUANTITATIVO. AÑADIR 1,5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO Y EXTRAER TRES VECES CON 12,5 ML DE ETER ETILICO CADA VEZ, DEJANDO EN CADA DECANTACION UN TIEMPO DE REPOSO DE QUINCE MINUTOS.

EL CONJUNTO DE LOS EXTRACTOR ETEREOS SE LAVA TRES VECES CON 10 ML DE AGUA DESTILADA CADA VEZ, DEJANDO EL TIEMPO DE DECANTACION NECESARIO PARA TENER UNA SEPARACION TOTAL DE LAS FASES. AL FINAL DE ESTOS LAVADOS, COMPROBAR QUE EL PH DE LA ULTIMA FASE ACUOSA SEPARADA NO HA VARIADO. TRASVASAR LA FASE ETEREA A UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML. PASAR LAS AGUAS DE LAVADO AL EMBUDO DE DECANTACION Y EFECTUAR UNA EXTRACCION CON 30 ML DE ETER ETILICO, DEJANDO UN TIEMPO DE DECANTACION DE UNA HORA.

DESECHAR LA FASE ACUOSA, LAVAR DOS VECES LA FASE ETEREA CON 25 ML DE AGUA DESTILADA CADA VEZ, DEJANDO UN TIEMPO DE DECANTACION DE TREINTA MINUTOS Y COMPROBANDO QUE SU PH ES, APROXIMADAMENTE 7. REUNIR ESTA FASE ETEREA CON LA ANTERIOR, SITUADA EN EL MATRAZ ERLENMEYER.

PASAR LA TOTALIDAD DE LOS EXTRACTOS ETEREOS A LA CAPSULA DE EVAPORACION Y EVAPORAR EL ETER EN BAÑO DE AGUA. DESECAR EL RESIDUO EN ESTUFA A 105 GRADOS C DURANTE CUATRO HORAS. DESPRENDER, CUANTO SEA POSIBLE, EL ACIDO DE LA CAPSULA MEDIANTE UNA ESPATULA Y MEZCLAR CUIDADOSAMENTE EL ACIDO PULVERIZADO. CONTINUAR COMO EN 4.4.2.

6.5. CALCULO.

COMO EN 4.5.

6.6. REFERENCIA.

1. CIPAC. EDICION 1970. 1.4/13/M/1.5.

7 (A) HUMEDAD

(METODO DE KARL-FISCHER)

7 (A).1. PRINCIPIO.

DISPERSAR LA MUESTRA EN METANOL Y VALORAR CON REACTIVO DE KARL-FISCHER DE EQUIVALENTE EN AGUA CONOCIDO.

7 (A).2. MATERIAL Y APARATOS.

7 (A).2.1. BURETA AUTOMATICA DE 25 ML PROVISTA DE UN SISTEMA DE DESECACION DE AIRE <FIG. 7 (A).I>.

(FIGURA OMITIDA).

7 (A).2.2. VASO DE REACCION DE UNOS 60 ML DE CAPACIDAD, CON DOS ELECTRODOS DE PLATINO, UN TUBO DE ENTRADA DE NITROGENO, UN TAPON QUE PERMITE EL PASO DE LA BURETA, UN TUBO DE VENTILACION PROTEGIDO POR UN DESECANTE Y UNA BOCA DE CARGA CON TAPON ESMERILADO.

LA MUESTRA A VALORAR SE INTRODUCE A TRAVES DE LA BOCA LATERAL. LA AGITACION SE MANTIENE POR UNA CORRIENTE DE NITROGENO SECO A TRAVES DE LA SOLUCION O MAGNETICAMENTE. SI SE USA NITROGENO, EMPLEAR TRES FRASCOS DE SECADO, UNO CON ACIDO SULFURICO Y DOS CON GEL DE SILICE ACTIVADO RECIENTEMENTE (EN ESTE ORDEN).

7 (A).2.3. PILA DE 1,5 A 2 VOLTIOS, CONECTADA A TRAVES DE UNA RESISTENCIA VARIABLE DE 2.000 OHMIOS. LA RESISTENCIA SE AJUSTA DE MANERA QUE UNA CORRIENTE INICIAL DE NO MAS DE 20 MILIVOLTIOS PASE A TRAVES DE LOS ELECTRODOS DE PLATINO, CONECTADOS EN SERIE CON UN MICROAMPERIMETRO, CUANDO HAY UN EXCESO DE 0,2 ML DE REACTIVO DE KARL-FISCHER. DESPUES DE CADA ADICION DEL REACTIVO DE KARL-FISCHER LA AGUJA DEL GALVANOMETRO SE MUEVE, PERO RAPIDAMENTE VUELVE A SU POSICION INICIAL. EN EL PUNTO FINAL SE OBTIENE UNA DESVIACION QUE TARDA MAS TIEMPO EN VOLVER A SU POSICION INICIAL.

7 (A).2.4. GALVANOMETRO CON UNA ESCALA DE DESVIACION NO MAYOR QUE 100 MICROAMPERIOS.

7 (A).3. REACTIVOS.

7 (A).3.1. METANOL QUE NO CONTENGA MAS DEL 0,03 POR 100 DE AGUA (P/P).

7 (A).3.2. IODO RESUBLIMADO.

7 (A).3.3. NITROGENO SECO.

7 (A).3.4. PIRIDINA QUE NO CONTENGA MAS DEL 0,1 POR 100 DE AGUA (P/P).

7 (A).3.5. ANHIDRIDO SULFUROSO LIQUIDO, DE CALIDAD PARA REFRIGERACION.

7 (A).3.6. REACTIVO DE KARL-FISCHER.

7 (A).3.6.1. PREPARACION.-DISOLVER 63 G DE IODO EN 100 ML DE PIRIDINA SECA, ENFRIAR CON HIELO Y HACER PASAR ANHIDRIDO SULFUROSO A TRAVES DE LA MEZCLA, HASTA QUE LA SOLUCION AUMENTE SU PESO EN 32,3 G. EVITAR LA ABSORCION DE LA HUMEDAD ATMOSFERICA. AÑADIR METANOL SUFICIENTE PARA OBTENER 500 ML DE SOLUCION Y DEJAR EN REPOSO DURANTE VEINTICUATRO HORAS.

7 (A).3.6.2. NORMALIZACION.-AÑADIR ALREDEDOR DE 20 ML DE METANOL AL VASO Y REACTIVO HASTA EL PUNTO DE EQUILIBRIO, SIN ANOTAR EL VOLUMEN. INTRODUCIR UNA CANTIDAD EXACTA DE AGUA, PESANDO LA PROPORCION ADECUADA DE TARTRATO SODICO DIHIDRATADO EL POLVO QUE CONTENGA 15,61 A 15,71 POR 100 DE AGUA (300-500 MG) Y VALORAR DE NUEVO CON EL REACTIVO DE KARL-FISCHER. CALCULAR EL EQUIVALENTE EN AGUA DEL REACTIVO EN MG DE AGUA POR ML. TENIENDO EN CUENTA QUE EL REACTIVO DE KARL-FISCHER DEGRADA RAPIDAMENTE DEBERA SER NORMALIZADO INMEDIATAMENTE ANTES DE SU USO, O DIARIAMENTE. CUANDO LA PREPARACION ES RECIENTE 1 ML EQUIVALE A 5 MG DE AGUA APROXIMADAMENTE.

7 (A).4. PROCEDIMIENTO.

AÑADIR ALREDEDOR DE 20 ML DE METANOL AL VASO DE VALORACION Y VALORAR HASTA EL PUNTO DE EQUILIBRIO CON EL REACTIVO DE KARL-FISCHER. TRANSFERIR RAPIDAMENTE UNA CANTIDAD ADECUADA DE MUESTRA EXACTAMENTE PESADA (P) AL VASO DE VALORACION. AGITAR DURANTE UN MINUTO Y VALORAR DE NUEVO CON EL REACTIVO DE KARL-FISCHER (V) DE EQUIVALENTE EN AGUA CONOCIDO.

7 (A).5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA).

7 (A).6. REFERENCIAS.

7 (B) HUMEDAD

(METODO DE DEAN-STARK)

7 (B).1. PRINCIPIO.

EL AGUA DE LA MUESTRA SE DETERMINA POR DESTILACION AZEOTROPICA CON TOLUENO, XILENO O SOLVENTE NAFTA.

ESTE METODO SOLO ES RECOMENDABLE PARA PRODUCTOS CUYOS CONTENIDOS DE HUMEDAD SEAN SUPERIORES AL 2 POR 100.

7 (B).2. MATERIAL Y APARATOS.

7 (B).2.1. APARATO DE DEAN STARK <FIG. 7 (B).I>.

(AO).

7 (B).2.1.1. REFRIGERANTE RECTO.

7 (B).2.1.2. COLECTOR DE 2 ML CON DIVISIONES DE 0,05.

7 (B).2.1.3. MATRAZ DE 500 ML.

7 (B).2.2. PROBETA GRADUADA DE 200 ML.

7 (B).3. REACTIVOS.

7 (B).3.1. TOLUENO.

7 (B).3.2. XILENO.

7 (B).3.3 DISOLVENTE NAFTA. PUNTO DE EBULLICION DE 90 A 160 GRADOS C.

7 (B).4. PROCEDIMIENTO.

PESAR UNA CANTIDAD DE MUESTRA QUE CONTENGA DE 0,5 A 1,5 ML DE AGUA. TRANSFERIRLA AL MATRAZ DE 500 ML QUE CONTENGA 100 ML DE TOLUENO, A MENOS QUE SE INDIQUE OTRO DISOLVENTE, Y AÑADIR 100 ML MAS DE DISOLVENTE Y PORCELANA POROSA. CONECTAR EL APARATO Y PONER ALGODON EN EL EXTREMO SUPERIOR DEL REFRIGERANTE PARA PREVENIR LA ENTRADA DE HUMEDAD ATMOSFERICA. CALENTAR EL MATRAZ HASTA QUE EL REFLUJO SEA DE 2 A 5 GOTAS POR SEGUNDO Y CONTINUAR LA DESTILACION HASTA QUE EL AGUA CONDENSADA NO SEA VISIBLE EN NINGUNA PARTE EXCEPTO EN EL FONDO DEL COLECTOR, Y EL VOLUMEN DE AGUA RECOGIDA PERMANEZCA CONSTANTE DURANTE CINCO MINUTOS. SEPARAR EL AGUA ADHERIDA EN EL REFRIGERANTE, AUMENTANDO LA VELOCIDAD DE REFLUJO EN UNAS CUANTAS GOTAS POR SEGUNDO O BIEN LAVANDO EL REFRIGERANTE CON TOLUENO. DEJAR ENFRIAR EL APARATO A TEMPERATURA AMBIENTE Y SEPARAR LAS GOTAS DE AGUA ADHERIDAS A LA PARTE SUPERIOR DEL COLECTOR CON UN ALAMBRE FINO. LEER EL VOLUMEN DE AGUA.

7 (B).5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA).

LOS RESULTADOS DE LAS REPETICIONES NO DEBEN DIFERIR EN MAS DE 0,025 ML.

7 (B).6. REFERENCIAS.

8. TAMAÑO DE GRANULOS

8.1. PRINCIPIO.

SEPARACION CUANTITATIVA DEL PRODUCTO EN FRACCIONES DE PARTICULAS DE DIFERENTES TAMAÑOS EMPLEANDO UN TAMIZ O SERIE DE TAMICES.

8.2. MATERIAL Y APARATOS.

8.2.1. TAMICES PARA ANALISIS DE UNOS 20 CM DE DIAMETRO Y DE LUZ DE MALLA DE 850, 710, 500, 420, 355, 250 Y 250 (SIMBOLO OMITIDO) (TABLA 8.I).

8.2.2. TAPA Y COLECTOR PARA LOS TAMICES ANTERIORES.

8.2.3. PINCEL PLANO SUAVE (2,5 CM) PARA LA LIMPIEZA DE LAS MALLAS MAS FINAS DE LOS TAMICES.

8.2.4. CEPILLO PLANO DURO PARA LA LIMPIEZA DE LAS MALLAS MAS GRUESAS DE LOS TAMICES.

8.2.5. BALANZA CON SENSIBILIDAD DE 0,1 G Y PRECISION DE +-0,05 G.

8.2.6. AGITADOR DE TAMICES. LA TABLA DEL AGITADOR PARA LOS TAMICES EN LA QUE SE DEPOSITA LA PLATAFORMA ESTA INCLINADA RESPECTO AL EJE UN ANGULO DE 4,5 GRADOS Y SU MOVIMIENTO ES COMO EL DE UN DISCO INCLINADO QUE GIRARA ALREDEDOR DE SU PERIMETRO; LA VELOCIDAD DE LA ROTACION ES, APROXIMADAMENTE, DE 2,5 R.P.M. ESTE MOVIMIENTO GIRATORIO EXTIENDE EL PRODUCTO SOBRE LAS MALLAS DE LOS TAMICES Y AL MISMO TIEMPO LA TABLA VIBRA HACIA ARRIBA Y ABAJO SOBRE UNA DISTANCIA DE 4 MM, CON UNA FRECUENCIA DE 300 VIBRACIONES POR MINUTO. LOS MOVIMIENTOS DE ROTACION Y VIBRACION SON PRODUCIDOS POR EL MISMO MECANISMO; DE AHI QUE SEA SUFICIENTE MEDIR LA VELOCIDAD DE ROTACION DE LA TABLA INCLINADA PARA COMPROBAR LAS CARACTERISTICAS DE CUALQUIER VIBRADOR. EL PERIODO DESIGNADO PARA EL TAMIZADO DE GRANULOS ES DE CUARENTA Y CINCO MINUTOS, A 2,5 R.P.M., SI NO SE CUMPLE AJUSTARLO MEDIANTE LA FORMULA:

PERIODO DEL TAMIZADO EN MINUTOS = 2,5 X 45 / NUM. DE R.P.M. ENCONTRADAS.

8.3. PROCEDIMIENTO.

8.3.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

QUITAR LAS TAPAS DE LAS CAJAS QUE CONTIENEN LAS MUESTRAS Y SECARLAS EN UN DESECADOR DE VACIO A 18 GRADOS C EMPLEANDO PENTOXIDO DE FOSFORO COMO DESECANTE HASTA OBTENER PESO CONSTANTE.

8.3.2. TAMIZADO.-ACOPLAR EL JUEGO DE TAMICES EN EL ORDEN CORRECTO CON EL MAS FINO EN LA PARTE MAS INFERIOR Y SITUADO SOBRE EL PLATO RECEPTOR.

PESAR LA CAJA DE MUESTRA Y SUS CONTENIDOS. VACIARLA CON CUIDADO SOBRE EL TAMIZ MAS GRUESO <850 (SIMBOLO OMITIDO)>, HABIENDO LIMPIADO CON EL CEPILLO CUALQUIER RESIDUO QUE HUBIERA EN EL TAMIZ. PESAR LA CAJA QUE SE HA VACIADO Y ANOTAR EL PESO DE LA MUESTRA TRANSFERIDA AL TAMIZ. PONER LA TAPA AL JUEGO DE TAMICES SITUANDOLES EN LA MAQUINA AGITADORA. AGITAR DURANTE CUARENTA Y CINCO MINUTOS.

(TABLA OMITIDA).

QUITAR EL JUEGO DE TAMICES DE LA MAQUINA TRAS HABER DEJADO REPOSAR POLVO DURANTE UNOS DOS MINUTOS. QUITAR CON CUIDADO LA TAPA E INVESTIR CADA TAMIZ SOBRE UNA HOJA DE PAPEL. DAR UNOS GOLPECITOS SUAVES AL TAMIZ Y CON CUIDADO CEPILLAR SU SUPERFICIE SUPERIOR. VOLCAR EL TAMIZ Y REPETIR ECHANDO FUERA CUALQUIER PARTICULA QUE PERMANECIERA. AÑADIR LOS CEPILLADOS AL MATERIAL OBTENIDO EN CADA TAMIZ. SEGUIR ESTE PROCEDIMIENTO CON LOS TAMICES DE 850 (SIMBOLO OMITIDO) A 250 (SIMBOLO OMITIDO) INCLUSIVE, Y ANOTAR LOS PESOS CON APROXIMACION DE 0,1 G. ANOTAR TAMBIEN LOS PESOS, CON APROXIMACION DE 0,1 G DEL MATERIAL RECOGIDO SOBRE EL TAMIZ DE 150 (SIMBOLO OMITIDO) EN EL PLATO RECEPTOR.

8.3.3. PERDIDA DE POLVO DURANTE EL TAMIZADO.

LOS PESOS RECOGIDOS SOBRE LOS TAMICES, JUNTO CON LOS PESOS DEL MATERIAL RECOGIDO EN EL PLATO RECEPTOR, SE SUMARAN JUNTOS Y SE RESTARAN DEL PESO DE LA MUESTRA ORIGINAL. ELLO DARA LA PERDIDA DURANTE EL TAMIZADO, QUE DEBERA SER MENOR DEL 0,25 POR 100 DEL PESO DE LA MUESTRA. EN CASO CONTRARIO, REPETIR EL ENSAYO.

AÑADIR EL PESO DE LA MUESTRA PERDIDA EN EL TAMIZ (INFERIOR AL 0,25 POR 100 DEL PESO DE LA MUESTRA) A LA FRACCION QUE PASO AL TAMIZ DE 150 (SIMBOLO OMITIDO).

8.4. CALCULOS.

EXPRESAR EL PESO DE CADA FRACCION DE TAMIZ COMO UN PORCENTAJE DEL PESO DE LA MUESTRA, CON APROXIMACION DEL 0,1 POR 100.

8.5. REFERENCIAS.

9. FINURA EN POLVOS

(POR VIA SECA)

9.1. PRINCIPIO.

SEPARACION CUANTITATIVA DE UN POLVO EN FRACCIONES DE PARTICULAS DE DIFERENTES TAMAÑOS EMPLEANDO UN TAMIZ O SERIES DE TAMICES.

9.2. MATERIAL Y APARATOS.

9.2.1. TAMICES PARA ANALISIS, DE UNOS 20 CM DE DIAMETRO, EXCEPTO SI SE ESPECIFICA OTRA COSA, Y TAMAÑO DE MALLA APROPIADO (TABLA 8.I).

9.2.2. COLECTORES Y TAPAS QUE AJUSTEN.

9.2.3. PINCEL PLANO Y SUAVE DE 2,5 CM.

9.2.4. VIDRIOS DE RELOJ TARADOS.

9.3. PROCEDIMIENTO.

9.3.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.-SI SE APRECIARA HUMEDAD EN LA MUESTRA Y SI EL DESECADO NO ESTA EXPRESAMENTE EXCLUIDO EN EL METODO PRESCRITO PARA EL PRODUCTO, DESECAR UNA CANTIDAD ADECUADA A 100 GRADOS C HASTA PESO CONSTANTE (O A UNA TEMPERATURA INFERIOR SI EL METODO LO REQUIERE, O SI FUERA NECESARIO DEBIDO A LAS PROPIEDADES FISICAS DE ALGUNO DE LOS COMPONENTES). ANTES DE PESAR LA MUESTRA PARA EL ANALISIS, DEJAR QUE EL PRODUCTO SE EQUILIBRE CON LA HUMEDAD AMBIENTE, A NO SER QUE EL POLVO SEA ALTAMENTE HIGROSCOPICO, EN CUYO CASO DEBE ENFRIARSE EN UN DESECADOR Y REALIZAR EL SUBSIGUIENTE TAMIZADO EXPONIENDOLO LO MENOS POSIBLE A LA ATMOSFERA.

9.3.2. EXTRACCION PRELIMINAR DEL POLVO FINO.-ESCOGER LOS TAMICES DEL TAMAÑO DE MALLA REQUERIDO POR LA ESPECIFICACION (9.5.1), AJUSTAR EL TAMIZ MAS FINO (9.5.2) SOBRE EL RECIPIENTE COLECTOR Y PONER DENTRO DEL TAMIZ UNA PARTE PESADA DE LA MUESTRA PREPARADA. AJUSTAR LA TAPA Y AGITAR EL CONJUNTO CON UN MOVIMIENTO OSCILATORIO, GOLPEANDO ALTERNATIVAMENTE LOS LADOS IZQUIERDO Y DERECHO DEL FONDO DEL RECIPIENTE SOBRE UNA SUPERFICIE DE MADERA Y HACIENDOLO GIRAR AL MISMO TIEMPO CON LAS MANOS. A INTERVALOS EXAMINAR EL TAMIZ, DEJANDO QUE EL POLVO SE

SEDIMENTE DURANTE UNOS SEGUNDOS ANTES DE QUITAR LA TAPA Y EMPLEAR EL PINCEL PARA QUITAR CUALQUIER MATERIAL QUE OSTRUYA LAS MALLAS (9.5.3) HASTA QUE EL PRODUCTO NO TENGA POLVO FINO. DESECHAR EL PRODUCTO QUE HA PASADO POR EL TAMIZ.

9.3.3. TAMIZADO.-MONTAR EN COLUMNA EL JUEGO DE TAMICES REQUERIDOS, EN ORDEN DECRECIENTE SEGUN LAS MEDIDAS DE LAS MALLAS, SIENDO EL SUPERIOR EL DE PASO MAS GRUESO Y PONER EN EL FONDO EL RECIPIENTE COLECTOR. TRANSFERIR EL RESIDUO PROCEDENTE DEL TAMIZADO PREVIO AL TAMIZ SUPERIOR, AJUSTAR LA TAPA Y EFECTUAR EL TAMIZADO COMO EN 9.3.2. CONTINUAR HASTA QUE LA CANTIDAD DE RESIDUO DEL TAMIZ SUPERIOR SEA CONSTANTE. NO SE DEBE INTENTAR MACHACAR LAS PARTICULAS DURAS, PERO DEBEN DESMENUZARSE CON EL PINCEL LOS AGREGADOS BLANDOS.

QUITAR EL TAMIZ SUPERIOR (EL MAS GRUESO), AJUSTARLE LA TAPA Y UN SEGUNDO RECIPIENTE COLECTOR, REANUDAR EL TAMIZADO CON ESTE TAMIZ A Y INTERVALOS DE DOS MINUTOS EXAMINAR CUALQUIER PRODUCTO QUE HAYA PASADO EL TAMIZ Y TRANSFERIRLO AL SIGUIENTE DE LA SERIE. CONTINUAR CON EL MISMO TAMIZ HASTA QUE NO PASE MAS MATERIAL (EN EL TIEMPO DE DOS MINUTOS) O SOLO PASE UNA CANTIDAD INSIGNIFICANTE (9.5.4).

REPETIR CON CADA UNO DE LOS SUCESIVOS TAMICES LA TECNICA DESCRITA PARA EL TAMIZ MAS GRUESO, DESECHANDO LO QUE PASE DE NUEVO POR EL DE MALLA MAS FINA. TRANSFERIR CADA RESIDUO A VIDRIOS DE RELOJ TARADOS Y PESAR.

9.4. CALCULOS.

PARA ENSAYOS CON UN SOLO TAMIZ, EXPRESAR EL PESO DEL RESIDUO EN TANTO POR CIENTO RESPECTO AL PESO DE LA MUESTRA Y ANOTAR EL RESULTADO COMO PORCENTAJE DE RETENCION EN EL TAMIZ DE ENSAYO ESTABLECIDO.

CUANDO HAYA DE ESPECIFICAR EN MAS DE UN TAMIZ, AÑADIR AL PORCENTAJE DEL RESIDUO DE CADA TAMIZ, LOS PORCENTAJES DE RESIDUOS, IGUALMENTE CALCULADOS, EN TODOS LOS TAMICES SUPERIORES DE LA SERIE. ANOTAR LA SUMA TOTAL COMO EL PORCENTAJE DE RETENCION EN EL TAMIZ DE ENSAYO ESTABLECIDO.

9.5. OBSERVACIONES.

9.5.1. LAS TELAS METALICAS DE LOS TAMICES DE MALLAS FINAS ESTAN HECHAS A BASE DE BRONCE FOSFOROSO. ESTE MATERIAL NO ES ADECUADO PARA TAMIZAR ORGANOMERCURIALES Y A ESTE FIN SE NECESITAN TELAS METALICAS DE ACERO INOXIDABLE.

9.5.2. CUANDO SE REQUIERA SOLO UNA MEDIDA DE MALLA, EMPLEAR EL TAMIZ ESPECIFICO COMO SE INDICA EN ESTE PARRAFO Y COMPLETAR EL TAMIZADO COMO SE DESCRIBE PARA CADA TAMIZ POR SEPARADO (9.3.3).

9.5.3. LOS TIEMPOS RELATIVOS QUE SE EMPLEAN EN DAR PEQUEÑOS GOLPES Y CEPILLAR Y EL TIEMPO TOTAL EMPLEADO VARIARA DE UN TIPO DE POLVO A OTRO Y LA TECNICA MAS EFECTIVA PARA UN DETERMINADO POLVO SE CONSIGUE SOLO A BASE DE ADQUIRIR EXPERIENCIA CON DICHO PRODUCTO.

9.5.4. EN MUCHOS CASOS CONTINUARAN PASANDO INDEFINIDAMENTE CANTIDADES MINIMAS DEL PRODUCTO Y SE NECESITA TENER EXPERIENCIA CON EL PRODUCTO PARA ESTABLECER EL PUNTO FINAL DE TAMIZADO. EN ALGUNOS PROCEDIMIENTOS DE TAMIZADO SE CONSIDERA CONCLUIDO CUANDO NO PASA MAS DE 0,2 POR 100 EN PESO DE LA MUESTRA EN DOS MINUTOS.

9.6. REFERENCIAS.

10. FINURA DE POLVOS

10.1. PRINCIPIO.

SEPARACION CUANTITATIVA DE UN POLVO EN FRACCIONES DE PARTICULAS DE DIFERENTES TAMAÑOS EMPLEANDO LOS TAMICES APROPIADOS Y ARRASTRANDO EL PRODUCTO POR UNA CORRIENTE DE AGUA.

10.2. MATERIAL Y APARATOS.

10.2.1. VASO DE 250 ML.

10.2.2. VARILLA DE VIDRIO CON PROTECTOR DE GOMA.

10.2.3. TAMICES DE UNOS 10 CM DE DIAMETRO Y DE MALLA ADECUADA. TABLA 8.I.

10.3. REACTIVOS.

10.3.1. MOJANTE NO IONICO.

10.4. PROCEDIMIENTO.

10.4.1. MOJADO DEL POLVO.-EN UN VASO DE 250 ML PESAR EXACTAMENTE UNA CANTIDAD ADECUADA (UNOS 20 G) DE LA MUESTRA Y AÑADIRLE SUFICIENTE VOLUMEN DE AGUA, MIENTRAS SE REMUEVE CON UNA VARILLA DE VIDRIO CUBIERTA DE UN PROTECTOR DE GOMA, HASTA FORMAR UNA PASTA CLARA. NO SE DEBE INTENTAR TRITURAR LAS PARTICULAS DURAS, AUNQUE LOS AGLOMERADOS BLANDOS DEBERAN DESMENUZARSE CON UNA DEBIL PRESION. SI EL POLVO ES DIFICIL DE MOJAR, AÑADIRLE MOJANTE EN PEQUEÑAS CANTIDADES HASTA QUE SE OBTENGA UN MOJADO SATISFACTORIO, PERO EMPLEAR LA MINIMA CANTIDAD PARA EVITAR LA FORMACION DE ESPUMA DURANTE EL TAMIZADO.

10.4.2. EXTRACCION PRELIMINAR DE LAS PARTICULAS FINAS.-UTILIZAR TAMICES DE UNOS 10 CM CON LOS NUMEROS DE MALLAS REQUERIDOS POR LA ESPECIFICACION 10.6.1, INTRODUCIENDOLOS EN AGUA Y ASEGURARSE DE QUE LA TELA METALICA ESTE COMPLETAMENTE MOJADA; AÑADIR MOJANTE SI FUERA NECESARIO. SACAR LOS TAMICES Y EMPLEARLOS MIENTRAS ESTEN MOJADOS.

DILUIR LA PASTA CON AGUA HASTA UNOS 150 ML Y VERTERLA SOBRE EL TAMIZ MAS FINO (10.6.2.), ENJUAGANDO EL VASO CON AGUA. LAVAR CON UN CHORRO SUAVE DE AGUA CORRIENTE, DESECHANDO CUALQUIER PRODUCTO QUE PASE POR EL TAMIZ, HASTA QUE EL MATERIAL RETENIDO QUEDE LIBRE DE PARTICULAS FINAS; CUALQUIER AGREGADO BLANDO, QUE SE PUEDA DESMENUZAR POR UNA SUAVE PRESION CON LA PUNTA DE LOS DEDOS O CON LA VARILLA DE VIDRIO CON EL PROTECTOR DE GOMA, SE DISPERSARA DE ESTE MODO.

10.4.3. TAMIZADO.-COLOCAR EL JUEGO DE TAMICES EN ORDEN, SEGUN EL NUMERO DE MALLA, SIENDO EL SUPERIOR EL DE PASO MAS GRUESO. TRANSFERIR AL TAMIZ SUPERIOR EL RESIDUO DEL TAMIZADO PREVIO, LAVAR HASTA QUE LA CANTIDAD DE RESIDUO DEL TAMIZ SUPERIOR SEA CONSTANTE.

QUITAR EL TAMIZ SUPERIOR, COLOCARLO SOBRE UNA CUBETA Y CONTINUAR LLEVANDO EL PRODUCTO DOS MINUTOS MAS. TRANSFERIR EL PRODUCTO QUE PASA POR ESTE TAMIZ AL SIGUIENTE DE LA SERIE Y REPETIR EL LAVADO DEL TAMIZ MAS GRUESO DURANTE DOS MINUTOS. TRANSFERIR DE NUEVO EL PRODUCTO QUE HA PASADO AL SIGUIENTE TAMIZ Y REPETIR HASTA QUE NO PASE NADA EN DOS MINUTOS (EL PUNTO FINAL SE ESTIMA MAS FACILMENTE EN EL TAMIZADO HUMEDO QUE EN EL SECO).

REPETIR CON CADA TAMIZ SUCESIVO LA TECNICA DESCRITA PARA EL TAMIZ MAS GRUESO, EXCEPTO PARA EL PRODUCTO QUE PASE POR EL TAMIZ MAS FINO QUE SE DESECHA. TRANSFERIR CADA RESIDUO A UN VIDRIO DE RELOJ TARADO, CON LA AYUDA DEL CHORRO DE AGUA DESTILADA DE UN FRASCO LAVADOR. DEJAR QUE LAS PARTICULAS SEDIMENTEN Y DECANTAR LA MAYOR PARTE DEL AGUA. EVAPORAR EL RESTO A SEQUEDAD EN BAÑO DE AGUA, COMPLETANDO EL SECADO A 100 GRADOS C (O A OTRA TEMPERATURA SEGUN LO REQUIERAN SUS PROPIEDADES FISICAS) Y PESAR EL RESIDUO.

10.5. CALCULO.

EN EL CASO DE ENSAYOS CON UN SOLO TAMIZ, EXPRESAR EL PESO DEL RESIDUO COMO PORCENTAJE DEL PESO DE LA MUESTRA Y REGISTRAR EL RESULTADO COMO PORCENTAJE DE RETENCION PARA EL TAMIZ DE ENSAYO CORRESPONDIENTE.

CUANDO HAYA QUE ESPECIFICAR EN MAS DE UN TAMIZ, AÑADIR AL PORCENTAJE DEL RESIDUO DE CADA TAMIZ LOS PORCENTAJES DE RESIDUOS CALCULADOS AL IGUAL MODO, DE TODOS LOS TAMICES MAS GRUESOS DE LA SERIE. ANOTAR EL TOTAL COMO PORCENTAJE DE RETENCION AL TAMIZ DETERMINADO.

10.6. OBSERVACIONES.

10.6.1. COMO 9.5.1.

10.6.2. COMO 9.5.2.

10.6.3. COMO 9.5.3.

10.6.4. COMO 9.5.4.

10.7. REFERENCIAS.

1. COLLABORATIVE INTERNATIONAL PESTICIDES ANALYTICAL COUNCIL LIMITED (CIPAC). ED. 1970. MT/59.3.

11. DENSIDAD APARENTE DE PRODUCTOS EN POLVO

(PREVIA COMPACTACION)

11.1. PRINCIPIO.

LA DENSIDAD APARENTE DEL PRODUCTO COMPACTADO ES LA QUE ADQUIERE UNA DETERMINADA CANTIDAD DE POLVO CONTENIDA EN UN RECIPIENTE NORMALIZADO, CUANDO ESTE SE SOMETE A VIBRACION O COMPACTACION EN CONDICIONES ESPECIFICAS.

11.2. MATERIAL Y APARATOS.

11.2.1. SOPORTE DE MADERA FIRMEMENTE SUJETO CON TORNILLOS A UNA SUPERFICIE RIGIDA (FIG.11.1).

11.2.2. PROBETA DE VIDRIO SIN PICO, PROVISTA DE TAPON DE GOMA: LA BASE DE LA PROBETA DEBE SER PLANA Y EL PESO DE LA PROBETA CON EL TAPON DE GOMA DEBE SER DE 250 + - 5 G. LA PROBETA DEBERA ESTAR GRADUADA EN DIVISIONES DE 2 ML, ABARCANDO LA ESCALA DE 25 A 250 ML. LA DISTANCIA ENTRE EL 0 Y 250 DE LA PROBETA DEBERA SER DE 22 A 24 CM. LA ELEVACION TOTAL DE LA PROBETA DEBERA AJUSTARSE A LOS 25 + - 2 MM MEDIANTE LA APLICACION A LA PARTE INFERIOR DEL TOPE DE UN SUPLEMENTO ADECUADO.

11.2.3. ALMOHADILLA PARA LA BASE, DE GOMA, DE DUREZA BRITHIS STANDARD 35 A 50 0 EQUIVALENTE.

11.2.4. CRONOMETRO.

11.2.5. BALANZA DE PLATILLOS DE FACIL ACCESO QUE PERMITA UNA PRECISION DE O,25 G.

11.2.6. PAPEL NEGRO Y SATINADO.

11.2.7. DEDILES DE GOMA SUAVE.

11.2.8. TAMIZ DE 500 MICROS.

11.3. PROCEDIMIENTO.

11.3.1. PREPARACION DE LA MUESTRA (SI SE QUIERE).

PESAR APROXIMADAMENTE 42 GR DE LA MUESTRA EN UN TROZO DE PAPEL.

TOMAR UN PAPEL DE ENSAYO NEGRO Y SATINADO (DE 25 X 25 CENTIMETROS), HACER DOS PLIEGUES PARALELOS FORMANDO UN CANAL DE 13 MM DE ANCHO EN SU PARTE MEDIA Y POR SU CARA SATINADA.

PONER EL PAPEL EN LA BALANZA Y EQUILIBRARLA CON OTRA HOJA SIMILAR. SITUAR EL PAPEL ANTERIORMENTE PREPARADO SOBRE LA MESA.

COLOCAR EL TAMIZ SOBRE EL PAPEL, DE MANERA QUE HAYA 5 CM DE SEPARACION ENTRE LA TELA METALICA Y EL MISMO.

VERTER EL POLVO SOBRE EL TAMIZ Y FROTAR SUAVEMENTE CON LOS DEDOS CUBIERTOS CON DEDILES DE GOMA. SI EL TAMIZ TIENDE A OBSTRUIRSE, LEVANTARLO UNOS 25 MM Y GOLPEAR SUAVEMENTE LOS BORDES CON LOS DEDOS (PERO NO CONTRA LA MESA).

PONER EL PAPEL CON LA MUESTRA TAMIZADA EN UNO DE LOS PLATILLOS, ESTANDO EN EL OTRO LA HOJA DE CONTRAPESO, JUNTO CON 40 G EN PESAS. AJUSTAR EL PESO DE LA MUESTRA HASTA EQUILIBRARLO.

11.3.2. DETERMINACION.-TOMAR 40 G DE LA MUESTRA TAMIZADA SOBRE EL PAPEL Y COLOCARLO EN POSICION INCLINADA. CON LA PALMA DE LA MANO COGER EL PAPEL SITUANDOLO ENTRE EL PULGAR Y LOS OTROS DEDOS E INTRODUCIRLO UNOS 13 MM EN LA PROBETA, QUE SE AJUSTARA CON LA OTRA MANO FORMANDO UN ANGULO DE 45 GRADOS, APROXIMADAMENTE, CON LA HORIZONTAL. DESLIZAR SUAVEMENTE LA MUESTRA EN LA PROBETA. SI SE INTRODUJERAN ADHERENCIAS SE EVITARAN DANDO SUAVES GOLPECITOS CON UN DEDO AL FINAL DE LA PARTE INFERIOR DEL PAPEL INCLINADO. LA PROBETA NO SE GOLPEARA NI SACUDIRA DE NINGUN MODO, Y MIENTRAS SE LA ESTA LLENANDO NO SE HARA NINGUNA PRESION SOBRE EL POLVO DEL PAPEL.

COLOCAR EL TAPON DE GOMA EN LA PROBETA SIN DAR SACUDIDAS; INTRODUCIR CON CUIDADO ESTA DENTRO DEL SOPORTE DE MADERA Y EMPEZAR A CRONOMETRAR.

CON EL PULGAR Y EL INDICE DE UNA MANO SUJETAR CON CUIDADO LA PARTE SUPERIOR DE LA PROBETA Y, DURANTE UN SEGUNDO, LEVANTARLA EN TODA LA EXTENSION DE SU RECORRIDO. EVITAR QUE EN EL TOPE SUPERIOR SE PRODUZCA CUALQUIER IMPACTO INDEBIDO PARA QUE AL POLVO NO SE LE DEN SACUDIDAS. AL PRINCIPIO DEL SIGUIENTE SEGUNDO, SOLTAR LA PROBETA QUITANDO RAPIDAMENTE Y POR COMPLETO EL PULGAR Y EL INDICE. CONTINUAR ESTE PROCESO DE LEVANTAR Y DEJAR CAER LA PROBETA CON UNA FRECUENCIA DE DOS SEGUNDOS, HASTA QUE SE HAYAN CONTADO 50 CAIDAS. CADA VEZ QUE SE LEVANTE LA PROBETA SE LE DEBE GIRAR UNOS 10 GRADOS, CON ELLO SE CONSEGUIRA QUE SE HOMOGENEICE LA SUPERFICIE SUPERIOR, FACILITANDO ASI LA LECTURA DEL VOLUMEN FINAL.

AL FINALIZAR LAS 50 CAIDAS, SACAR INMEDIATAMENTE LA PROBETA DEL SOPORTE DE MADERA, PONERLO A LA ALTURA DE LA VISTA Y ANOTAR EL VOLUMEN AJUSTANDOLO A LOS ML MAS PROXIMOS (V ML). NO DEBE TOMARSE EN CONSIDERACION CUALQUIER POSTERIOR DESCENSO DEL NIVEL.

11.4. CALCULO.

CALCULAR LA DENSIDAD APARENTE DE LA MUESTRA (D G/ML), CON DOS CIFRAS SIGNIFICATIVAS, MEDIANTE LA FORMULA:

(FORMULA Y FIGURA OMITIDAS)

11.5. REFERENCIAS.

1. COLLABORATIVE INTERNATIONAL PESTICIDES ANALYTICAL COUNCIL LIMITED (CIPAC). ED. 1970, MT/33.

12. DENSIDAD APARENTE DE PRODUCTOS EN GRANULOS

(PREVIA COMPACTACION SIN PRESION)

12.1. PRINCIPIO.

LA DENSIDAD APARENTE DEL PRODUCTO COMPACTADO ES LA QUE ADQUIERE UNA DETERMINADA CANTIDAD DE GRANULO CONTENIDO EN UN RECIPIENTE NORMALIZADO CUANDO ESTE SE SOMETE A VIBRACION O COMPACTACION EN CONDICIONES ESPECIFICAS.

12.2. MATERIAL Y APARATOS.

12.2.1. COMO EN 11.2.1.

12.2.2. COMO EN 11.2.2.

12.2.3. COMO EN 11.2.3.

12.2.4. COMO EN 11.2.4.

12.2.5. COMO EN 11.2.5.

12.2.6. COMO EN 11.2.6.

12.2.7. COMO EN 11.2.7.

12.2.8. COMO EN 11.2.8.

12.3. PROCEDIMIENTO.

PESAR EN UN VASO 40 G DE LA MUESTRA E INTRODUCIR ESTA CON CUIDADO EN EL INTERIOR DE LA PROBETA, ACOPLANDO EL TAPON DE GOMA SIN DAR SACUDIDAS. COLOCARLA CON CUIDADO EN EL SOPORTE DE MADERA Y EMPEZAR A CRONOMETRAR.

CON EL PULGAR Y EL INDICE DE UNA MANO, SUJETAR CON CUIDADO LA PARTE SUPERIOR DE LA PROBETA Y, DURANTE UN SEGUNDO, LEVANTARLA EN TODA LA EXTENSION DE SU RECORRIDO. EVITAR QUE EN EL TOPE SUPERIOR SE PRODUZCA CUALQUIER IMPACTO INDEBIDO PARA QUE A LA MUESTRA NO SE LE DEN SACUDIDAS.

AL PRINCIPIO DEL SIGUIENTE SEGUNDO, SOLTAR LA PROBETA QUITANDO RAPIDAMENTE Y POR COMPLETO EL PULGAR Y EL INDICE.

CONTINUAR ESTE PROCESO DE LEVANTAR Y DEJAR CAER LA PROBETA CON UNA FRECUENCIA DE DOS SEGUNDOS HASTA QUE SE HAYAN CONTADO 50 CAIDAS. CADA VEZ QUE SE LEVANTE LA PROBETA SE DEBE GIRAR UNOS 10 GRADOS; CON ELLO SE CONSEGUIRA QUE SE HOMOGENEICE LA SUPERFICIE SUPERIOR FACILITANDO LA LECTURA DEL VOLUMEN FINAL. AL FINALIZAR LAS 50 CAIDAS, SACAR INMEDIATAMENTE LA PROBETA DEL SOPORTE DE MADERA Y PONERLA A LA ALTURA DE LA VISTA Y ANOTAR EL VOLUMEN, AJUSTANDOLO A LOS ML MAS PROXIMOS (V ML). NO DEBEN TOMARSE EN CONSIDERACION CUALQUIER POSTERIOR DESCENSO DEL NIVEL.

12.4. CALCULO.

CALCULAR LA DENSIDAD APARENTE DE LA MUESTRA (D G/ML), CON DOS CIFRAS SIGNIFICATIVAS, MEDIANTE LA FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

12.5. REFERENCIAS.

1. COLLABORATIVE INTERNATIONAL PESTICIDES ANALYTICAL COUNCIL LIMITED (CIPAC) ED. 1970. MT/58.4.

13. ESTABILIDAD A BAJA TEMPERATURA

13.1. PRINCIPIO.

LA MUESTRA SE MANTIENE A 0 GRADOS C DURANTE UNA HORA Y SE ANOTA EL VOLUMEN DE CUALQUIER SUSTANCIA SOLIDA O ACEITOSA QUE SE HAYA SEPARADO. CONTINUAR EL ALMACENAMIENTO A 0 GRADOS C DURANTE SIETE DIAS Y POR CENTRIFUGACION HACER DEPOSITAR LAS SUSTANCIAS SOLIDAS Y ACEITOSAS ANOTANDO SU VOLUMEN.

13.2. MATERIAL Y APARATOS.

13.2.1. REFRIGERADOR CAPAZ DE MANTENER LA TEMPERATURA A O. + - 1 GRADO C.

13.2.2. TUBOS DE CENTRIFUGA DE FONDO CONICO DE 100 ML DE CAPACIDAD (FIG. 13.I).

13.2.3. CENTRIFUGA QUE PROPORCIONE UNA FUERZA CENTRIFUGA RELATIVA EN EL EXTREMO DE LOS TUBOS DE 500 A 600 G.

13.2.4. PIPETA DE 1OO ML DE CAPACIDAD.

13.3. PROCEDIMIENTO.

13.3.1. PARA CONCENTRADOS EMULSIONABLES Y DISOLUCIONES.-PONER CON EXACTITUD DE + - 1 ML 100 ML DE UNA MUESTRA DEL PRODUCTO EN UN TUBO DE CENTRIFIGURA. ENFRIAR EL TUBO Y SU CONTENIDO A O. + - 1 GRADO C EN EL REFRIGERADOR. SI EL PLAGUICIDA DE LA MUESTRA ES UN PRODUCTO CRISTALINO, AÑADIR AL TUBO UN PEQUEÑO CRISTAL DEL PESTICIDA DE GRADO TECNICO O PURO (VER 13.5.1.).

DEJAR QUE EL TUBO Y SU CONTENIDO ESTEN A O. + - 1 GRADO C UNA HORA. DURANTE ESTE TIEMPO, AGITAR EL CONTENIDO DEL TUBO A INTERVALOS DE QUINCE MINUTOS, HACIENDOLO, CADA VEZ, DURANTE TREINTA SEGUNDOS, APROXIMADAMENTE. DESPUES DE ESTE PERIODO, EXAMINAR EL TUBO Y ANOTAR EL VOLUMEN DE CUALQUIER SUSTANCIA SOLIDA O ACEITOSA PRESENTE. VOLVER A PONER EL TUBO EN EL REFRIGERADOR Y DEJARLE A 0. + -1 GRADO C DURANTE UN PERIODO DE SIETE DIAS.

TRANSCURRIDOS LOS SIETE DIAS, SACAR EL TUBO DEL REFRIGERADOR Y DEJARLO REPOSAR DURANTE TRES HORAS A TEMPERATURA AMBIENTE, SIN QUE LLEGUE A SOBREPASAR 20 GRADOS C. TAPAR E INVERTIR UNA VEZ EL TUBO, DESTAPAR Y CENTRIFUGAR DURANTE QUINCE ADOS MINUTOS A UNA VELOCIDAD TAL QUE LA FUERZA CENTRIFUGA RELATIVA EN EL EXTREMO DE LOS TUBOS SEA SE 500 A 600 X G (ACELERACION DEBIDA A LA GRAVEDAD: 981 CM/SEG CUADRADO).

13.3.2. DILUCION ACUOSA.-PONER 100 ML DE LA SUSTANCIA EN EL TUBO DE CENTRIFUGA E INTRODUCIRLO EN EL REFRIGERADOR DURANTE CUARENTA Y OCHO HORAS A 0 GRADOS +- 1 GRADO C. TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO, ANOTAR LA CANTIDAD DE CUALQUIER SUSTANCIA SEPARADA, SI LA HUBIERE. DEJAR QUE EL TUBO DE CENTRIFUGA ADQUIERA LA TEMPERATURA AMBIENTE Y ANOTAR DE NUEVO LA CANTIDAD DE SUSTANCIA SEPARADA.

13.4. CALCULO

(FIGURA OMITIDA)

13.5. OBSERVACIONES.

13.5.1. EL CRISTAL DE SIEMBRA DEBE SER OBTENIDO DE LA MUESTRA QUE SE EXAMINA.

13.6. REFERENCIAS.

1. COLLABORATIVE INTERNATIONAL PESTICIDES ANALYTICAL COUNCIL LIMITED (CIPAC). ED. 1970. MT/39.

14. FLUIDEZ DE LOS PRODUCTOS EN POLVO

14.1. PRINCIPIO.

EL METODO ES ADECUADO PARA LA DETERMINACION DE LA FLUIDEZ DE LOS PRODUCTOS EN POLVO, COMO POR EJEMPLO, CARGAS MINERALES, FORMULACIONES EN POLVO (ESPOLVOREABLES Y MOJABLES), ETC. LOS PRODUCTOS A ENSAYAR DEBEN PASAR A TRAVES DEL TAMIZ DE 250 MICRO.

EN LOS PRODUCTOS CUYO TAMAÑO DE PARTICULA SEA MAYOR SE APRECIARA LA FLUIDEZ POR INSPECCION VISUAL.

14.2. MATERIAL Y APARATOS.

14.2.1. EMBUDO DE MATERIAL ADECUADO, ALUMINIO O SIMILAR DE ACUERDO CON LA DESCRIPCION DE LA FIGURA 14.I.

14.2.2. FRASCO DE VIDRIO CON TAPON A ROSCA DE 100 ML DE CAPACIDAD.

14.2.3. TAMICEZ DE 250 MICROS Y 150 MICROS.

14.3. REACTIVOS.

14.3.1. ARENA SILICEA LIMPIA, SECA Y QUE PASE POR EL TAMIZ DE 250 MICRAS, PERO NO POR EL DE 150 MICRAS.

14.4. PROCEDIMIENTO.

VERTER DE 10 A 15 G DE LA MUESTRA EN EL EMBUDO ESTANDAR, GOLPEAR SUAVEMENTE ESTE UNA O DOS VECES SI HICIERA FALTA Y OBSERVAR SE FLUYE. SI ESTO OCURRE LA FLUIDEZ ES "O".

SI NO FLUYE, PESAR 5 G CON APROXIMACION DE O,1 G DE LA MUESTRA EN EL FRASCO (14.2.3.), AÑADIR 5 + - O,1 G DE ARENA Y MEZCLAR A MANO DURANTE CINCO MINUTOS POR LO MENOS. PASAR LA MEZCLA CUIDADOSAMENTE AL EMBUDO, GOLPEAR SUAVEMENTE ESTE UNA O DOS VECES SI HICIERA FALTA Y OBSERVAR SI LA MEZCLA FLUYE, SI LA MEZCLA NO FLUYE A TRAVES DEL ORIFICIO, VOLVERLA A PASAR AL FRASCO Y MEZCLARLA CON OTROS 5 + - O,1 G DE ARENA. REPETIR EL PROCEDIMIENTO AÑADIENDO LA ARENA EN PORCIONES DE 5 + - 0,1 G HASTA QUE FLUYA.

14.5. CALCULO.

SI LA MUESTRA FLUYE LIBREMENTE, CONSIDERAR COMO INDICE DE FLUIDEZ "0". SI NO, CONSIDERAR COMO INDICE DE FLUIDEZ EL NUMERO MINIMO DE VECES QUE HA SIDO PRECISO AÑADIR PORCIONES DE 5 + - 0,1 GRAMOS DE ARENA A LOS 5 G DE MUESTRA PARA CONSEGUIR QUE FLUYA POR LO MENOS DURANTE QUINCE SEGUNDOS.

14.6. OBSERVACIONES.

14.6.1. INDICE DE FLUIDEZ ES EL NUMERO MINIMO DE PARTES EN PESO DE ARENA SILICEA QUE TIENE QUE AÑADIRSE A UNA PARTE EN PESO DE LA MUESTRA PARA QUE FLUYA.

14.6.2. FLUIDEZ.- SE DICE QUE UNA SUSTANCIA "FLUYE" CUANDO SALE LIBREMENTE EN CHORRO CONTINUO, POR UN EMBUDO ESTANDAR DURANTE QUINCE SEGUNDOS COMO MINIMO.

14.6.3. CUANDO EXISTA POSIBILIDAD DE CARGAS ELECTROSTATICAS EL FRASCO DE VIDRIO DEBE SER SUSTITUIDO POR UN FRASCO METALICO CON TAPON DE ROSCA.

(FIGURA OMITIDA)

14.7. REFERENCIAS.

1COLLABORATIVE INTERNATIONAL PESTICIDES ANALYTICAL COUNCIL LIMITED (CIPAC). ED. 1970. MT/44.

15 (A) PUNTO DE INFLAMACION EN VASO CERRADO

(METODO PENSKY-MARTENS)

15 (A).1. PRINCIPIO.

DETERMINAR LA TEMPERATURA MAS BAJA A LA CUAL, AL APLICAR UNA LLAMA, SE INFLAMA EL VAPOR FORMADO SOBRE LA MUESTRA, PREVIAMENTE CALENTADA UNIFORMEMENTE.

APLICABLE A PRODUCTOS CUYO PUNTO DE INFLAMACION ES SUPERIOR A 48 GRADOS C.

15 (A).2. MATERIAL Y APARATOS.

15 (A).2.1. APARATO PENSKY-MARTENS.

15 (A).2.2. TERMOMETROS ADECUADOS PARA LECTURAS ENTRE -7 Y 93 GRADOS C; 93 Y 110 GRADOS C Y 110 Y 370 GRADOS C.

15 (A).3. PROCEDIMIENTOS.

15 (A).3.1. SUSTANCIAS QUE NO SEAN SUSPENSIONES DE SOLIDOS.

LIMPIAR Y SECAR PERFECTAMENTE TODAS LAS PARTES DEL VASO Y SUS ACCESORIOS ANTES DE EMPEZAR EL ENSAYO. PONER ESPECIAL CUIDADO EN EVITAR EL DEJAR EN EL APARATO RESTOS DE DISOLVENTE EMPLEADO PARA LIMPIARLO TRAS EL ENSAYO ANTERIOR. LLENAR EL VASO CON LA MUESTRA A ENSAYAR HASTA EL ENRASE. COLOCAR LA TAPA SOBRE EL VASO Y PONERLO EN EL BAÑO DE AIRE CUIDANDO DE QUE ESTEN PERFECTAMENTE ENCAJADAS LAS MUESCAS SEMICIRCULARES DEL APARATO. INSERTAR EL TERMOMETRO ADECUADO. SI SE CONOCE LA TEMPERATURA APROXIMADA A QUE SE INFLAMARA LA MUESTRA, UTILIZAR DIRECTAMENTE EL TERMOMETRO APROPIADO. EN CASO CONTRARIO UTILIZAR LA SERIE DE TERMOMETROS. ENCENDER LA LLAMA Y GRADUARLA AL TAMAÑO DE UNA PERLA DE 4 MM DE DIAMETRO. CALENTAR A UNA VELOCIDAD TAL QUE LA TEMPERATURA LEIDA EN EL TERMOMETRO NO AUMENTE MENOS DE 5 GRADOS C, NI MAS DE 6 GRADOS C POR MINUTO. AGITAR A RAZON DE 90 A 120 R.P.M.

APLICAR POR PRIMERA VEZ LA LLAMA CUANDO LA TEMPERATURA SEA DE UNOS 16 GRADOS C POR DEBAJO DEL PUNTO DE INFLAMACION ESPERADO. APLICAR LA LLAMA A CADA AUMENTO DE 1 GRADO C, HASTA ALCANZAR LOS 100 GRADOS C, Y DESPUES HACERLO A CADA AUMENTO DE 3 GRADOS C. APLICAR LA LLAMA OPERANDO CON EL APARATO QUE CONTROLA EL OBTURADOR Y EL MECHERO CON LA LLAMA DEL ENSAYO, DE FORMA QUE LA LLAMA BAJE EN O,5 SEGUNDOS, MANTENIENDOLA DURANTE UN SEGUNDO EN SU POSICION MAS BAJA Y ELEVARLA RAPIDAMENTE A SU POSICION MAS ALTA. NO AGITAR MIENTRAS SE APLICA LA LLAMA.

TOMAR COMO PUNTO DE INFLAMACION LA TEMPERATURA QUE MARQUE EL TERMOMETRO EN EL MOMENTO EN QUE LA APLICACION DE LA LLAMA ORIGINE UNA INFLAMACION EN EL INTERIOR DEL VASO. NO CONFUNDIR EL VERDADERO PUNTO DE INFLAMACION CON EL HALO AZULADO QUE A VECES RODEA A LA LLAMA DE ENSAYO, EN LAS APLICACIONES QUE PRECEDEN A LA QUE ORIGINA LA VERDADERA INFLAMACION.

OBSERVAR Y ANOTAR LA PRESION BAROMETRICA. LA CIFRA DEL PUNTO DE INFLAMACION SE CORREGIRA SUMANDO O RESTANDO 0,9 GRADOS C POR CADA 25 MM DE HG EN QUE LA PRESION BAROMETRICA ESTE POR DEBAJO O POR ENCIMA DE LOS 760 MM DE HG.

15 (A).3.2. SUSPENSIONES DE SOLIDOS.

LLEVAR LA SUSTANCIA A ENSAYAR Y EL APARATO A UNA TEMPERATURA DE 10 A 20 GRAD. C. LLENAR COMPLETAMENTE EL ESPACIO QUE HAY ENTRE EL VASO Y EL BAÑO DE AIRE, CON AGUA A LA MISMA TEMPERATURA DEL APARATO Y DE LA MUESTRA. AGITAR A RAZON DE 250 + - 10 R.P.M. DURANTE EL ENSAYO LA TEMPERATURA DEBE IR AUMENTANDO A UNA VELOCIDAD COMPRENDIDA ENTRE 1 Y 2 GRADOS C POR MINUTO. CONTINUAR COMO EN 15 (A).3.1.

(CALCULOS OMITIDOS)

15(A).5. REFERENCIAS.

1. COLLABORATIVE INTERNATIONAL PESTICIDES ANALYTICAL COUNCIL LIMITED (CIPAC). ED. 1970. MT/12.3.

15(B). PUNTO DE INFLAMACION EN VASO CERRADO

(METODO TAG )

15 (B).1. PRINCIPIO.

DETERMINAR LA TEMPERATURA MAS BAJA A LA CUAL AL APLICAR UNA LLAMA SE INFLAMA EL VAPOR FORMADO SOBRE LA MUESTRA, PREVIAMENTE CALENTADA UNIFORMEMENTE. APLICABLE A PRODUCTOS CUYO PUNTO DE INFLAMACION ES INFERIOR A 79 GRADOS C.

15(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

15(B).2.1. APARATO DE ENSAYO TAG.

15(B).2.2. UNA PANTALLA PROTECTORA DE BASE CUADRADA DE 46 CM DE LADO POR 51 CM DE ALTURA, ABIERTA POR DELANTE.

15(B).2.3. TERMOMETROS ADECUADOS PARA EL VASO DE ENSAYO Y EL BAÑO.

15(B).3. PROCEDIMIENTO

REALIZAR EL ENSAYO CON LUZ TENUE PARA OBSERVAR CON CLARIDAD LA INFLAMACION. DICHA DETERMINACION NO DEBE HACERSE EN VITRINA O CERCA DE VENTILADORES, YA QUE DARIA RESULTADOS DUDOSOS.

COLOCAR EL APARATO, FIJO Y NIVELADO; PONER EL TERMOMETRO DEL BAÑO EN SU SITIO; PONER UN RECIPIENTE DEBAJO DEL TUBO ALIVIADERO PARA RECOGER EL EXCEDENTE, Y LLENAR EL BAÑO CON AGUA A UNA TEMPERATURA TAL QUE, CUANDO EMPIECE EL ENSAYO, LA TEMPERATURA DEL BAÑO DE AGUA ESTE AL MENOS 11 GRADOS C POR DEBAJO DEL PROBABLE PUNTO DE INFLAMACION DE LA MUESTRA A ENSAYAR.

PONER EL VASO VACIO EN EL BAÑO DE AGUA; MEDIR 50 ML DEL PRODUCTO A ENSAYAR EN UNA PROBETA Y VERTERLO EN EL VASO.

ELIMINAR EN LA SUPERFICIE DE LA MUESTRA CUALQUIER BURBUJA DE AIRE QUE PUEDA EXISTIR EMPLEANDO PARA ELLO UN TROZO DE PAPEL LIMPIO Y SECO.

15(B).3.1. SI SE DISPONE DE GAS.- TAPAR EL VASO COLOCANDO EN SU SITIO EL TERMOMETRO QUE MEDIRA EL PUNTO DE INFLAMACION; ENCENDER EL MECHERO DE GAS DE LA TAPA, REGULANDO SU LLAMA CON LA VALVULA DE GAS HASTA HACERLA DEL TAMAÑO DE LA PEQUEÑA PERLA BLANCA DE LA TAPA.

15(B).3.2. SI NO SE DISPONE DE GAS.- DESPUES DE CERRAR LA VALVULA, INSERTAR UNA MECHA DE ALGODON EN LA BOQUILLA DEL MECHERO, PONER UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE HILACHA DE ALGODON EN EL DEPOSITO DE ACEITE Y LLENARLO CON ACEITE DE BALLENA, GRASA DE CERDO (O PETROLEO). COLOCAR EL TAPON DEL DEPOSITO DE COMBUSTIBLE, PERO NO ENROSCARLO MUY FUERTE, YA QUE CONVIENE DEJAR UNA PEQUEÑA ABERTURA PARA LA ENTRADA DE AIRE.

ENCENDER EL MECHERO LLENO DE ALCOHOL, COLOCARLO EN LA BASE DEL APARATO Y VER QUE ESTE SITUADO EN EL CENTRO. GRADUAR LA LLAMA DE LA LAMPARA DE ALCOHOL PARA QUE LA TEMPERATURA DE LA MUESTRA QUE ESTA EN EL VASO SUBA A RAZON DE 1 GRADO C POR MINUTO -NO MAS RAPIDAMENTE DE 1,1 GRADOS C NI MENOS DE O,9 GRADOS C POR MINUTO. EL MECHERO DE GAS PUEDE SUSTITUIR AL DE ALCOHOL SIN QUE AFECTE APRECIABLEMENTE AL RESULTADO DEL ENSAYO.

AL COMENZAR LA PRUEBA, ANOTAR LA PRESION BAROMETRICA ASI COMO LA TEMPERATURA DE LA MUESTRA.

CUANDO LA TEMPERATURA DE LA MUESTRA LLEGA A UNOS 5 GRADOS C POR DEBAJO DEL PUNTO DE INFLAMACION PROBABLE, SE HACE GIRAR EL BOTON DE LA TAPA, PARA INTRODUCIR LA LLAMA DENTRO DEL VASO Y VOLVERLA A PONER EN SU POSICION PRIMITIVA, RAPIDA PERO NO BRUSCAMENTE. EL TIEMPO DE ESTA OPERACION DEBE SER APROXIMADAMENTE DE UN SEGUNDO.

ANOTAR LA TEMPERATURA DE LA MUESTRA Y LA HORA EN QUE SE HIZO LA PRIMERA INTRODUCCION DE LA LLAMA.

REPETIR LA APLICACION DE LA LLAMA A CADA AUMENTO DE O,6 GRADOS C DE TEMPERATURA DE LA MUESTRA, HASTA QUE SE PRODUZCA LA INFLAMACION DE ESTA DENTRO DEL VASO. NO HAY QUE CONFUNDIR LA INFLAMACION CON EL ENSANCHAMIENTO DE LA LLAMA DE ENSAYO O CON EL HALO QUE FORMA ESTA CUANDO SE INTRODUCE DENTRO DEL VASO; LA VERDADERA INFLAMACION CONSUME EL GAS DE LA PARTE SUPERIOR DEL VASO Y CAUSA UNA LIGERA EXPLOSION.(SI EL AUMENTO DE LA TEMPERATURA DE LA MUESTRA, DESDE EL MOMENTO QUE SE INTRODUCE POR PRIMERA VEZ LA LLAMA, HASTA QUE SE ALCANZA EL PUNTO DE INFLAMACION, ES MAYOR QUE 1,1 GRADOS C O MENOR QUE 0,9 GRADOS C POR MINUTO, SE DEBERA CONSIDERAR DUDOSO EL ENSAYO Y SE AJUSTARA LA LAMPARA DE ALCOHOL O EL E MECHERO DE GAS PARA CORREGIR LA VELOCIDAD DE CALENTAMIENTO.).

ANOTAR EL PUNTO DE INFLAMACION Y LA HORA EN QUE SE ALCANZA.

NO APAGAR LA LLAMA DE ENSAYO CON LA VALVULA REGULADORA. DEJAR ESTA AJUSTADA PARA OBTENER EL TAMAÑO ADECUADO DE LLAMA.

UNA VEZ REALIZADO POR COMPLETO ESTE ENSAYO PRELIMINAR, RETIRAR LA LAMPARA DE ALCOHOL O MECHERO DE GAS. LEVANTAR LA TAPA DEL VASO Y LIMPIAR EL TERMOMETRO. SE SACA EL VASO, SE VACIA Y SE SECA CUIDADOSAMENTE. TIRAR LA MUESTRA UNA VEZ SE HAYA ANALIZADO.

VERTER AGUA FRIA DENTRO DEL BAÑO DE AGUA, DEJANDO QUE REBOSE HACIA EL RECEPTACULO HASTA QUE LA TEMPERATURA DEL BAÑO DE AGUA DESCIENDA A 8 GRADOS C POR DEBAJO DEL PUNTO DE INFLAMACION DE LA MUESTRA, OBTENIDO EN EL ENSAYO ANTERIOR.

COLOCAR EN EL BAÑO DE AGUA EL VASO CON 50 ML DE MUESTRA NUEVA. ELIMINAR DE LA SUPERFICIE DE LA MUESTRA CUALQUIER BURBUJA, PONER LA TAPA CON SU TERMOMETRO, APLICAR LA LAMPARA DE ALCOHOL O EL MECHERO DE GAS; ANOTAR LA TEMPERATURA DE LA MUESTRA Y LA DEL AGUA, Y REPETIR EL ENSAYO ANTES DESCRITO. INTRODUCIR POR PRIMERA VEZ LA LLAMA CUANDO LA TEMPERATURA SEA 5,5 GRADOS C INFERIOR AL PUNTO DE INFLAMACION OBTENIDO EN EL ENSAYO ANTERIOR.

SI LOS RESULTADOS DE DOS DETERMINACIONES DIFIEREN EN MAS DE O,6 GRADOS C, REALIZAR UNA TERCERA DETERMINACION Y SI LA MAXIMA VARIACION DE LOS TRES ENSAYOS NO ES SUPERIOR A 1,1 GRADOS C, SE TOMARA COMO PUNTO DE INFLAMACION EL PROMEDIO DE LAS TRES, CORREGIDO EN FUNCION DE LA PRESION BAROMETRICA.

15(B).4. CALCULO.

LEER Y ANOTAR LA PRESION BAROMETRICA.-CUANDO LAS LECTURAS DE BAROMETRO VARIEN EN MAS DE 13 MM DE HG DE LA PRESION NORMAL DE 760 MM DE HG, EL VALOR DEL PUNTO DE INFLAMACION SE CORREGIRA DE ACUERDO CON LA TABLA 15(B).I, QUE HA SIDO CALCULADA CONSIDERANDO UNA DIFERENCIA DE O,9 GRADOS C PARA CADA VARIACION DE 25 MM EN LA PRESION BAROMETRICA.

(TABLA OMITIDA)

15(B).5. REFERENCIAS.

1. COLLABORATIVE INTERNATIONAL PESTICIDES ANALYTICAL COUNCIL LIMITED (CIPAC). ED. 1970. MT/12.2.

16. MOJABILIDAD DE POLVOS DISPERSABLES

(MOJABLES)

16.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DEL TIEMPO EMPLEADO PARA LOGRAR EL COMPLETO MOJADO DE LOS POLVOS EN AGUA.

16.2. MATERIAL Y APARATOS.

16.2.1. VASO DE 250 ML DE 6,5 + - O,5 CM DE DIAMETRO INTERNO Y DE O,9 + - O,5 CM DE ALTURA.

16.2.2. PESASUSTANCIAS.

16.2.3. CRONOMETRO.

16.2.4. PROBETA DE 100 ML.

16.3. REACTIVOS.

16.3.1. AGUA PATRON COMO EN 1.3.1.

16.4. PROCEDIMIENTO.

16.4.1. SIN AGITACION.-PONER 100 + - 1 ML DE AGUA PATRON EN EL VASO. PESAR 5 + - 0.1 G DE UNA MUESTRA REPRESENTATIVA DEL POLVO, TENIENDO CUIDADO DE QUE NO SE COMPACTE. AÑADIR DE UNA VEZ TODO EL POLVO DEJANDOLO CAER EN EL AGUA DESDE EL BORDE DEL VASO, Y SIN MOVER PARA NADA EL VASO, CON OBJETO DE QUE NO SE PRODUZCAN AGITACIONES EN LA SUPERFICIE DEL LIQUIDO.

UNA VEZ AÑADIDO EL POLVO EMPEZAR A CRONOMETRAR Y ANOTAR EL TIEMPO TRANSCURRIDO (CON APROXIMACION DE SEGUNDO)HASTA QUE ESTE COMPLETAMENTE MOJADO (DEBE DESPRECIARSE LA PELICULA DE PARTICULAS QUE PERMANEZCAN EN LA SUPERFICIE).

16.4.2. CON AGITACION.-REALIZAR LA TECNICA DESCRITA EN 16.4.1, PERO EL CONTENIDO DEL VASO DEBE AGITARSE A MANO DE FORMA ROTACIONAL CON UNA FRECUENCIA DE 120 ROTACIONES POR MINUTO TRAS LA ADICION DEL POLVO. REFERIR EL RESULTADO COMO "TIEMPO DE MOJADO CON AGITACION".

16.5. REFERENCIAS.

1. COLLABORATIVE INTERNATIONAL PESTICIDES ANALYTICAL COUNCIL LIMITED (CIPAC). ED. 1970. MT/53.3.

ANEJO VI

METODOS DE ANALISIS DE PRODUCTOS LACTEOS MANTEQUILLA

9. ACIDOS GRASOS DE CADENA CORTA

9.1. PRINCIPIO.

OBTENCION DE LOS ESTERES METILICOS DE LOS ACIDOS GRASOS MEDIANTE REACCION CON UNA SOLA SOLUCION DE HIDROXIDO POTASICO EN METANOL Y SUBSIGUIENTE INYECCION DIRECTAMENTE DE LA DISOLUCION DE ESTERES METILICOS EN EL CROMATOGRAFO.

EL METODO ES APLICABLE A LAS GRASAS DE MANTEQUILLAS U OTRAS QUE CONTENGAN ACIDOS GRASOS DE LONGITUD DE CADENA INFERIOR AL C 14 Y SIEMPRE QUE EL CONTENIDO DE ACIDOS LIBRES NO EXCEDA DEL 1 POR 100 EXPRESADOS EN ACIDO OLEICO.

9.2. MATERIAL Y APARATOS.

9.2.1. MATRACES CON BOCA ESMERILADA Y FONDO REDONDO DE 50 Y 100 ML DE CAPACIDAD.

9.2.2. PIPETAS AFORADAS DE 1,2 Y 10 ML.

9.2.3. MATRACES AFORADOS DE 50 Y 100 ML DE CAPACIDAD.

9.2.4. PROBETA GRADUADA DE 10 ML.

9.2.5. JERINGA DE CARACTERISTICAS ADECUADAS PARA LA INYECCION DE LA MUESTRA, GRADUADA EN DECIMAS DE ML, CON UNA CAPACIDAD TOTAL DE 1 A 10 ML.

9.2.6. CROMATOGRAFO APTO PARA TRABAJAR EN FASE GASEOSA, PROVISTO DE HORNO CAPAZ DE SER CALENTADO HASTA 250-300 GRADOS C Y SISTEMA DE REGULACION QUE PERMITA AZ CONTROLAR LA TEMPERATURA CON UN ERROR DE + - 1,0 GRADO C. EQUIPADO CON PROGRAMADOR DE TEMPERATURA CAPAZ DE LLEVAR LA TEMPERATURA DEL HORNO DE 60 GRADOS A A 180 GRADOS C A UNATURA CAPAZ DE LLEVAR LA TEMPERATURA DEL HORNO DE 60 GRADOS VELOCIDAD DE 4 GRADOS C/MIN. PROVISTO DE REGULACION INDEPENDIENTE DE LA TEMPERATURA DEL INYECTOR QUE PODRA SER CALENTADO A UNA TEMPERATURA SUPERIOR POR LO MENOS EN 50. A LA MAXIMA ALCANZABLE POR EL HORNO PROVISTO DE UN SISTEMA DE DETECCION SENSIBLE, DE IONIZACION DE LLAMA DE HIDROGENO, QUE PUEDA SER MANTENIDO A LA TEMPERATURA DE LA COLUMNA, A UNOS 50 GRADOS C POR ENCIMA DE LA DEL HORNO.

9.2.7. REGISTRADOR CON UNA TENSION DE ENTRADA ADECUADA A LA SALIDA DEL AMPLIFICADOR DEL CROMATOGRAFO, CON UNA VELOCIDAD DE RESPUESTA MINIMA CAPAZ DE PRODUCIR LA DEFLEXION COMPLETA DE LA ESCALA EN UN SEGUNDO; Y UNA VELOCIDAD DE DESPLAZAMIENTO DEL PAPEL DE 5 MM/MIN, QUE PERMITA LA POSIBILIDAD DE VARIAR ESTA VELOCIDAD, ACELERANDO O RETARDANDO EL DESPLAZAMIENTO.

9.2.8. TUBO DE NITROGENO A PRESION, UTILIZABLE COMO GAS PORTADOR, DEBIENDO TENER UNA RIQUEZA MINIMA DEL 99,8 POR 100.

9.2.9. TUBOS DE HIDROGENO Y AIRE A PRESION NECESARIOS PARA EL CASO EN QUE SE UTILICE DETECTOR DE LLAMA DE HIDROGENO. EL HIDROGENO DEBERA TENER UNA RIQUEZA MINIMA DEL 99,8 POR 100, DEBIENDO ESTAR SECO. COMO MEDIDA DE SEGURIDAD, ES MUY CONVENIENTE COLOCAR A LA ENTRADA DE LOS GASES EN EL CROMATOGRAFO, SENDOS TUBOS DE DESECACION, PROVISTOS DE TAMIZ MOLECULAR 13X.

9.2.10. COLUMNA CROMATOGRAFICA.

9.2.10.1. COLUMNA QUE SATISFAGA LAS CONDICIONES QUE SE INDICAN EN 9.6.1.

9.2.10.2. COLUMNA DE VIDRIO CON DIAMETRO INFERIOR DE 4 MM Y UNA LONGITUD APROXIMADA DE 2 MM. RELLENADA CON CHROMOSORB G, W O Q (80-100 MALLAS), CONTENIENDO DE 2,5 A 5 POR 100 DE UN POLIESTER, RECOMENDANDOSE CUALQUIERA DE LOS TRES SIGUIENTES: DIETILENGLICOLSUCCINATO (DEGS); ETILENGLICOLSUCCINATO O ADIPATO (EGS O EGA); POLIETILENGLICOLADIPATO (PEGA).

ANTES DE EMPLEAR UNA COLUMNA NUEVA EN LA RESOLUCION DE PROBLEMAS ANALITICOS, DEBE SER ACONDICIONADA, ELIMINANDO TODOS AQUELLOS PRODUCTOS VOLATILES QUE PERTURBARIAN LA MARCHA DE LA CROMATOGRAFIA. PARA ELLO, SE MONTA EN EL CROMATOGRAFO, SIN CONECTARLA AL DETECTOR, Y SE CALIENTE EL HORNO A UNOS 10 GRADOS C POR ENCIMA DE LA TEMPERATURA MAXIMA A QUE VAYA A SER UTILIZADA LA COLUMNA EN TRABAJOS POSTERIORES; HACIENDO PASAR, AL MISMO TIEMPO, UNA CORRIENTE DE NITROGENO DE 30 A 40 ML/MINUTO, QUE SE MANTIENE DURANTE VEINTICUATRO HORAS COMO MINIMO. LA COLUMNA SERA APTA PARA SU UTILIZACION SI, UNA VEZ CONECTADA AL DETECTOR Y EN FUNCIONAMIENTO NORMAL, LA LINEA BASE DIBUJADA POR EL REGISTRADOR ACUSA LA ESTABILIDAD DEL SISTEMA.

9.3. REACTIVOS.

9.3.1. METANOL ABSOLUTO (99,8 POR 100).

9.3.2. HIDROXIDO POTASICO EN LENTEJAS.

9.3.3. ETER DE PETROLEO O HEXANO. ETER DE PETROLEO (P.E.: 40-60 GRADOS C), CUYO CONTENIDO EN BENCENO NO SEA SUPERIOR A O,1 POR 100. HEXANO NORMAL, QUE CUMPLA LAS MISMAS ESPECIFICACIONES DEL ETER DE PETROLEO.

9.3.4. HEPTANO NORMAL, CON UNA RIQUEZA MINIMA DEL 99 POR 100.

9.3.5. DISOLUCION 2N DE HIDROXIDO POTASICO EN METANOL. DISOLVER 11,2 G DE HIDROXIDO POTASICO EN 100 ML DE METANOL.

9.3.6. ESTERES METILICOS DE PUREZA ADECUADA PARA SU UTILIZACION COMO PATRONES EN CROMATOGRAFIA GASEOSA.- SE DISPONDRA DE LOS ESTERES METILICOS DE LOS ACIDOS MENCIONADOS A CONTINUACION, DEBIENDO TENER UNA PUREZA MINIMA DE 99 POR 100, DETERMINADA POR CROMATOGRAFIA GASEOSA:

ACIDO BUTANOICO (BUTIRICO).

ACIDO PENTANOICO (VALERIANICO).

ACIDO HEXANOICO (CAPROICO).

ACIDO OCTANOICO (CAPRILICO).

ACIDO DECANOICO (CAPRICO).

ACIDO DODECANOICO (LAURICO).

ACIDO TETRADECANOICO ( MIRISTICO).

ACIDO HEXADECANOICO ( PALMITICO).

ACIDO OCTADECANOICO (ESTEARICO).

ACIDO 9-OCTADECANOICO (OLEICO).

ACIDO 9,12 OCTADECADIENOICO (LINOLEICO).

ACIDO SICOSANOICO (ARAQUICO).

9.3.7. SOLUCION DE REFERENCIA I.-EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML SE PESA, CON EXACTITUD DE + - 0,1 MG, 1 G DE PENTANOATO DE METILO, DISOLVIENDOLO EN HEPTANO NORMAL Y COMPLETANDO HASTA EL ENRASE.

9.3.8. SOLUCION DE REFERENCIA II.-EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML SE PESA, CON EXACTITUD DE + - O,1 MG, 200 G DE PENTANOATO DE METILO, DISOLVIENDOLO EN HEPTANO NORMAL Y COMPLETANDO HASTA EL ENRASE.

9.4. PROCEDIMIENTO.

9.4.1. PREPARACION DE LOS ESTERES METILICOS.

EN UN MATRAZ DE FONDO REDONDO DE 50 ML, PESAR CON EXACTITUD DE + - 0,1 MG, 1 G DE GRASA. AÑADIR 10 ML DE ETER DE PETROLEO O HEXANO Y AGITAR SUAVEMENTE HASTA DISOLUCION DE LA GRASA.

EN EL CASO DE QUE SE QUIERA EFECTUAR UNA DETERMINACION CUANTITATIVA DE LOS ACIDOS BUTIRICO Y CAPROICO EN LA MUESTRA, AGREGAR A LA DISOLUCION EN ETER DE PETROLEO DE LA GRASA 1 ML, EXACTAMENTE MEDIDO, DE LA SOLUCION DE REFERENCIA MAS ADECUADA; PARA MUESTRAS CONTENIENDO DE 1-4 POR 100 DE ACIDO BUTIRICO SE UTILIZARA LA SOLUCION DE REFERENCIA I; PARA MUESTRAS CONTENIENDO MENOS DE 1 POR 100 DE ACIDO BUTIRICO SE UTILIZARA LA SOLUCION DE REFERENCIA II.

SI SE DESEA EFECTUAR SOLAMENTE UN ANALISIS COMPLETO DE LA FRACCION DE ACIDOS GRASOS, PARA LO QUE SE APLICA EL METODO DE NORMALIZACION INTERNA, NO SERA NECESARIO EL EMPLEO DE SOLUCION DE REFERENCIA.

A LA SOLUCION EN ETER DE PETROLEO DE LA MUESTRA, ADICIONADA O NO DE SOLUCION DE REFERENCIA, AGREGAR O,5 ML DE DISOLUCION 2N DE HIDROXIDO POTASICO. AGITAR SUAVEMENTE LA MEZCLA HASTA QUE SE PONGA TRANSPARENTE, PARA LO CUAL SON SUFICIENTES UNOS VEINTE O TREINTA SEGUNDOS. CASI INMEDIATAMENTE DESPUES DE OBSERVAR LA CLARIFICACION DE LA SOLUCION SUELE APRECIARSE UN ENTURBAMIENTO DEBIDO A LA SEPARACION DE GLICEROL, QUE SE SEDIMENTA RAPIDAMENTE.

INMEDIATAMENTE DESPUES DE TERMINADA LA REACCION Y OBSERVADA LA SEDIMENTACION, TOMAR LA CANTIDAD NECESARIA CON LA JERINGA E INYECTAR EN EL CROMATOGRAFO; UNA DEMORA EN LA INYECCION DE LOS ESTERES METILICOS DARIA LUGAR A LA FORMACION DE JABONES, CON ERROR EN LA DETERMINACION.

9.4.2. DETERMINACION CROMATOGRAFICA.

9.4.2.1. CONDICIONES DE TRABAJO.

TEMPERATURA DE LA COLUMNA. TEMPERATURA PROGRAMADA DE 60 GRADOS C A 160 GRADOS C, CON UNA VELOCIDAD DE 4 GRADOS C/MINUTO.

TEMPERATURA DEL INYECTOR: 200 GRADOS C.

TERMPERATURA DEL DETECTOR: 200 GRADOS C.

GAS PORTADOR: NITROGENO (O HELIO) CON UN FLUJO DE 60 ML/MIN.

FLUJO DE HIDROGENO Y AIRE PARA LA ALIMENTACION DEL DETECTOR:

LOS FLUJOS DEPENDERAN DEL TIPO DE DETECTOR UTILIZADO, DEBIENDO DETERMINARSE PREVIAMENTE PARA OPTIMIZAR LA RESPUESTA.

EL REGISTRO OBTENIDO DEL CROMATOGRAMA DEBE SATISFACER LAS CONDICIONES QUE SE INDICAN A CONTINUACION; CASO CONTRARIO, SE REPITE LA INYECCION MODIFICANDO LA CANTIDAD INYECTADA O LA SENSIBILIDAD DE TRABAJO HASTA OBTENER UN CROMATOGRAMA SATISFACTORIO.

LOS REQUISITOS EXIGIBLES SON LOS SIGUIENTES:

A) EL AREA TOTAL DESCRITA EN EL REGISTRO, REFERIDA A LA SENSIBILIDAD MAXIMA UTILIZADA EN EL CURSO DE LA OPERACION, DEBE SER DE UN ORDEN APROXIMADO DE 2.000 MM CUADRADOS, CON UNA VELOCIDAD DEL PAPEL EN EL REGISTRADOR DE 5MM/MIN. DE ESTA FORMA, LOS COMPONENTES PRESENTES EN UNA CUANTIA DEL 0,1 POR 100 DEBEN DAR UN PICO, COMO MINIMO, DE 2 MM CUADRADOS, SIENDO, POR TANTO, PERFECTAMENTE RECONOCIBLES.

B) CON EL FIN DE CONSEGUIR QUE TODOS LOS PICOS CAIGAN DENTRO DEL PAPEL REGISTRADOR, SE UTILIZARA, EN CADA CASO, LA ATENUACION DE SENSIBILIDAD QUE SEA NECESARIA, CUIDANDO QUE EL PICO DE MAYOR INTENSIDAD NO SEA ATENUADO MAS DE OCHO VECES.

UNA VEZ CONSEGUIDO UN REGISTRO SATISFACTORIO, Y HABIENDO ALCANZADO NUEVAMENTE LA PLUMA LA LINEA BASE, SE INTERRUMPE EL FUNCIONAMIENTO DEL REGISTRADOR Y SE RETIRA EL PAPEL CON EL REGISTRO PARA LA IDENTIFICACION DE LOS PICOS Y/O CALCULOS CUANTITATIVOS.

9.4.2.2. IDENTIFICACION DE LOS PICOS.-SE SEGUIRAN LOS CRITERIOS ESTABLECIDOS EN EL APARTADO 9.6.2.

9.4.2.3. DETERMINACIONES CUANTITATIVAS.-LA DETERMINACION CUANTITATIVA SE BASA EN EL PRINCIPIO DE QUE LOS PESOS DE CADA UNO DE LOS COMPONENTES SEPARADOS EN LA MEZCLA SON PROPORCIONALES A LAS AREAS COMPRENDIDAS DENTRO DE LOS TRIANGULOS DIBUJADOS DEBAJO DE CADA PICO. EL AREA DE CADA TRIANGULO SE OBTIENE TRAZANDO RECTAS TANGENTES A LAS LINEAS DIBUJADAS EN EL REGISTRO, PROLONGANDOLAS HASTA SU INTERSECCION CON LA LINEA BASE Y MULTIPLICANDO LA ALTURA DEL TRIANGULO POR LA MITAD DE LA BASE. EN EL CASO DE HABER TRABAJADO CON ATENUACIONES DIFERENTES PARA CADA PICO, SE REFERIRAN TODAS LAS MEDIDAS A UNA MISMA SENSIBILIDAD DEL REGISTRADOR, MULTIPLICANDO LA ALTURA POR EL FACTOR DE ATENUACION CORRESPONDIENTE EN CADA CASO, Y EL VALOR DE LA ALTURA ASI CORREGIDA POR LA MITAD DE LA BASE.

9.4.3. DETERMINACION DEL CONTENIDO DE LOS ACIDOS BUTIRICO Y CAPROICO EN LA MATERIA GRASA.-ESTA DETERMINACION SE REALIZA POR EL METODO DEL PATRON INTERNO, SIENDO EL PATRON ELEGIDO EL PENTANOATO DE METILO.

9.4.3.1. PREPARACION DE LA MEZCLA DE CALIBRACION. CON UNA EXACTITUD DE +-O,1 MG Y EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML, PESAR UNOS 100 MG DE CADA UNO DE LOS SIGUIENTES PATRONES: BUTANOATO DE METILO, PENTANOATO DE METILO Y CAPROATO DE METILO. SE DISUELVE LA MEZCLA DE HEPTANO NORMAL Y SE DILUYE COMPLETANDO HASTA EL ENGRASE.

INYECTAR LA CANTIDAD NECESARIA DE LA SOLUCION ANTERIOR, NORMALMENTE 0,2-0,4 MICROS, L, PARA QUE, TRABAJANDO A LA SENSIBILIDAD MEDIA DEL APARATO, SE CONSIGA SITUAR LOS MAXIMOS DE LOS PICOS EN UNA POSICION DEL 70-80 POR 100 DEL RECORRIDO TOTAL DE LA PLUMA DEL REGISTRADOR. LOS TRES PICOS DEBERAN REGISTRARSE A LA MISMA SENSIBILIDAD. SI FUESE NECESARIO, SE DILUIRA LA SOLUCION ANTERIOR CON HEPTANO NORMAL EN LA RELACION NECESARIA PARA PODER AJUSTARSE A LAS PRESCRIPCIONES FIJADAS. EFECTUAR, CUANDO MENOS, TRES DETERMINACIONES CONSECUTIVAS, QUE NO DEBEN DISCREPAR ENTRE SI MAS DEL 1 POR 100.

9.4.4. ANALISIS CUANTITATIVO DE LA TOTALIDAD DE LOS COMPONENTES DE LA FRACCION DE ACIDOS GRASOS, COMPRENDIENDO DEL C4 AL C20 Y C18:3.

9.4.4.1. PREPARACION DE LA MEZCLA DE CALIBRACION.-DETERMINAR PREVIAMENTE EL FACTOR DE CORRECCION PARA CADA ACIDO COMPONENTE DE LA MEZCLA, REFERIDO A UNO CUALQUIERA DE ELLOS QUE SE TOMA COMO PATRON, ELIGIENDOSE NORMALMENTE PARA ESTE FIN EL ACIDO PALMITICO, Y DEBIENDO TENER LA MEZCLA DE CALIBRACION UNA COMPOSICION ANALOGA A LA DE LA MEZCLA PROBLEMA.

PARA ELLO, SI NO SE CONOCE PREVIAMENTE EL ORDEN DE COMPOSICION DEL PROBLEMA, SE REALIZARA UNA DETERMINACION CROMATOGRAFICA DE ORIENTACION, REALIZANDOSE EN EL REGISTRO LA CUANTIFICACION DE LOS COMPONENTES SUPONIENDO EL MISMO FACTOR DE RESPUESTA PARA TODOS ELLOS, EFECTUANDO UN REPARTO PROPORCIONAL ENTRE LAS AREAS MEDIDAS.

EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML, PESAR CON UNA EXACTITUD DE +-0,1 MG, CANTIDADES DE LOS ESTERES METILICOS PATRONES QUE SE INDICAN A CONTINUACION PROPORCIONALES A LAS CIFRAS DE COMPOSICION ENCONTRADAS EN EL ANALISIS DE ORIENTACION ANTERIORMENTE ALUDIDO, O PREVISTAS CON ANTERIORIDAD PARA LA MUESTRA. LOS PATRONES QUE DEBEN PESARSE SON LOS SIGUIENTES: BUTANOATO DE METILO; HEXANOATO DE METILO, OCTANOATO DE METILO, DECANOATO DE METILO; DODECANOATO DE METILO, TETRADECANOATO DE METILO; HEXADECANOATO DE METILO, OCTADECANOATO DE METILO, OLEATO DE METILO, LINOLEATO DE METILO Y EICOSANOATO DE METILO. SE DISUELVE LA MEZCLA DE HEPTANO NORMAL AGREGANDO LA CANTIDAD ADECUADA DE DISOLVENTE EN RELACION AL PESO TOTAL DE ESTERES METILICOS SE HAYAN PESADO; PARA UNOS 500 MG EN TOTAL, SE DEBEN EMPLEAR, COMO ORIENTACION UNOS 50 ML DE HEPTANO. A CONTINUACION, INYECTAR 0,2-0,4 MICROS L PARA QUE TRABAJANDO A A LA SENSIBILIDAD MEDIA DEL APARATO, SE CONSIGA SITUAR EL MAXIMO DEL PICO CORRESPONDIENTE AL COMPONENTE MAYORITARIO, EN UNA POSICION DEL 70-80 POR 100 DEL RECORRIDO TOTAL DE LA PLUMA DEL REGISTRADOR. TODOS LOS PICOS DEBEN REGISTRARSE A LA MISMA SENSIBILIDAD, LO CUAL SUELE SER PERFECTAMENTE FACTIBLE EN LA GRASA DE LECHE; EN AQUELLOS CASOS EN QUE LA RELACION ENTRE EL PICO MAYORITARIO Y EL PICO MINORITARIO NO PERMITA REGISTRAR ESTE ULTIMO CON LAS DIMENSIONES ADECUADAS PARA EFECTUAR UNA CUANTIFICACION CORRECTA DE SU AREA, SE PODRA EFECTUAR EL CAMBIO NECESARIO EN LA ATENUACION DEL REGISTRO, PROCURANDO QUE ESTA NO SOBREPASE LA RELACAION DE 4 : 1. SI FUESE NECESARIO, SE DILUIRA LA SOLUCION CON HEPTANO NORMAL EN LA RELACION NECESARIA PARA PODER AJUSTARSE A LAS PRESCRIPCIONES FIJADAS. EFECTUAR, CUANDO MENOS, TRES DETERMINACIONES CONSECUTIVAS, QUE NO DEBEN DISCREPAR ENTRE SI MAS DEL 1 POR 100.

9.5. CALCULOS.

9.5.1. CALCULO DE LOS FACTORES DE CORRECCION PARA LOS ACIDOS BUTIRICO Y CAPROICO. SE DETERMINAN LAS AREAS DE LOS TRES PICOS, SIGUIENDO LAS NORMAS QUE SE CONTIENEN EN EL APARTADO 5.4, Y SE CALCULAN LOS DOS FACTORES CORRESPONDIENTES AL C4 Y C6, CON LA FORMULA SIGUIENTE:

(FORMULA OMITIDA)

9.5.2. CALCULO DEL CONTENIDO DE ACIDOS.-LOS CONTENIDOS DE ACIDO BUTIRICO Y ACIDO CAPROICO EN LA MUESTRA DE GRASA SE CALCULAN POR LA FORMULA SIGUIENTE:

(FORMULA OMITIDA)

9.5.3. CALCULO DE LOS FACTORES DE CORRECCION.-UNA VEZ DETERMINADAS LAS AREAS DE TODOS LOS PICOS, SIGUIENDO LAS NORMAS QUE SE CONTIENEN EN EL APARTADO 9.4.2.2, SE CALCULA EL FACTOR DE CADA ACIDO, REFERIDO AL ACIDO PALMITICO TOMADO COMO UNIDAD, UTILIZANDO LA FORMULA QUE SE INCLUYE EN EL APARTADO 9.5.1, SUSTITUYENDO EL AREA AP Y EL PESO P DEL COMPUESTO PATRON POR LOS VALORES CORRESPONDIENTES AL PALMITATO DE METILO.

9.5.4. CALCULO DE COMPOSICION DE LA FRACCION DE ACIDOS GRASOS.-SE CALCULARAN LAS AREAS CORREGIDAS DE CADA UNO DE LOS COMPONENTES DE LA FRACCION MULTIPLICANDO EL AREA MEDIDA EN EL REGISTRO POR EL FACTOR DE CORRECCION DETERMINADO SEGUN SE INDICA EN EL APARTADO ANTERIOR. EL CONTENIDO DE CADA COMPONENTE VENDRA DADO POR LA EXPRESION:

(FORMULA OMITIDA)

9.6. OBSERVACIONES.

9.6.1. LA PUESTA A PUNTO DE LA COLUMNA SE DETERMINA OBTENIENDO LA RESOLUCION DE DOS PRODUCTOS CRITICOS COMO SON EL OLEATO Y EL ESTEARATO DE METILO. LA RESOLUCION VIENE DETERMINADA POR LA EXPRESION:

(FORMULA OMITIDA)

ESTOS VALORES SE DETERMINAN SOBRE EL CROMATOGRAMA OBTENIDO CON UNA MUESTRA CONTENIENDO CANTIDADES APROXIMADAMENTE IGUALES DE ESTEARATO Y OLEATO DE METILO, INYECTANDO UNA CANTIDAD TAL QUE LA ALTURA DE ESTOS PICOS ALCANCE AL 25-50 POR 100 DEL ANCHO DEL PAPEL DE REGISTRO. SI LA RESOLUCION CALCULADA ES IGUAL O MAYOR QUE 1,0 LA COLUMNA Y EL INSTRUMENTO SE ENCUENTRAN EN CONDICIONES SATISFACTORIAS. TODAS LAS COLUMNAS EN EL TRANSCURSO DE SU UTILIZACION SUFREN UNA PERDIDA GRADUAL EN LA RESOLUCION DE LOS PICOS; CUANDO EL VALOR LLEGUE A SER INFERIOR A 1,0, DEBERA INSTALARSE UNA NUEVA COLUMNA.

9.6.2. PARA LA IDENTIFICACION DE LOS PICOS SE PUEDEN SEGUIR DOS CRITERIOS:

9.6.2.1. CRITERIO BASADO EN LOS TIEMPOS DE RETENCION.-REFIRIENDONOS EXCLUSIVAMENTE A LOS ACIDOS QUE ENTRAN NORMALMENTE EN LA COMPOSICION DE LAS GRASAS NATURALES, SUS ESTERES APARECEN EN EL CROMATOGRAMA EN ORDEN CRECIENTE DE SUS ATOMOS DE CARBONO Y A SU INSATURACION. ESTO ES, EL PALMITICO (C16) APARECE DELANTE DEL ESTEARICO (C18), Y LOS ESTERES EN C18 APARECEN EN EL ORDEN ESTEARATO, OLEATO, LINOLEATO Y LINOLENATO. EL ESTER DEL ACIDO ARAQUICO (C20:0), USUALMENTE, APARECE ANTES DEL LINOLENICO (C18:3), PERO PUEDE OCURRIR LO CONTRARIO EN ALGUNOS CASOS, DEPENDIENDO DEL TIPO DE COLUMNA Y DE LAS CONDICIONES DE SU UTILIZACION, O INCLUSO SUPERPONERSE EL UNO AL OTRO.

OPERANDO EN CONDICIONES CONSTANTES, LOSTIEMPOS DE RETENCION SON REPRODUCTIBLES EN CADA ESPECIE QUIMICA, SIENDO EL CRITERIO MAS FRECUENTE EMPLEADO PARA SU IDENTIFICACION.

EL TIEMPO DE RETENCION VIENE DADO POR LA DISTANCIA, MEDIDA EN EL CROMATOGRAMA, ENTRE EL MAXIMO DEL PICO DEL AIRE Y LA POSICION DEL MAXIMO DE LA BANDA. TRABAJANDO CON DETECTOR DE LLAMA DE HIDROGENO, LA SALIDA DEL AIRE NO SE DETECTA, PUDIENDOSE TOMAR, EN ESTE CASO, EL MOMENTO EN QUE SE INDICA LA SALIDA DEL DISOLVENTE, ACUSADA POR UNA FUERTE DEFLEXION DE LA PLUMA DEL REGISTRADOR.

9.6.2.2. CRITERIO BASADO EN LOS TIEMPOS DE RETENCION RELATIVOS. LOS TIEMOS DE RETENCION RELATIVOS SON MAS REPRODUCTIBLES. LAS RETENCIONES RELATIVAS VIENEN DETERMINADAS POR EL COCIENTE DE DIVIDIR EL TIEMPO DE RETENCION DE CADA PICO POR EL TIEMPO REGISTRADO PARA EL PICO DEL PALMITATO DE METILO, O BIEN POR OTRO ESTER QUE SE TOME COMO COMPARACION, DETERMINADOS TODOS ELLOS SEGUN EL CRITERIO EXPUESTO EN EL PARRAFO ANTERIOR.

9.7. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO DE RACIONALIZACION Y NORMALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA EXPAÑOLA 55.118.

QUESO

1. EXTRACCION DE LA GRASA DEL QUESO

1.1. PRINCIPIO.

EXTRACION DE LA GRASA DEL QUESO MEDIANTE PENTANO O ETER DE PETROLEO.

1.2. MATERIAL Y APARATOS.

1.2.1. MORTERO.

1.2.2. APARATO DE EXTRACCION CONTINUO.

1.2.3. BAÑO DE AGUA.

1.3. REACTIVOS.

1.3.1. SULFATO SODICO ANHIDRO.

1.3.2. PENTANO O ETER DE PETROLEO (P. E. 40-60 GRADOS C).

1.4. PROCEDIMIENTO.

MOLER LA MUESTRA EN UN MORTERO CON SULFATO SODICO ANHIDRO HASTA OBTENER UNA MASA GRANULOSA. EXTRAER LA MASA CON PENTANO O ETER DE PETROLEO (SE PUEDE USAR UN APARATO DE EXTRACCION CONTINUO) Y EVAPORAR EL DISOLVENTE AL BAÑO DE AGUA O A PRESION REDUCIDA.

1.5. REFERENCIA.

1. NORMA INTERNACIONAL FIL-IDF 32: 1965.

2. DETERMINACION DEL CONTENIDO EN MATERIA GRASA. 2.1. PRINCIPIO.

EL CONTENIDO DE GRASA SE DETERMINA GRAVIMETRICAMENTE POR DIGESTION DEL QUESO CON ACIDO CLORHIDRICO Y SUBSIGUIENTEMENTE EXTRACCION DE LA GRASA DE UNA SOLUCION ACIDO-ALCOHOLICA CON LA AYUDA DE ETER DIETILICO Y ETER DE PETROLEO, EVAPORACION DE LOS DISOLVENTES Y POSTERIOR PESADA DE LOS RESIDUOS.

LA PRECISION DEL METODO ES DE 0,2 G DE GRASA POR 100 G DEL PRODUCTO.

2.2. MATERIAL Y APARATOS.

2.2.1. BALANZA ANALITICA.

2.2.2. PROBETAS O MATRACES DE EXTRACCION ADECUADOS PROVISTOS DE TAPONES DE VIDRIO ESMERILADO O CORCHO; DISPOSITIVOS DEL CIERRE QUE NO PUEDAN SER ATACADOS POR LOS DISOLVENTES UTILIZADOS. SI SE USAN TAPONES DE CORCHO DEBERAN SER DE BUENA CALIDAD, SOMETIENDOLOS A EXTRACCION SUCESIVAMENTE CON ETER DIETILICO Y ETER DE PETROLEO. DESPUES SE INTRODUCIRAN, AL MENOS DURANTE VEINTE MINUTOS, EN AGUA A UNA TEMPERATURA DE 60 GRADOS C O SUPERIOR, DEJANDOSE ENFRIAR EN AGUA DE FORMA QUE ESTEN SATURADOS CUANDO SE UTILICEN.

2.2.3. MATRACES DE PAREDES DELGADAS Y BASES PLANAS DE 150 A 250 ML DE CAPACIDAD.

2.2.4. ESTUFA DE DESECACION REGULABLE QUE PERMITA TRABAJAR A 102 GRADOS +- 2 GRADOS C, O UNA ESTUFA DE DESECACION POR VACIO (TEMPERATURA DE 70 A 75 GRADOS C, PRESION MENOR DE 50 MM DE HG).

2.2.5. PERLAS DE VIDRIO O TROZOS DE CARBURO DE SILICIO, EXENTO DE GRASA.

2.2.6. BAÑO DE AGUA.

2.2.7. HOJAS DE PELICULA DE CELULOSA, SIN BARNIZAR, SOLUBLES EN ACIDO CLORHIDRICO, DE 0,03-0,05 MM DE ESPESOR Y DE 50 X 75 MM DE SUPERFICIE, APROXIMADAMENTE. LAS PELICULAS DE CELULOSA NO DEBEN AFECTAR AL RESULTADO DEL ANALISIS.

2.2.8. APARATO ADECUADO PARA LA TRITURACION DE LA MUESTRA.

2.3. REACTIVOS.

2.3.1. ACIDO CLORHIDRICO DEL 25 POR 100 (P/P) (D20=1,125).

2.3.2. ETANOL DE 96 POR 100 (V/V) (2.6.1).

2.3.3. ETER DIETILICO, EXENTO DE PEROXIDOS (2.6.2).

2.3.4. ETER DE PETROLEO QUE DESTILE A UNA TEMPERATURA QUE OSCILE ENTRE 30 Y 60 GRADOS CENTIGRADOS.

2.3.5. LA MEZCLA DE DISOLVENTES SE PREPARARA POCO ANTES DE UTILIZARLA, MEZCLANDO VOLUMENES IGUALES DE 2.3.3. Y 2.3.4. (2.6.3).

2.4. PROCEDIMIENTO.

2.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.-ANTES DE EFECTUAR EL ANALISIS, ELIMINAR LA CORTEZA, CAPA O SUPERFICIE MOHOSA QUE RECUBRE EL QUESO, CON OBJETO DE OBTENER UNA MUESTRA REPRESENTATIVA DEL QUESO TAL COMO SE CONSUME NORMALMENTE. TRITURAR LA MUESTRA CON 2.2.8, MEZCLAR LA MASA TRITURADA RAPIDAMENTE, Y SI ES POSIBLE TRITURARLA POR SEGUNDA VEZ Y MEZCLARLA DE NUEVO CONCIENZUDAMENTE (2.6.4). PASAR LA MUESTRA PREPARADA A UN RECIPIENTE CERRADO HERMETICAMENTE HASTA EL MOMENTO DEL ANALISIS, QUE SE EFECTUARA EN EL MISMO DIA (2.6.5).

2.4.2. DETERMINACION.-SECAR EL MATRAZ 2.2.3 CON 2.2.5 EN LA ESTUFA DURANTE UN INTERVALO DE MEDIA HORA. DEJAR QUE SE ENFRIE EL MATRAZ A LA TEMPERATURA AMBIENTE DE LA BALANZA Y PESAR EL ENFRIADO CON APROXIMACION DE 0,1 MG.

PESAR CON APROXIMACION DE 1 MG EN EL APARATO DE EXTRACCION 2.2.2 O EN UN VASO O MATRAZ DE 100 ML, DE 1 A 3 GRAMOS DE LA MUESTRA DE QUESO PREPARADA. LA MUESTRA DEL ENSAYO PODRA TAMBIEN PESARSE UTILIZANDO UNA LAMINA DE CELULOSA 2.2.7, QUE POSTERIORMENTE SE PLEGARA E INTRODUCIRA EN EL TIPO DE VASIJA SELECCIONADA.

AÑADIR DE 8 A 10 ML DE ACIDO CLORHIDRICO (SEGUN LA FORMA DEL APARATO DE

EXTRACCION) Y AGITAR LA VASIJA LIGERAMENTE EN UN BAÑO DE AGUA HIRVIENDO O SOBRE UNA LLAMA HASTA QUE EL QUESO ESTE COMPLETAMENTE DISUELTO. DEJAR LA VASIJA EN REPOSO DURANTE VEINTE MINUTOS EN EL BAÑO DE AGUA HIRVIENDO Y DESPUES ENFRIAR, POR EJEMPLO, EN AGUA CORRIENTE.

SI LA DIGESTION DEL QUESO SE HA HECHO EN EL APARATO DE EXTRACCION, AÑADIR 10 ML DE ETANOL Y MEZCLAR EN EL CONTENIDO, REMOVIENDOLO LIGERAMENTE, PERO DE UN MODO HOMOGENEO EN EL APARATO SIN CERRAR.

SI LA DIGESTION DEL QUESO SE HA HECHO EN UNA VASIJA DISTINTA DEL MATRAZ DE EXTRACCION, VERTER EL CONTENIDO DE LA VASIJA EN ESTE MATRAZ. ENJUAGARLO SUCESIVAMENTE CON 10 ML DE ETANOL, 25 ML DE ETER DIETILICO Y 25 ML DE ETER DE PETROLEO, VERTIENDO CADA VEZ EL DISOLVENTE EN EL MATRAZ DE EXTRACCION. DESPUES DE CADA ADICION MEZCLAR Y AGITAR EL MATRAZ DE EXTRACCION, SEGUN SE INDICA A CONTINUACION.

AÑADIR 25 ML DE ETER DIETILICO, CERRAR EL APARATO Y AGITAR VIGOROSAMENTE, INVIRTIENDOLO REPETIDAMENTE DURANTE UN MINUTO. ENFRIARLO, SI ES NECESARIO, EN AGUA CORRIENTE. QUITAR EL TAPON CUIDADOSAMENTE Y AÑADIR 25 ML DE ETER DE PETROLEO, EMPLEANDO LOS PRIMEROS ML PARA ENJUAGAR EL TAPON Y LA SUPERFICIE INTERNA DEL CUELLO DEL APARATO, DEJANDO QUE EL LIQUIDO DE LOS ENJUAGUES PENETRE EN EL MISMO. CERRARLO, VOLVIENDO A COLOCAR EL TAPON, AGITAR E INVERTIRLO REPETIDAMENTE DURANTE TREINTA SEGUNDOS; NO DEBE AGITARSE DEMASIADO ENERGICAMENTE. DEJAR EL APARATO EN REPOSO HASTA QUE LA CAPA LIQUIDA SUPERIOR ESTE COMPLETAMENTE LIMPIDA Y CLARAMENTE SEPARADA DE LA CAPA ACUOSA. LA SEPARACION PODRA TAMBIEN EFECTUARSE MEDIANTE EL USO DE UNA CENTRIFUGA ADECUADA (2.6.6). QUITAR EL TAPON Y ENJUAGARLO, ASI COMO TAMBIEN EL INTERIOR DEL APARATO CON ALGUNOS ML DE LA MEZCLA DE LOS DISOLVENTES Y DEJAR QUE LOS LIQUIDOS DE LOS ENJUAGUES PENETREN, EN EL APARATO. TRANSVASAR CUIDADOSAMENTE AL MATRAZ 2.2.3, LO MAS COMPLETAMENTE POSIBLE LA CAPA SUPERIOR POR DECANATACION O CON AYUDA DE UN SIFON (2.6.7). ENJUAGAR EL EXTERIOR Y EL INTERIOR DEL CUELLO DEL APARATO O EL EXTREMO DE LA PARTE INFERIOR DEL SIFON CON UNOS CUANTOS MILILITROS DE LA MEZCLA DE DISOLVENTES. DEJAR QUE LOS LIQUIDOS DE LOS ENJUAGUES DE LA PARTE EXTERIOR DEL APARATO PENETREN EN EL MATRAZ Y QUE LOS LIQUIDOS DE LOS ENJUAGUES DE LA PARTE INTERIOR DEL CUELLO Y DEL SIFON PENETREN EN EL APARATO DE EXTRACCION. HACER UNA SEGUNDA EXTRACCION REPITIENDO EL PROCEDIMIENTO DESCRITO ANTERIORMENTE (DESDE LA ADICION DE 25 ML DE ETER DE PETROLEO), UTILIZANDO SOLAMENTE 15 ML DE ETER DIETILICO Y 15 ML DE ETER DE PETROLEO. HACER UNA TERCERA EXTRACCION, PERO OMITIENDO EL ENJUAGUE FINAL.

EVAPORAR O DESTILAR CUIDADOSAMENTE LA MAYOR CANTIDAD POSIBLE DE DISOLVENTE (INCLUIDO EL ETANOL). SI EL MATRAZ ES DE POCA CAPACIDAD PARTE DEL DISOLVENTE TENDRA QUE ELIMINARSE EN LA FORMA CITADA ANTERIORMENTE, DESPUES DE CADA EXTRACCION. CUANDO HAYA DESAPARECIDO EL OLOR A DISOLVENTE, CALENTAR EL MATRAZ, APOYANDOLO SOBRE UN LADO DURANTE UNA HORA EN LA ESTUFA. DEJAR QUE EL MATRAZ SE ENFRIE A LA TEMPERATURA AMBIENTE DE LA BALANZA Y PESAR CON APROXIMACION DE 0,1 MG. REPETIR LAS OPERACIONES DE CALENTAR EL MATRAZ EN ESTUFA Y PESAR, CALENTANDO A INTERVALOS DE TREINTA A SESENTA MINUTOS, HASTA QUE SE OBTENGA UNA MASA CONSTANTE.

AÑADIR DE 15 A 25 ML DE ETER DE PETROLEO, CON OBJETO DE VERIFICAR SI LA MATERIA EXTRAIDA ES TOTALMENTE SOLUBLE. CALENTAR LIGERAMENTE Y AGITAR EL DISOLVENTE MEDIANTE UN MOVIMIENTO ROTATORIO, HASTA QUE SE HAYA DISUELTO TODA LA GRASA. CUANDO LA MATERIA EXTRAIDA SEA TOTALMENTE SOLUBLE EN EL ETER DE PETROLEO, LA MASA DE GRASA SERA LA DIFERENCIA ENTRE LAS PESADAS DEL MATRAZ 2.2.3 Y DE LA MASA CONSTANTE. EN CASO CONTRARIO EXTRAER COMPLETAMENTE LA GRASA DEL MATRAZ MEDIANTE LAVADOS REPETIDOS CON ETER DE PETROLEO CALIENTE, DEJANDO QUE SE DEPOSITE LA MATERIA NO DISUELTA ANTES DE CADA DECANTACION. ENJUAGAR TRES VECES LA PARTE EXTERIOR DEL CUELLO DEL MATRAZ. CALENTAR EL MATRAZ, APOYANDOLO SOBRE UN LADO, DURANTE UNA HORA EN LA ESTUFA Y DEJAR QUE SE ENFRIE A LA TEMPERATURA AMBIENTE DE LA BALANZA Y PESAR CON APROXIMACION DE 0,1 MG. LA MASA DE GRASA SERA LA DIFERENCIA ENTRE LA MASA OBTENIDA ANTERIORMENTE Y ESTA MASA FINAL.

2.4.3. ENSAYO EN BLANCO.

AL MISMO TIEMPO QUE SE DETERMINA EL CONTENIDO DE GRASA DE LA MUESTRA, EFECTUAR UNA DETERMINACION EN BLANCO CON 10 ML DE AGUA DESTILADA, EMPLEANDO EL MISMO TIPO DE APARATO DE EXTRACCION, LOS MISMOS REACTIVOS EN LAS MISMAS CANTIDADES Y EN EL MISMO PROCEDIMIENTO. SI EL RESULTADO DEL ENSAYO EN BLANCO EXDEDE DE 0,5 MG DEBERAN COMPROBARSE LOS REACTIVOS, Y EL REACTIVO O REACTIVOS IMPUROS DEBERAN PURIFICARSE O SUSTITUIRSE.

2.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

2.6. OBSERVACIONES.

2.6.1. SI NO SE DISPONE DE ETANOL SE PUEDE UTILIZAR ETANOL DESNATURALIZADO CON METANOL, ETILMETILCETONA, BENCENO O ETER DE PETROLEO.

2.6.2. PARA EL ENSAYO DE LOS PEROXIDOS VERTER 10 ML DE ETER EN UNA PEQUEÑA PROBETA TAPADA CON TAPON DE VIDRIO, PREVIAMENTE ENJUAGADA CON ETER, AÑADIR 1 ML DE SOLUCION AL 10 POR 100 DE YODURO DE POTASIO, RECIEN PREPARADA. AGITAR Y DEJAR REPOSAR DURANTE UN MINUTO. NO DEBE APARECER NINGUN COLOR AMARILLO EN NINGUNA DE LAS CAPAS. EL ETER DIETILICO PODRA MANTENERSE EXENTO DE PEROXIDOS, AÑADIENDO UNA LAMINA DE CINC HUMEDA, QUE DEBERA SUMERGIRSE COMPLETAMENTE EN UNA SOLUCION ACIDA DILUIDA DE SULFATO DE COBRE DURANTE UN MINUTO Y DESPUES LAVAR CON AGUA. UTILIZAR POR LITRO UNA SUPERFICIE DE 80 CM CUADRADOS APROXIMADAMENTE DE LAMINA DE CINC, CORTARLA EN BANDAS SUFICIENTEMENTE LARGAS PARA QUE LLEGUEN POR LO MENOS HASTA LA MITAD DEL RECIPIENTE.

2.6.3. LA MEZCLA DE DISOLVENTES PODRA SUSTITUIRSE EN AQUELLOS CASOS EN QUE SU UTILIZACION SE HAYA PREVISTO POR ETER DIETILICO O ETER DE PETROLEO.

2.6.4. SI LA MUESTRA NO SE PUDIERA TRITURAR MEZCLARLA CUIDADOSAMENTE MEDIANTE UN AMASADO INTENSO.

2.6.5. EN CASO DE QUE HAYA QUE RETRASAR INEVITABLEMENTE ESTA OPERACION, TOMAR TODAS LAS PRECAUCIONES NECESARIAS PARA ASEGURAR LA CONSERVACION ADECUADA DE LA MUESTRA E IMPEDIR LA CONDENSACION DE LA HUMEDAD EN LA SUPERFICIE INTERIOR.

2.6.6. CUANDO SE UTILICE UNA CENTRIFUGA QUE NO ESTE PROVISTA DE UN MOTOR TRIFASICO PUEDEN PRODUCIRSE CHISPAS Y ENTONCES HABRA QUE TOMAR LAS DEBIDAS PRECAUCIONES PARA EVITAR EXPLOSIONES O INCENDIOS DEBIDO A LA PRESENCIA DE LOS VAPORES DE ETER, POR EJEMPLO, EN EL CASO DE UNA ROTURA DE UN TUBO.

2.6.7. SI EL TRASVASE NO SE EFECTUA MEDIANTE UN SIFON, QUIZA SEA NECESARIO TENER QUE AÑADIR UN POCO DE AGUA PARA ELEVAR EL PLANO INTERMEDIO ENTRE LAS DOS CAPAS, CON OBJETO DE FACILITAR LA DECANTACION.

2.7. REFERENCIA.

1. CODIGO DE PRINCIPIOS REFERENTE A LA LECHE Y A LOS PRODUCTOS LACTEOS. NORMA B-3. FIL-IDE 5A: 1969.

3. DETERMINACION DEL CONTENIDO DE EXTRACTO SECO

3.1. PRINCIPIO.

EL EXTRACTO SECO DEL QUESO Y DE LOS QUESOS FUNDIDOS ES LA MASA, EXPRESADA EN PROCENTAJE PONDERAL, QUE QUEDA DESPUES DEL PROCESO DE DESECACION.

LA PRECISION DEL METODO ES DE +- 0,1 POR 100.

3.2. MATERIAL Y APARATOS.

3.2.1. BALANZA ANALITICA SENSIBILIDAD 0,1 MG.

3.2.2. DESECADOR PROVISTO DE UN BUEN DESHIDRATANTE (GEL DE SILICE CON INDICADOR HIGROMETRICO O CLORURO DE CALCIO).

3.2.3. ESTUFA DE DESECACION QUE PERMITA OBTENER UNA TEMPERATURA CONSTANTE HASTA 110 GRADOS C.

3.2.4. CAPSULAS DE NIQUEL O DE ALUMINIO DE 2 CM DE ALTURA, APROXIMADAMENTE, Y DE 6 A 8 CM DE DIAMETRO.

3.2.5. ARENA DE CUARZO DE GRANOS GRUESOS O ARENA MARINA PURIFICADA CON ACIDO CLORHIDRICO, LAVADA Y CALCINADA.

3.2.6. AGITADORES DE VIDRIO CON UNA EXTREMIDAD PLANA.

3.3. PROCEDIMIENTO.

COLOCAR 20 G DE ARENA, APROXIMADAMENTE, Y UN AGITADOR DE VIDRIO EN LA CAPSULA DE NIQUEL O DE ALUMINIO. SECAR LA CAPSULA CON LA ARENA Y EL AGITADOR EN LA ESTUFA A 105 GRADOS C, HASTA PESO CONSTANTE. DEJAR ENFRIAR LA CAPSULA EN EL DESECADOR Y PESAR.

COLOCAR RAPIDAMENTE EN LA CAPSULA, APROXIMADAMENTE, 3 G DE LA MUESTRA DE QUESO PREPARADA Y PESAR DE NUEVO.

TRITURAR CUIDADOSAMENTE LA MASA DE QUESO CON LA ARENA CON AYUDA DEL AGITADOR (3,4,1). SECAR LA CAPSULA EN LA ESTUFA DURANTE CUATRO HORAS A 105 GRADOS C. DEJAR ENFRIAR EN EL DESECADOR Y PESAR.

PROSEGUIR EL SECADO HASTA PESO CONSTANTE SEPARANDO CADA PESADA POR UNA PERMANENCIA EN LA ESTUFA DE MEDIA HORA.

3.4. OBSERVACIONES.

3.4.1. PARA LOS QUESOS QUE FUNDAN A LA TEMPERATURA DE 105 GRADOS C EN UNA MASA CORNEA, SE RECOMIENDA GUARDAR PRIMERO LA CAPSULA CON LA MASA DEL QUESO TRITURADO EN EL DESECADOR DURANTE DIECISEIS HORAS, A LA PRESION ATMOSFERICA NORMAL Y A LA TEMPERATURA DEL LABORATORIO. SE REMOVERA DE VEZ EN CUANDO EL CONTENIDO DE LA CAPSULA CON EL AGITADOR, PARA EVITAR LA FORMACION DE COSTRAS.

3.5. REFERENCIAS.

1. FEDERACION INTERNACIONAL DE LECHERIA. NORMA FIL-IDF 4 :1958.

4. DETERMINACION DEL CONTENIDO EN FOSFORO

4.1. PRINCIPIO.

MINERALIZACION DE DETERMINADA CANTIDAD DE MUESTRA CON AYUDA DE ACIDO SULFURICO EN PRESENCIA DE PEROXIDO DE HIDROGENO. EL FOSFATO SE TRATA CON MOLIBDATO DE SODIO Y SULFATO DE HIDRAZINA COMO AGENTE REDUCTOR. EL AZUL DE MOLIBDENO ASI FORMADO SE MIDE POR FOTOMETRIA, CALCULANDOSE EL CONTENIDO EN FOSFORO.

LA PRECISION DEL METODO ES DE 0,04 G DE FOSFORO POR 100 DE PRODUCTO.

4.2. MATERIAL Y APARATOS.

4.2.1. BALANZA ANALITICA.

4.2.2. COLORIMETRO FOTOELECTRICO QUE PERMITA LECTURAS A UNA LONGITUD DE ONDA DE 700 NM.

4.2.3. APARATO APROPIADO PARA TRITURAR LA MUESTRA.

4.2.4. MATRACES ERLENMEYER DE 25 ML.

4.2.5. APARATO DE MINERALIZACION QUE MANTENGA LOS MATRACES ERLENMEYER EN UNA POSICION INCLINADA Y PROVISTO DE UN SISTEMA DE CALENTAMIENTO QUE NO CALIENTE LA PARTE DEL MATRAZ SITUADA POR ENCIMA DE LA SUPERFICIE DEL LIQUIDO.

4.2.6. CUERPOS QUE FACILITEN LA EGULLICION PARA LA MINERALIZACION, TROZOS DE PORCELANA O PERLAS DE VIDRIO.

4.2.7. MATRACES AFORADOS DE 50, 100, 200. 500 Y 1.000 ML.

4.2.8. PIPETAS Y/O BURETAS DE 1, 2. 5. 10. 20 Y 25 ML.

4.3. REACTIVOS.

4.3.1. ACIDO SULFURIO CONCENTRADO (DENSIDAD 1,84 G/ML A 20 GRADOS C).

4.3.2. SOLUCION DE PEROXIDO DE HIDROGENO AL 30 POR 100 (P/V).

4.3.3. REACTIVO DEL MOLIBDATO Y DE SULFATO DE HIDRAZINA.

4.3.3.1. SOLUCION AL 2,5 POR 100 DE MOLIBDATO DE SODIO.-DISOLVER 12.5 G DE MOLIBDATO DE SODIO NA2MOO4 . 2H2O EN ACIDO SULFURICO 10 N, COMPLETANDO HASTA 500 MIL.

4.3.3.2. SOLUCION AL 0,15 POR 100 DE SULFATO DE HIDRZINA. DISOLVER 0,30 G DE H2N NH2 . H2SO4, EN AGUA DESTILADA, COMPLETANDO HASTA 200 ML.

4.3.3.3. INMEDIATAMENTE ANTES DE SU EMPLEO, MEZCLAR 25 ML DE 4.3.3.1 CON 10 ML DE 4.3.3.2. Y DILUIR LA MEZCLA HASTA 100 ML CON SULFATO DE HIDRAZINA. ESTA SOLUCION NO PUEDE CONSERVARSE.

4.3.3.4. SOLUCION NORMALIZADA DE FOSFATO.-DISOLVER 0,4390 G DE FOSFATO ACIDO MONOPOTASICO KH2PO4 EN AGUA DESTILADA HASTA OBTENER UNA SOLUCION DE 1.000 ML. ESTA SOLUCION CONTIENE 100 MICROG DE FOSFORO EN 1 ML. EL FOSFATO DE POTASIO DEBE HABER SIDO SECADO DURANTE CUARENTA Y OCHO HORAS EN PRESENCIA DE UN AGENTE DE DESECACION EFICAZ, POR EJEMPLO, EL ACIDO SULFURICO CONCENTRADO. TODOS LOS REACTIVOS DEBEN SER DE CALIDAD ANALITICA.

4.4. PROCEDIMIENTO.

4.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

ANTES DEL ANALISIS SE QUITARA LA CORTEZA O LA CARA SUPERFICIAL MOHOSA DEL QUESO DE MODO QUE SE OBTENGA UNA MUESTRA REPRESENTATIVA DEL QUESO TAL COMO SE CONSUME HABITUALMENTE. LA MUESTRA SERA TRITURADA A CONTINUACION EN UN TRITURADOR U OTRO APARATO APROPIADO Y MEZCLADA INTIMAMENTE, EVITANDO LAS PERDIDAS POR EVAPORACION.

LA MUESTRA ASI PREPARADA SERA CONSERVADA EN UN RECIPIENTE AL ABRIGO DEL AIRE HASTA SU ANALLISIS, QUE DEBERA EFECTUARSE EL MISMO DIA.

4.4.2. DETERMINACION.

INTRODUCIR SUCESIVAMENTE EN EL MATRAZ ERLENMEYER 0,5 G DE LA MUESTRA, PESADOS CON EXACTITUD DE 1 MG, ALGUNAS PERLAS DE VIDRIO O PEQUEÑOS TROZOS DE PORCELONA Y 4 ML DE ACIDO SULFURICO. CALENTAR CON PRECAUCION EL MATRAZ ERLENMEYER SOBRE EL APARATO DE MINERALIZACION. AL CESAR LA FORMACION DE ESPUMA, ENFRIAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE; AÑADIR CON PRECAUCION ALGUNAS GOTAS DE LA SOLUCION DE PEROXIDO DE HIDROGENO, CALENTAR DE NUEVO Y REPETIR ESTAS OPERACIONES HASTA QUE EL CONTENIDO DEL MATRAZ SE ENCUENTRE LIMPIDO E INCOLORO. DURANTE EL CALENTAMIENTO, MEZCLAR EL CONTENIDO DEL MATRAZ DE TIEMPO EN TIEMPO POR AGITACION. EVITAR LOS RECALENTAMIENTOS LOCALES.

ENJUAGAR EL CUELLO DEL MATRAZ CON UNOS 2 ML DE AGUA DESTILADA Y CALENTAR DE NUEVO HASTA QUE EL AGUA SE HAYA EVAPORADO. DEJAR HERVIR EL LIQUIDO DURANTE UNA MEDIA HORA DESPUES DE LA DECOLORACION, CON EL FIN DE ELIMINAR TODO INDICIO DE PEROXIDO DE HIDROGENO. EVITAR LOS RECALENTAMIENTOS LOCALES.

DESPUES DEL ENFRIAMIENTO A LA TEMPERATURA AMBIENTE, TRASPASAR EL CONTENIDO DEL MATRAZ A UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML; COMPLETAR HASTA EL AFORO CON AGUA DESTILADA Y MEZCLAR.

LLEVAR CON LA PIPETA 1 ML DE SOLUCION A UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML Y DILUIR CON UNOS 25 ML DE AGUA DESTILADA. AÑADIR 20 ML DEL REACTIVO DE MOLIBDATO Y DE SULFATO DE HIDRAZINA, LLENAR EL MATRAZ HASTA EL AFORO CON AGUA DESTILADA Y MEZCLAR. COLOCAR EL MATRAZ EN AGUA HIRVIENDO Y DEJAR QUE SE FORME EL COLOR DURANTE QUINCE MINUTOS.

ENFRIAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE EN AGUA FRIA Y, ANTES DE UNA HORA, MEDIR LA DENSIDAD OPTICA CON RELACION AL ENSAYO EN BLANCO (4.4.4) A UNA LONGITUD DE ONDA DE 700 NM.

4.4.3. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.

DILUIR EN UN MATRAZ AFORADO 10 ML DE LA SOLUCION NORMALIZADA 4.3.4 CON AGUA DESTILADA Y COMPLETAR HASTA 100 ML.

INTRODUCIR EN CINCO MATRACES AFORADOS DE 50 ML, O, 1, 2, 5 Y 10 ML DE LA SOLUCION NORMALIZADA DILUIDA CON EL FIN DE OBTENER UNA SERIE DE SOLUCIONOES TESTIGOS QUE CONTENGAN 0 (VALOR CERO), 10, 20, 50 Y 100 MICROG DE FOSFORO.

AÑADIR AGUA DESTILADA A LOS MATRACES PARA OBTENER UN VOLUMEN APROXIMADO DE 25 ML, AÑADIR 20 ML DEL REACTIVO DE MOLIBDATO Y DE SULFATO DE HIDRAZINA, LLENAR HASTA EL AFORO CON AGUA DESTILADA, MEZCLAR, COLOCAR EL MATRAZ CON AGUA HIRVIENDO Y DEJAR QUE SE FORME EL COLOR DURANTE QUINCE MINUTOS.

ENFRIAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE EN AGUA FRIA Y MEDIR LA DENTIDAD OPTICA DE LOS TESTIGOS CON RESPECTO AL DE VALOR CERO, A UNA LONGITUD DE ONDA 700 NM.

DETERMINAR LA CURVA PATRON SEÑALANDO LAS DIFERENCIAS DE DENSIDAD OPTICA CON RESPECTO A LAS CANTIDADES DE MICROGRAMOS DE FOSFORO.

4.4.4 ENSAYO EN BLANCO.

EFECTUAR UN ENSAYO EN BLANCO SIGUIENDO EL PROCEDIMIENTO EXPRESADO EN 4.4.2, PERO SIN QUESO.

4.5. CALCULO.

CALCULAR EL CONTENIDO EN FOSFORO DE LA MUESTRA POR MEDIO DE LA FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

4.6. REFERENCIA.

1. FEDERACION INTERNACIONAL DE LECHERIA. NORMA FIL-IDF 33A : 1971.

5. DETERMINACION DEL CONTENIDO EN ACIDO CITRICO

5.1. PRINCIPIO.

OBTENCION DE UN FILTRADO CLARO POR DISPERSION DE LA MUESTRA EN AGUA Y CLARIFICACION POR LA ADICION DE ACIDO TRICLOROACETICO. EL FILTRADO SE TRATA CON PIRIDINA Y ANHIDRICO ACETICO Y SE FORMA CON EL ACIDO CITRICO UN COMPUESTO DE COLOR AMARILLO. EL COLOR OBTENIDO SE MIDE POR FOTOMETRIA.

LA PRECISION DEL METODO ES DE 0,1 G DE ACIDO CITRICO ANHIDRO POR 100 G DE PRODUCTO.

5.2. MATERIAL Y APARATOS.

5.2.1. BALANZA ANALITICA, CON PRECISION QUE PERMITA DE 0,001 G.

5.2.2. COLORIMETRO FOTOELECTRICO QUE PERMITA LECTURAS A UNA LONGITUD DE ONDA DE 428 NM.

5.2.3. BAÑO DE AGUA CON CONTROL TERMOSTATICO QUE PERMITA UNA REGULACION A 32.+- 1 GRADO C.

5.2.4. APARATO APROPIADO PARA TRITURAR LA MUESTRA.

5.2.5. TUBOS DE ENSAYO CON TAPONES DE VIDRIO O DE PLASTICO DE 16 O 18 POR 150 MM.

5.2.6. MORTERO Y MANO DE PORCELANA DE UNOS 50 ML.

5.2.7. MATRACES AFORADOS DE 50, 100, Y 1.000 ML.

5.2.8. PIPETAS Y BURETAS DE 1; 1,3; 4; 5,7; 8; 12; 16, Y 20 ML.

5.2.9. EMBUDOS DE VIDRIO DE DIMENSIONES APROPIADAS, POR EJEMPLO, DE 5 CM DE DIAMETRO.

5.2.10. PAPEL DE FILTRO DURO. WHADMAN NUMERO 540, S Y S 5893 O EQUIVALENTE.

5.3. REACTIVOS.

5.3.1. ACIDO TRICLOROACETICO AL 30 POR 100 (P/V).-DISOLVER 300 G DE ACIDO TRICLOROACETICO EN AGUA DESTILADA Y DILUIR HASTA 1.000 ML.

5.3.2. PIRIDINA.

5.3.3. ANHIDRICO ACETICO.

5.3. SOLUCION NORMALIZADA DE CITRATO.-DISOLVER 0,9565 G DE CITRATO TRISODICO (C6H5O7NA3 . 2H2O) EN AGUA DESTILADA Y DILUIR HASTA 1.000 ML.

TODOS LOS REACTIVOS DEBEN SER DE CALIDAD ANALITICA.

5.4. PROCEDIMIENTO.

5.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

ANTES DEL ANALISIS SE QUITARA LA CORTEZA O LA CAPA SUPERFICIAL MOHOSA DEL QUESO DE MODO QUE SE OBTENGA UNA MUESTRA REPRESENTATIVA DEL QUESO TAL COMO SE CONSUME HABITUALMENTE. LA MUESTRA SERA TRITURADA A CONTINUACION CON UN TRITURADOR U OTRO APARATO APROPIADO Y/O MEZCLADA INTIMAMENTE EVITANDO LAS PERDIDAS POR EVAPORACION. LA MUESTRA ASI PREPARADA SERA CONSERVADA EN UN RECIPIENTE AL ABRIGO DEL AIRE HASTA SU ANALISIS, QUE DEBERA EFECTUARSE EL MISMO DIA.

5.4.2. DETERMINACION.

COLOCAR 0,5 G DE LA MUESTRA, PESADA CON PRECISION DE 0,001 G EN UN MORTERO DE PORCELANA. DISPERSAR LA MUESTRA MACHACANDOLA CON LA MANO DEL MORTERO Y AÑADIENDO PEQUEÑAS CANTIDADES DE AGUA CALIENTE (60 GRADOS-70 GRADOS C).

TRANSPASAR EL CONTENIDO DEL MORTERO A UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML, EMPLEANDO UNOS 50 ML DE AGUA. ENFRIAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE.

AÑADIR 4 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO TRICLOROACETICO, MEZCLAR POR AGITACION, LLENAR CON AGUA DESTILADA HASTA EL AFORO Y MEZCLAR DE NUEVO.

DEJAR REPOSAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE DURANTE TREINTA MINUTOS Y FILTRAR SOBRE UN PAPEL DE FILTRO SECO. DESECHAR LA PRIMERA PORCION DEL FILTRADO HASTA QUE SE OBTENGA UN LIQUIDO LIMPIDO; SE DESECHARA AL MENOS 10 ML.

INTRODUCIR CON AYUDA DE UNA PIPETA 1 ML DE FILTRADO CLARO EN UN TUBO DE ENSAYO PROVISTO DE TAPON.

AÑADIR AL TUBO 1,3 ML DE PIRIDINA. MEZCLAR Y AÑADIR INMEDIATAMENTE 5,7 ML DE ANHIDRIDO ACETICO. TAPAR EL TUBO Y MEZCLAR INTIMAMENTE SU CONTENIDO, COLOCANDOLO INMEDIATAMENTE EN UN BAÑO DE AGUA A 32 GRADOS C, DEJANDOLO DURANTE TREINTA MINUTOS.

RETIRAR EL TUBO DEL BAÑO DE MARIA, SECARLO Y MEDIR LA DENSIDAD OPTICA CON RELACION AL ENSAYO EN BLANCO (5.4.4) A UNA LONGITUD DE ONDA DE 428 NM ANTES DE TREINTA MINUTOS.

5.4.3. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.

INTRODUCIR EN SEIS MATRACES DE 50 ML 0, 4, 8, 12, 16 Y 20 ML DE LA SOLUCION NORMALIZADA DE CITRATO (5.3.4); AÑADIR A CADA MATRAZ AGUA DESTILADA HASTA OBTENER UN VOLUMEN APROXIMADO DE 25 ML. AÑADIR 20 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO TRICLOROACETICO (5.3.1); MEZCLAR POR AGITACION, LLENAR HASTA EL AFORO CON AGUA DESTILADA Y MEZCLAR DE NUEVO.

INTRODUCIR CON UNA PIPETA 1 ML DE CADA SOLUCION PATRON DILUIDA EN TUBOS DE ENSAYO PROVISTOS DE TAPON, CON EL FIN DE OBTENER UNA SERIE DE TESTIGOS QUE CONTENGAN 0 (VALOR CERO), 50, 100, 150, 200 Y 250 MICROG DE ACIDO CITRICO ANHIDRO; AÑADIR A CADA TUBO 1,3 ML DE PIRIDINA. MEZCLAR Y AÑADIR INMEDIATAMENTE 5,7 ML DE ANHIDRICO ACETICO. TAPAR EL TUBO Y MEZCLAR INTIMAMENTE SU CONTENIDO. COLOCAR LOS TUBOS SIN DEMORA EN UN BAÑO DE AGUA A 32 GRADOS C DEJANDOLO DURANTE TREINTA MINUTOS.

RETIRAR LOS TUBOS DEL BAÑO DE AGUA, ENFRIAR A TEMPERATURA AMBIENTE, SECARLOS Y MEDIR LA DENSIDAD OPTICA DE LOS TESTIGOS CON RELACION AL VALOR CERO, A UNA LONGITUD DE ONDA DE 428 NM ANTES DE TREINTA MINUTOS.

DETERMINAR LA CURVA PATRON SEÑALANDO LA DIFERENCIA DE DENSIDAD OPTICA CON RELACION A LA CANTIDAD DE ACIDO CITRICO ANHIDRO EN MICROG.

5.4.4. ENSAYO EN BLANCO.

EFECTUAR UN ENSAYO EN BLANCO SIGUIENDO EL PROCEDIMIENTO EXPRESADO ANTERIORMENTE, PERO SIN MUESTRA.

5.5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN ACIDO CITRICO ANHIDRO POR MEDIO DE LA FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

5.6. REFERENCIA.

1. FEDERACION INTERNACIONAL DE LECHERIA. NORMA FIL-IDF 34B 1971.

6. DETERMINACION DEL CONTENIDO EN LACTOSA

6.1. PRINCIPIO.

PREPARACION DE UN FILTRADO CLARO DEL QUESO POR DISPERSION DE LA MUESTRA EN AGUA Y DEFECACION POR FERROCIANURO DE CINC. A UNA PARTE DEL FILTRADO SE LE AÑADE UNA SOLUCION QUE CONTIENE UN COMPLEJO CUPRICO. SE DETERMINA GRAVIMETRICAMENTE EL PRECIPITADO DE OXIDO CUPROSO, FORMADO POR LA ACCION REDUCTORA DE LA LACTOSA Y LOS RESULTADOS OBTENIDOS SE CONVIERTEN, CON LA AYUDA DE TABLAS, EN LACTOSA ANHIDRA O HIDRATADA.

LA PRECISION DEL METODO ES DE 0,15 G DE LACTOSA ANHIDRA POR 100 G DE PRODUCTO.

6.2. MATERIAL Y APARATOS.

6.2.1. BALANZA ANALITICA. SENSIBILIDAD, 0,1 MG.

6.2.2. ESTUFA REGULABLE A 103 GRADOS C +- 2 GRADOS C.

6.2.3. MORTERO DE PORCELANA DE UN CONTENIDO APROXIMADO DE 300 ML, DE UN DIAMETRO INTERIOR DE UNOS 110 MM, CON UNA MANO APROPIADA.

6.2.4. VASO DE PRECIPITADOS DE 400 ML.

6.2.5. CRISOL FILTRANTE DE PORCELANA DE UN CONTENIDO APROXIMADO DE 35 ML Y DE UNA POROSIDAD MEDIA DE 3-15 MICRAS, CUYO PESO NO DEBE VARIAR MAS DE 1,0 MG CUANDO SE LE APLICA EL METODO OPERATORIO DESCRITO MAS ADELANTE, SIN UTILIZAR EL QUESO.

6.2.6. DESECADOR PROVISTO DE UN AGENTE DE DESECACION EFICAZ, COMO EL GEL DE SILICE CON INDICADOR DE HUMEDAD.

6.2.7. MATRAZ AFORADO DE 500 ML.

6.2.8. MATRAZ ERLENMEYER DE 500 ML.

6.2.9. PIPETAS DE 25 Y 100 ML.

6.2.10. PROBETA GRADUADA DE 20 O 25 ML.

6.2.11. EMBUDO DE VIDRIO DE UNOS 150 MM DE DIAMETRO.

6.2.12. VIDRIO DE RELOJ DESTINADO A CUBRIR EL VASO DE PRECIPITADOS DE 400 ML.

6.2.13. VARILLA DE VIDRIO CON PROTECCION DE GOMA EN LA PUNTA.

6.2.14. DISPOSITIVO DE ASPIRACION DE UNA SECCION MEDIA.

6.2.15. MATRAZ DE VACIO CON PORTACRISOL.

6.2.16. FILTRO PLEGADO O FILTRO PLANO DE POROSIDAD MEDIA, DE DIMENSION CORRESPONDIENTE AL EMBUDO 6.2.11.

6.3. REACTIVOS.

6.3.1. SOLUCION DE SULFATO DE CINC.

DISOLVER 30 G DE SULFATO DE CINC CRISTALIZADO (ZN SO4 7H2O) EN AGUA DESTILADA, COMPLETANDO HASTA 100 ML.

6.3.2. SOLUCION DE FERROCIANURO DE POTASIO.

DISOLVER 15 G DE FERROCIANURO DE POTASIO CRISTALIZADO K4FE (CN)6 3H2O EN AGUA DESTILADA COMPLETANDO HASTA 100 ML.

6.3.3. SOLUCION DE SULFATO DE COBRE.

DISOLVER 70 G DE SULFATO DE COBRE (CU SO4 . 5H2O) EN AGUA DESTILADA, COMPLETANDO HASTA 1.000 ML Y FILTRANDO SI ES NECESARIO.

6.3.4. SOLUCION DE TARTRATO ALCALINO.

DISOLVER 350 G DE TARTRATO DE SODIO-POTASIO (KNA C4H4O5 . 4H2O) Y 100 G DE HIDROXIDO SODICO (NAOH) EN AGUA DESTILADA, COMPLETANDO HASTA 1.000 ML. DEJAR REPOSAR DOS DIAS EN UN FRASCO TAPADO Y FILTRAR. LA SOLUCION SE DETERIORARA AL CABO DE UN CIERTO TIEMPO, LO QUE PUEDE FALSEAR EL ENSAYO EN BLANCO (RESULTADOS MAS ELEVADOS).

6.3.5. ACIDO NITRICO DILUIDO: HNO3 AL 15-20 POR 100 EN PESO.

6.3.6 ALCOHOL ETILICO DEL 96 POR 100. PUEDE SER DESNATURALIZADO CON UN DESNATURALIZANTE APROPIADO QUE NO DEJE RESIDUOS DESPUES DE LA EVAPORACION.

LOS REACTIVOS DEBEN SER DE CALIDAD ANALITICA.

6.4. PROCEDIMIENTO.

6.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA PARA EL ENSAYO.

ANTES DEL ANALISIS SE QUITARA LA CORTEZA O CAPA SUPERFICIAL MOHOSA DEL QUESO, A FIN DE OBTENER UNA MUESTRA REPRESENTANTIVA DEL QUESO TAL COMO HABITUALMENTE SE CONSUME. LA MUESTRA SERA TRITURADA A CONTINUACION EN UN TRITURADOR U OTRO APARATO APROPIADO Y MEZCLADA INTIMAMENTE, EVITANDO LAS PERDIDAS POR EVAPORACION. LA MUESTRA ASI PREPARADA SERA CONSERVADA EN UN RECIPIENTE CERRADO HASTA SU ANALISIS, QUE DEBERA EFECTUARSE EL MISMO DIA.

6.4.2. DETERMINACION.

LAVAR EL CRISOL FILTRANTE CON ACIDO NITRICO DILUIDO, ENJUAGARLO PERFECTAMENTE CON AGUA CALIENTE Y DESPUES CON 10 ML DE ALCOHOL. SECAR EL CRISOL A 103 GRADOS C +- 2 GRADOS C DURANTE TREINTA MINUTOS, ENFRIAR EN UN DESECADOR Y PESAR.

COLOCAR, APROXIMADAMENTE, 10 G DE LA MUESTRA, PESADOS EXACTAMENTE, EN UN MORTERO DE PORCELANA. DISPERSAR LA MUESTRA MACHACANDOLA CON LA MANO DEL MORTERO, AÑADIENDO PEQUEÑAS CANTIDADES DE AGUA CALIENTE (60-70 GRADOS C). TRASVASAR EL CONTENIDO DEL MORTERO A UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML. DILUIR EN 400 ML, APROXIMADAMENTE.

AÑADIR 5 ML DE LA SOLUCION DE SULFATO DE CINC, MEZCLANDO SUAVEMENTE POR ROTACION DEL MATRAZ ALREDEDOR DE SU EJE, MANTENIENDOLO INCLINADO. AÑADIR DEL MISMO MODO 5 ML DE LA SOLUCION DE FERROCIANURO DE POTASIO.

ENFRIAR EL CONTENIDO DEL MATRAZ A 20 GRADOS C Y COMPLETAR CON AGUA DESTILADA (A 20 GRADOS C) HASTA EL AFORO. CERRAR EL MATRAZ CON UN TAPON SECO Y MEZCLAR INTIMAMENTE SU CONTENIDO MEDIANTE UNA AGITACION ENERGICA. FILTRAR CON UN PAPEL DE FILTRO SECO, DESECHANDO LOS PRIMEROS ML DE FILTRADO.

TOMAR CON UNA PIPETA 25 ML DE LA SOLUCION DE SULFATO DE COBRE (6.3.3) Y 25 ML DE LA SOLUCION DE TARTRATO ALCALINO (6.3.4) Y LLEVARLO A UN VASO DE PRECIPITADO DE 400 ML. MEZCLAR POR MOVIMIENTO DE ROTACION. CALENTAR LA MUESTRA HASTA EBULLICION. AÑADIR 100 ML DEL FILTRADO DE LA MUESTRA CON AYUDA DE UNA PIPETA. CUBRIR EL VASO CON UN VIDIRO DE RELOJ Y CALENTAR DE NUEVO. DETENER EL CALENTAMIENTO EXACTAMENTE SEIS MINUTOS DESPUES DE ALCANZAR NUEVAMENTE EL PUNTO DE EBULLICION.

PARA ASEGURAR UNA EBULLICION MAS REGULAR Y PARA EVITAR LAS PROYECCIONES DEL LIQUIDO, SE PODRAN AÑADIR PEQUEÑOS TROZOS DE PIEDRA POMEZ TRATADOS PREVIAMENTE DE LA MISMA MANAERA QUE EL CRISOL Y PESADOS CON ESTE ULTIMO.

ENJUAGAR EL VIDRIO DE RELOJ CON UN POCO DE AGUA DESTILADA CALIENTE ENCIMA DEL VASO. TRASVASAR TODO EL CONTENIDO DEL VASO A UN CRISOL FILTRANTE PREPARADO PREVIAMENTE (SEGUN SE INDICA CON ANTERIORIDAD). PARA EFECTUAR ESTE TRASVASE AYUDARSE DE CHORROS DE AGUA DESTILADA CALIENTE Y DE UNA VARILLA DE VIDRIO CON PROTECCION DE GOMA DE LA PUNTA. EL FILTRADO DEBE SER DE COLOR AZUL. SI ES INCOLORO, REPETIR EL ANALISIS UTILIZANDO UNA CANTIDAD MAS PEQUEÑA DE FILTRADO DILUIDA EN 100 ML.

ENJUAGAR CUIDADOSAMENTE EL CRISOL FILTRANTE CON AGUA DESTILADA CALIENTE Y DESPUES CON 10 ML DE ALCOHOL. SECAR EL CRISOL DURANTE TREINTA MINUTOS A 103 GRADOS C +- 2 GRADOS C, ENFRIAR EN UN DESECADOR Y PESAR.

6.4.3. ENSAYO EN BLANCO.

EFECTUAR UN ENSAYO EN BLANCO SIGUIENDO EL PROCEDIMIENTO DESCRITO PERO UTILIZANDO 10 ML DE AGUA DESTILADA EN LUGAR DE 10 G DE QUESO.

6.5. CALCULOS.

CORREGIR LA MASA DE OXIDO CUPROSO ENCONTRADA EN EL ANALISIS DE LA MUESTRA RESTANDOLE EL RESULTADO DEL ENSAYO EN BLANCO. BUSCAR EN LAS TALBLAS LA CANTIDAD DE LACTOSA ANHIDRA O HIDRATADA CORRESPONDIENTE A LA MASA CORREGIDA DE OXIDO CUPROSO.

CALCULAR EL CONTENIDO EN LACTOSA ANHIDRA O HIDRATADA DE LA MUESTRA CON AYUDA DE LA FORMLULA SIGUIENTE:

(FORMULA OMITIDA)

6.6. REFERENCIA.

1. FEDERACION INTERNACIONAL DE LECHERIA. NORMA FIL-IDF 43: 1967.

TABLA PARA DETERMINAR LA CANTIDAD DE LACTOSA (MONHIDRATADA Y ANHIDRA) EN MILIGRAMOS, SEGUN LA CANTIDAD DE OXIDO CUPROSO EN MILIGRAMOS

(TABLA OMITIDA)

LECHE

4. LACTOSA

4.1. PRINCIPIO.

DESPUES DE DESPROTEINIZACION Y FILTRACION DE LA LECHE, LA LACTOSA SE DETERMINA POR VALORACION DE LA CANTIDAD DE HALOGENO REDUCIDO EN EL CURSO DE LA REACCION ENTRE LA LACTOSA Y EL CONJUNTO IODURO DE POTASIO CLORAMINA T.

ESTE METODO ES APLICABLE A LA LECHE NATURAL, NO ALTERADA, ASI COMO A LAS CONSERVADAS POR ADICION DE FORMALDEHIDO (1: 2.500).

EL PROCEDIMIENTO ES EL QUE FIGURA EN EL METODO NUMERO 4 DEL ANEJO III DE LA ORDEN DE 31 DE ENERO DE 1977 ("BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO" DE 14 DE JULIO).

9. SACAROSA

(DETERMINACION POLARIMETRICA EN LA LECHE CONDENSADA)

9.1. PRINCIPIO.

LA DETERMINACION SE BASA EN EL PRINCIPIO DE INVERSION DE CLERGET: MEDIANTE UN TRATAMIENTO SUAVE POR ACIDO SE HIDROLIZA COMPLETAMENTE LA SACAROSA, MIENTRAS LA LACTOSA Y LOS OTROS AZUCARES PRACTICAMENTE NO SE HIDROLIZAN. EL CONTENIDO EN SACAROSA SE DEDUCE DEL CAMBIO DEL PODER ROTATORIO DE LA SOLUCION Y SE EXPRESA EN PORCENTAJE EN PESO.

ESTE METODO ES APLICABLE A LA LECHE CONDENSADA, ENTERA O DESNATADA.

EL PROCEDIMIENTO ES EL QUE FIGURA EN EL METODO NUMERO 9 DEL ANEJO III DE LA ORDEN DE 31 DE ENERO DE 1977 ("BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO" DE 14 DE JULIO).

14 (A) HARINA DE ALFALFA

(METODO COMPARATIVO)

14(A).1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DE HARINA DE ALFALFA EN LECHE DESNATURALIZADA POR COMPARACION VISUAL Y MICROSCOPICA FRENTE A MUESTRAS PATRON.

14(A).2. MATERIAL Y APARATOS.

14(A).2.1. TAMIZ DE 0,25 MM DE LUZ DE MALLA.

14(A).2.2. LUPA PARA 10 A 20 AUMENTOS.

14(A).2.3. MATERIAL NECESARIO PARA OBSERVACION MICROSCOPICA.

14 (A).3. PROCEDIMIENTO.

14(A).3.1. PREPARACION DE LA MUESTRA PATRON DE HARINA DE ALFALFA.

MEZCLAR INTIMAMENTE MUESTRAS DE HARINA DE ALFALFA ADQUIRIDAS EN EL MERCADO, FINAMENTE MOLIDAS.

TAMIZAR LA HARINA OBTENIDA EMPLEANDO EL TAMIZ 14(A).2.1.

SEPARAR LAS DOS FRACCIONES Y MEZCLARLAS EN LA SIGUIENTE PROPORCION: 98 PARTES DE LA FRACCION MAS FINA Y 2 DE LA MAS GRUESA.

DICHA MEZCLA SE CONSIDERA COMO MUESTRA PATRON DE HARINA DE ALFALFA.

14(A).3.2. PREPARACION DE LAS MUESTRAS PATRON DE LECHE EN POLVO-HARINA DE ALFALFA.

MEZCLAR Y HOMOGENEIZAR LECHE CON POLVO SIN DESNATURALIZAR Y LA MUESTRA PATRON DE HARINA DE ALFALFA OBTENIDA, SEGUN LAS SIGUIENTES PROPORCIONES:

(FORMULA OMITIDA)

REALIZAR CON ESTAS MUESTRAS PATRON UNA SERIE DE PREPARACIONES, COLOCANDO EN EL CENTRO DE UN PORTAOBJETOS 0,6 G APROXIMADAMENTE DE CADA UNA DE LAS MUESTRAS. CUBRIR CON OTRO PORTAOBJETOS Y EXTENDER EL POLVO MEDIANTE COMPRESION Y GIRO DE LOS DOS VIDRIOS, HASTA LOGRAR UNA LAMINA CIRCULAR DE UNOS 2 CM DE DIAMETRO. SUJETAR LOS DOS PORTAOBJETOS FIJANDO LOS EXTREMOS CON PAPEL ADHESIVO TRANSPARENTE.

LA COLECCION DE PATRONES ASI OBTENIDA SE CONSERVA PARA ULTERIORES DETERMINACIONES.

14(A).3.3. DETERMINACION DE LA HARINA DE ALFALFA CONTENIDA EN LA MUESTRA DE LECHE EN POLVO A ANALIZAR.

OBTENER UNA PREPARACION EN FORMA ANALOGA A LA ANTERIORMENTE DESCRITA Y COMPARAR CON LAS MUESTRAS PATRON DE LECHE EN POLVO-HARINA DE ALFALFA, SEPARANDO AQUELLAS QUE, A SIMPLE VISTA, SEAN ANALOGAS O MUY PROXIMAS A LA MUESTRA PROBLEMA.

PROCEDER A UNA COMPARACION MICROSCOPICA ENTRE LA MUESTRA A ANALIZAR Y CADA UNA DE LAS MUESTRAS SEPARADAS, EMPLEANDO LUPA DE 10 A 20 AUMENTOS, CONSIDERANDO TANTO EL TAMAÑO COMO LA DENSIDAD DE LAS PARTICULAS QUE APARECEN EN UNA SERIE DE CAMPOS, OBTENIENDO VALORES MEDIOS Y EXPRESANDO LOS RESULTADOS EN PORCENTAJE DE HARINA DE ALFALFA CONTENIDA EN LA LECHE EN POLVO ANALIZADA.

14(A).4. REFERENCIAS.

1. A. LOPEZ, M DEL C. DIAZ-PEÑALVER Y J. GUTIERREZ: "LECHES DESNATURALIZADAS. COMPROBACION DE LA DESNATURALIZACION DE LAS MISMAS".

14 (B).1. PRINCIPIO.

SEPARACION DE LAS PARTICULAS DE ALFALFA POR LAVADO CON AGUA Y POSTERIOR DETERMINACION GRAVIMETRICA.

14(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

14(B).2.1. VASO DE PRECIPITADOS DE 250 ML.

14(B).2.2. TAMIZ DE 0,25 MM DE LUZ DE MALLA.

14(B).2.3. EMBUDO.

14(B).2.4. MATRAZ ERLENMEYER DE 2.000 ML.

14(B).2.5. TROMPA DE VACIO.

14(B).2.6. PLACA FILTRANTE DE VIDRIO DEL NUMERO 1.

14(B).2.7. ESTUFA DE DESECACION.

14(B).3. PROCEDIMIENTO.

PASAR 50 G DE LECHE DESNATURALIZADA EN UN VASO DE PRECIPITADOS DE 250 ML Y ADICIONAR 150 ML DE AGUA. UNA VEZ BIEN IMPREGANADA DE LECHE DESNATURALIZADA, FORMAR UNA PAPILLA FINA POR AGITACION MEDIANTE UNA VARILLA CON EL EXTREMO CURVADO EN FORMA DE U.

AÑADIR A CONTINUACION OTROS 100 ML DE AGUA, AGITAR Y PASAR LA PAPILLA A TRAVES DEL TAMIZ 14(B).2.2. (PREVIAMENTE DESECADO A 100 GRADOS C HASTA PESO CONSTANTE, CON PRECISION DE 0,01 G) COLOCADO SOBRE UN EMBUDO Y ESTE A SU VEZ SOBRE UN MATRAZ ERLENMEYER DE 2.000 ML (FIG.1).

LAVAR EL VASO Y EL TAMIZ AÑADIENDO POCO A POCO AGUA A 40 GRAD. C EN CHORRO FINO, REMOVIENDO LOS PEQUEÑOS GRUMOS CON AYUDA DE LA VARILLA HASTA QUE TODA LA LECHE HAYA SIDO ARRASTRADA POR EL AGUA. SE PRECISAN APROXIMADAMENTE 1,5 LITROS.

DEJAR ESCURRIR EL TAMIZ Y DESECARLO EN ESTUFA A 100 GRADOS C, COLOCADO SOBRE UN PAPEL DE FILTRO.

UNA VEZ DESECADO EL TAMIZ HASTA PESO CONSTANTE, SE PESA CON APROXIMACION DE 0,01 G, RECOGIENDOSE EN EL PREVIAMENTE LAS PARTICULAS QUE PUDIERAN HABER CAIDO EN EL PAPEL DE FILTRO A MEDIDA QUE SE PRODUCIA LA DESECACION DE LA HARINA DE ALFALFA.

SE OBTIENE ASI UN PESO P1.

LAS PARTICULAS DE ALFALFA, A CAUSA DE LA HUMEDAD, SUFREN UN HINCHAMIENTO, POR LO QUE ES NECESARIO TAMIZAR DE NUEVO DESPUES DE LA DESECACION Y DE EXPONER EL TAMIZ A HUMEDAD AMBIENTE DURANTE DOS HORAS, OBTENIENDOSE ASI EL PESO P2 DE LA CANTIDAD RETENIDA POR EL MISMO.

FILTRAR A VACIO LA LECHE RECOGIDA EN EL ERLENMEYER A TRAVES DE LA PLACA FILTRANTE 14(B).2.6, CUYO FONDO Y PAREDES SE HAN RECBIERTO DE ALGODON (FIG.2). ANTES DE INICIARSE LA FILTRACION, PESAR CON APROXIMACION DE 0,01 G, LA PLACA Y EL ALGODON PREVIAMENTE DESECADOS A 100 GRADOS C. LA FILTRACION SE REALIZA A Y AÑADIENDO LA LECHE POCO A POCO SOBRE EL CENTRO DE LA PLACA, CUIDANDO QUE EL VACIO NO SEA DEMASIADO INTENSO PARA EVITAR LA FORMACION DE ESPUMA. LAVAR CON ABUNDANTE AGUA 40 GRADOS C HASTA QUE ESTA PASE COMPLETAMENTE TRANSPARENTE.

DESECAR LA PLACA A 100 GRADOS C HASTA PESO CONSTANTE Y PESAR CON APROXIMACION DE 0,01 G. SE OBTIENE ASI EL PESO DE LAS PARTICULAS DE ALFALFA, P3.

14 (B).4. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

14(B).5. REFERENCIAS. 1. A. LOPEZ, M. DEL C. DIAZ-PEÑALVER Y J. GUTIERREZ: "LECHES DESNATURALIZADAS. COMPROBACION DE LA DESNATURALIZACION DE LAS MISMAS".

15 (A). FENOLFTALEINA EN LECHE DESNATURALIZADA

(METODO CUALITATIVO)

15(A).1. PRINCIPIO.

DETECCION DE FENOLFTALEINA EN LECHE DESNATURALIZADA EN PRESENCIA DE UNA SOLUCION ALCALINA.

15(A).2. MATERIAL Y APARATOS.

TUBOS DE ENSAYO 160/60.

15(A).3. REACTIVOS.

SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO 2 N.

15(A).4. PROCEDIMIENTO.

PONER EN UN TUBO DE ENSAYO 160/60, APROXIMADAMENTE, O,5 G DE LECHE EN POLVO, AÑADIR 10 ML DE AGUA DESTILADA Y AGITAR HASTA LOGRAR UNA EMULSION UNIFORME. AÑADIR 2 ML DE SOLUCION 2 N DE NAOH.

LA PRESENCIA DE FENOLFTALEINA EN LA MUESTRA SE MANIFIESTA POR LA APARICION DE UNA SERIE DE PUNTOS ROJO-ROSADOS QUE SE ENSANCHAN, INTENSIFICANDO SU COLOR HASTA LLEGAR A UN MAXIMO, PARA EMPALIDECER SEGUIDAMENTE Y LLEGAR A DESAPARECER TRANSCURRIDO UN CIERTO TIEMPO.

COMPARAR CON UN PATRON DE LECHE EN POLVO CONTENIENDO FENOLFTALEINA AL 1/20.000.

15(B). FENOLFTALEINA EN YOGUR, GALLETAS Y CHOCOLATE

(METODO CUALITATIVO)

15(B).1. PRINCIPIO.

EXTRACCION Y CONCENTRACION DE LA FENOLFTALEINA PRESENTE EN EL ALIMENTO E IDENTIFICACION POR VIRAJE A COLOR ROJO EN MEDIO ALCALINO QUE DESAPARECE EN MEDIO ACIDO. LA SEPARACION Y CONCENTRACION DE LA FNOLFTALEINA SE REALIZA POR EXTRACCION ETEREA Y SOLUCIONES ALCALINAS.

15(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

15(B).2.1. CENTRIFUGA QUE ALCANCE 3.000 R.P.M.

15(B).2.2. APARATO DE DESTILACION.

15(B).3. REACTIVOS.

15(B).3.1. ETER ETILICO.

15(B).3.2. SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 1 POR 100.

15(B).3.3. ACIDO SULFURICO AL 5 POR 100.

15(B).4. PROCEDIMIENTO.

PESAR 50 G DE LA MUESTRA, REDUCIDA A POLVO, SI ES NECESARIO, Y LLEVAR A UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML DE CAPACIDAD. AÑADIR 50 ML DE ETER ETILICO. AGITAR SUAVEMENTE DURANTE 3 A 5 MINUTOS.

CENTRIFUGAR LA MEZCLA ASI OBTENIDA A 1.500-2.000 R. P. M. DURANTE DIEZ MINUTOS. RECOGER EL LIQUIDO SOBRENADANTE.

VOLVER A EMULSIONAR EL SEDIMENTO CON NUEVA APORTACION DE ETER ETILICO, AGITANDO DURANTE DOS-TRES MINUTOS.

CENTRIFUGAR EN LAS MISMAS CONDICIONES Y RECOGER EL SOBRENADANTE AÑADIENDOLO A LA CENTRIFUGACION ANTERIOR.

REPETIR ESTA OPERACION POR TERCERA VEZ. REUNIR TODAS LAS PORCIONES DE EXTRACTO ETEREO Y DESTILAR PARA ELIMINAR EL ETER, TOMANDO LAS PRECAUCIONES HABITUALES EN ESTE TIPO DE DESTILACION. QUEDA UN RESIDUO GRASO ABUNDANTE.

AÑADIR AL RESIDUO GRASO SOLUCION ACUOSA DE HIDROXIDO SODICO AL 1 POR 100. AGITAR SUAVEMENTE DURANTE 2-3 MINUTOS.

SI ES NECESARIO, CALENTANDO SUAVEMENTE.

CENTRIFUGAR LA EMULSION OBTENIDA A 2.000-3.000 R. P. M. DURANTE CINCO MINUTOS.

ELIMINAR LA CAPA SUPERIOR GRASA Y TOMAR LA FRACCION ACUOSA INFERIOR. CUANDO EL PRODUCTO CONTENGA FENOLFTALEINA, LA CAPA ACUOSA PRESENTA UNA COLORACION ROJA-ROSADA QUE DESAPARECE AL ACIDIFICAR CON ACIDO SULFURICO AL 5 POR 100 Y L VUELVE A REAPARECER SI SE ALCALINIZA EL MEDIO.

16. FECULA

(METODO COMPARATIVO)

16.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DE FECULA EN LECHE DESNATURALIZADA POR COMPARACION CON MUESTRAS PATRON.

16.2. MATERIAL Y APARATOS.

16.2.1. MATRAZ AFORADO DE 100 ML.

16.2.2. PROBETA DE 100 ML.

16.2.3. PIPETA DE 10 ML.

16.3. REACTIVOS.

SOLUCION DE IODO 0,1 N.

16.4. PROCEDIMIENTO.

16.4.1. PREPARACION DEL DESNATURALIZANTE PATRON.

MEZCLAR INTIMAMENTE 80 G DE SALVADO Y 20 G DE FECULA DE LA MISMA NATURALEZA QUE LA QUE SE PRETENDE IDENTIFICAR.

16.4.2. PREPARACION DE PATRONES DE LECHE DESCREMADA EN POLVO Y DESNATURALIZANTE PATRON.

MEZCLAR HACIENDO USO DEL MORTERO, SEGUN LAS SIGUIENTES PROPORCIONES:

(FORMULA OMITIDA)

16.4.3. DETERMINACION DE LA MUESTRA.

PESAR EXACTAMENTE UN GRAMO DE LA MUESTRA CON PRECISION DE 0,01 GRAMOS. PASAR A UN MORTERO Y PREPARAR UNA PAPILLA CON 25 ML DE AGUA HIRVIENTE Y VERTER EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML. LAVAR EL MORTERO CON AGUA CALIENTE REPETIDAS VECES VERTIENDO LOS LIQUIDOS DE LAVADO EN EL MATRAZ HASTA OBTENER UNOS 75 ML AGITAR ENERGICAMENTE Y LLEVAR A UN BAÑO DE MARIA DURANTE DIEZ MINUTOS, AGITANDO DE CUANDO EN CUANDO; ENFRIAR EL MATRAZ AL CHORRO DE AGUA FRIA Y LLEVAR EL CONTENIDO EXACTAMENTE A 100 ML.

TOMAR 10 ML EXACTAMENTE MEDIDOS Y PASAR A UNA PROBETA DE 100 ML. AÑADIR 80 ML DE AGUA DESTILADA, 1 ML DE SOLUCION I2 0,1 N, COMPLETAR HASTA EL ENRASE CON AGUA DESTILADA; AGITAR ENERGICAMENTE.

VERIFICAR EL MISMO METODO CON LOS TRES PATRONES PREPARADOS. EL COLOR DESARROLLADO EN LA MUESTRA SE COMPARA A LOS CINCO MINUTOS CON EL DE LOS TRES PATRONES.

17. SALVADO

17.1. PRINCIPIO.

SEPARACION POR TAMIZADO DEL SALVADO Y DETERMINACION GRAVIMETRICA.

17.2. MATERIAL Y APARATOS.

17.2.1. TAMIZ DE 0,210 MM DE LUZ DE MALLA.

17.2.2. TAMIZ DE 0,074 MM DE LUZ DE MALLA.

17.2.3. ESTUFA DE DESECACION.

17.3. PROCEDIMIENTO.

PESAR CON PRECISION DE 0,01 G, 20 G DE LECHE Y TAMIZARLA EXHAUSTIVAMENTE A TRAVES DEL TAMIZ 17.2.1 ESTANDAR. RECOGER CUIDADOSAMENTE LA FRACCION DE SALVADO RETENIDA POR EL TAMIZ Y PESAR.

A CONTINUACION, EMPASTAR CON AGUA LA PARTE TAMIZADA, DESHACIENDO TODOS LOS GRUMOS QUE PUEDAN FORMARSE CON AYUDA DE UNA VARILLA DE VIDRIO CON EL EXTREMO CURVADO EN FORMA DE U Y DILUIR CON AGUA HASTA COMPLETAR UNOS 300 ML.

VERTER LA EMULSION SOBRE EL TAMIZ 17.2.2, PREVIAMENTE DESECADO A 100 GRADOS C HASTA PESO CONSTANTE; LAVAR REPETIDAMENTE EL RESIDUO QUE PERMANECE EN EL TAMIZ HASTA QUE LAS AGUAS DE LAVADO PASEN TRANSPARENTES E INCOLORAS. DESECAR EL TAMIZ EN UNA ESTUFA A 100 GRADOS C HASTA PESO CONSTANTE.

17.4. CALCULOS.

EL CONTENIDO EN SALVADO EN 100 GRAMOS DE LA MUESTRA VIENE DADO POR:

(FORMULA OMITIDA)

17.5. OBSERVACIONES.

17.5.1. SE ESTIMA QUE LA PERDIDA QUE SUFRE EL SALVADO POR LAVADO Y DESECACION ES DEL 30 POR 100.

18. FECULA + SALVADO

18.1. PRINCIPIO.

SEPARACION POR CENTRIFUGACION DE LA FECULA Y DEL SALVADO Y DETERMINACION GRAVIMETRICA.

18.2. MATERIAL Y APARATOS.

18.2.1. CENTRIFUGA DE 3.000 R. P. M.

18.2.2. ESTUFA DE DESECACION AL VACIO.

18.3. REACTIVOS.

SOLUCION YODO-YODURADA. MEZCLAR 1 G DE IODO Y 2 G DE IODURO POTASICO EN AGUA DESTILADA HASTA 200 ML. MANTENER LA SOLUCION EN EL FRASCO CUENTAGOTAS.

18.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR CON APROXIMACION DE 0,001 G, 0,5 G DE LA MUESTRA DE LECHE A ANALIZAR Y COLOCARLA EN UN TUBO DE CENTRIFUGA PREVIAMENTE PESADO CON IGUAL EXACTITUD. AÑADIR 10 ML DE AGUA DESTILADA FRIA Y AGITAR CON UNA VARILLA DE VIDRIO HASTA DISOLUCION DE LA LECHE. A CONTINUACION, CENTRIFUGAR A 3.000 R. P. M.

DECANTAR LA EMULSION SOBRENADANTE Y AÑADIR 10 ML DE AGUA DESTILADA FRIA AL RESIDUO INSOLUBLE; AGITAR DE NUEVO CON UNA VARILLA, CENTRIFUGAR OTROS QUINCE MINUTOS A IDENTICAS REVOLUCINES Y DECANTAR. REPETIR ESTAS OPERACIONES AL MENOS CUATRO VECES.

LOS LIQUIDOS OBTENIDOS POR DECANTACION TRAS LA CENTRIFUGACION NO DEBEN DAR COLORACION AZUL CON SOLUCION YODO-YODURADA.

DESECAR A 80 GRADOS C EN ESTUFA DE VACIO EL RESIDUO FINAL CONTENIDO EN EL TUBO DE CENTRIFUGA, HASTA PESO CONSTANTE. EL PESO DEL RESIDUO REPRESENTARA EL PESO TOTAL DEL DESNATURALIZANTE CONTENIDO EN 0,5 G DE LA LECHE DESNATURALIZADA.

18.5. CALCULO.

EL SALVADO CONTIENE UNA HUMEDAD MEDIA QUE PUEDE CIFRARSE EN UN 10 POR 100; POR ELLO, EL PESO DEL RESIDUO CENTRIFUGADO DEBE INCREMENTARSE EN LA HUMEDAD CORRESPONDIENTE AL SALVADO CONTENIDO EN 0,5 G DE LECHE, QUE EN UN PRODUCTO CORRECTAMENTE DESNATURALIZADO AL 20 POR 100 SERA 0,008 G.

EL PESO DEL DESNATURALIZANTE TOTAL SERA:

(FORMULA OMITIDA)

ANEJO VII

METODOS DE ANALISIS DE PIENSOS

1. UREA

1.1. PRINCIPIO.

LA UREA SE DETERMINA GRAVIMETRICAMENTE POR PRECIPITACION CON XANTIHIDROL. ESTE METODO ES APLICABLE A PRODUCTOS LACTEOS.

1.2. MATERIAL Y APARATOS.

1.2.1. MATRAZ AFORADO DE 100 ML DE CAPACIDAD.

1.2.2. BAÑO DE AGUA.

1.2.3. CRISOL DE FONDO POROSO.

1.2.4. ESTUFA DE DESECACION, REGULABLE A 105 GRADOS C.

1.2.5. BALANZA DE PRECISION.

1.3. REACTIVOS.

1.3.1. ALCOHOL DE 96.

1.3.2. ACIDO ACETICO GLACIAL.

1.3.3. SOLUCION DE XANTHIDROL.

1.3.4. ALCOHOL DE 96. SATURADO DE DIXANTIL-UREA.

AÑADIR POR CADA GRAMO DE UREA 6,60 G DE XANTHIDROL, ES DECIR, 66 ML DE XANTHDROL AL 10 POR 100 EN METANOL, FORMANDOSE UN PRECIPITADO DE DIXANTIL-UREA. FILTRAR POR CRISOL FILTRANTE, QUEDANDO RETENIDO EL PRECIPITADO. PASAR POR EL MISMO CRISOL ALCOHOL DE 96 GRADOS CON LO QUE SE OBTIENE EL ALCOHOL DE 96 GRADOS SATURADO DE DIXANTIL-UREA.

1.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR UNOS 3 G DEL PRODUCTO E INTRODUCIRLO EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML QUE CONTENGA 20 ML DE AGUA DESTILADA Y AGITAR DURANTE UNA HORA. ENRASAR CON ALCOHOL DE 96. Y AGITAR DE NUEVO DURANTE UNOS QUINCE MINUTOS. DEJAR REPOSAR UNAS DOS HORAS Y FILTRAR POR PAPEL DE FILTRO.

PONER 50 ML DE FILTRADO EN UN VASO (25 ML SI SE TRATA DE UN PRODUCTO RICO EN UREA) Y CONCENTRAR AL BAÑO DE AGUA HIRVIENDO HASTA UN VOLUMEN DE UNOS 10 ML. AÑADIR 35 ML DE ACIDO ACETICO GLACIAL Y 2 ML DE SOLUCION RECIENTEMENTE PREPARADA DE XANTHIDROL AL 10 POR 100 DE METANOL, REPITIENDO LA ADICION OTRAS CUATRO VECES A INTERVALOS DE CINCO A DIEZ MINUTOS. DEJAR REPOSAR DURANTE UNA HORA, COMO MINIMO, Y FILTRAR EL PRECIPITADO FORMADO A TRAVES DE UN CRISOL DE FONDO POROSO PREVIAMENTE TARADO.

LAVAR TRES VECES EMPLEANDO CADA VEZ 5 ML DE ALCOHOL DE 96. SATURADO DE DIXANTIL-UREA, DESECAR EN ESTUFA A 105 GRADOS C HASTA PESO CONSTANTE Y PESAR.

1.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

2. ALCALOIDES EN ALTRAMUCES

2.1. PRINCIPIO.

LOS ALCALOIDES SON PUESTOS EN SOLUCION EN UNA MEZCLA DE ETER DIETILICO Y DE CLOROFORMO, EXTRAYENDOSE POR ACIDO CLORHIDRICO. LOS ALCALOIDES SON PRECIPITADOS JPOR EL ACIDO SILICO-TUNGSTICO INCINERADOS Y PESADOS.

2.2. MATERIAL Y APARATOS.

2.2.1. AGITADOR MECANICO.

2.2.2. CAPSULA DE INCINERACION DE PLATINO, CUARZO O PORCELANA.

2.2.3. HORNO DE MUFLA ELECTRICO.

2.3. REACTIVOS.

2.3.1. ETER DIETILICO.

2.3.2. CLOROFORMO.

2.3.3. SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO 4 N.

2.3.4. ACIDO CLORHIDRICO 0,3 N.

2.3.5. CLORURUO SODICO.

2.3.6. SOLUCION AL 10 POR 100 (P/V) DE ACIDO SILICO-TUNGSTICO SIO212WO3 . 26H2O.

2.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR, CON APROXIMACION DE 5 MG, 15 G DE LA MUESTRA E INTRODUCIRLA EN UN RECIPITENTE DE UNOS 200 ML PROVISTO DE TAPON ESMERILADO. AÑADIR 100 ML DE ETER DIETILICO Y 50 ML DE CLOROFORMO EXACTAMENTE MEDIDOS E INMEDIATAMENTE Y CON LA AYUDA DE UNA BURETA GRADUADA, 10 ML DE LA SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO. AGITAR VIGOROSAMENTE AL PRINCIPIO PARA EVITAR LA FORMACION DE GRUMOS, CONTINUANDO LA AGITACION A INTERVALOS; DEJAR REPOSAR HASTA EL DIA SIGUIENTE. SI EL LIQUIDO SOBRENADANTE NO ESTA TOTALMENTE LIMPIO, AÑADIR ALGUNAS GOTAS DE AGUA; FILTRAR LA CAPA DE ETER CLOROFORMO. RECOGER 50 ML DE FILTRADO EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML Y TRASPASARLOS CUANTITATIVAMENTE CON LA AYUDA DE 50 ML. DE ETER DIETILICO A UNA AMPOLLA DE DECANTACION DE 150 ML. EXTRAER TRES VECES SUCESIVAS CON 20 ML DE ACIDO CLORHIDRICO, DEJAR DECANTAR Y RECOGER EL EXTRACTO ACIDO DESPUES DE CADA EXTRACION. REUNIR LOS EXTRACTOS ACIDOS EN UN MATRAZ DE 250 ML Y ELIMINAR LAS ULTIMAS TRAZAS DE ETER Y DEL CLOROFORMO CALENTANDO LIGERAMENTE. AÑADIR ALREDEDOR DE 1 G DE CLORURO DE SODIO, DEJAR ENFRIAR Y PRECIPITAR LOS ALCALOIDES MEDIANTE LA SOLUCION DEL ACIDO SILICO-TUNGSTICO (2.6.1.). AGITAR MECANICAMENTE DURANTE TREINTA MINUTOS, DEJAR REPOSAR DURANTE UNA NOCHE, FILTRAR SOBRE FILTRO DE CENIZAS CONOCIDAS Y LAVAR EL PRECIPITADO SUCESIVAMENTE POR DOS VECES CON 10 ML Y DOS VECES CON 5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO.

SITUAR EL FILTRO QUE CONTIENE EL PRECIPITADO EN UNA CAPSULA DE INCINERACION E INCINERAR A 900 GRADOS C. DEJAR ENFRIAR Y PESAR.

2.5. CALCULOS.

% ALCALOIDES = 0,2 P

SIENDO:

P = PESO DE LAS CENIZAS.

EXPRESAR LOS RESULTADOS EN PORCENTAJE DE LA MUESTRA.

2.6. OBSERVACIONES.

2.6.1. AÑADIR SOLUCION SILICO-TUNGSTICA HASTA QUE SE VEA QUE NO SE FORMA MAS PRECIPITADO BLANCO LECHOSO DE ALCALOIDE.

2.7. REFERENCIAS.

1. JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO 155/36.

3. PROTEINA TOTAL

(PROTEINA BRUTA)

3.1. PRINCIPIO.

MINERALIZAR LA MUESTRA POR VIA HUMEDA Y ALCALINIZAR POR MEDIO DE SOLUCION DE HIDRIXIDO SODICO. EL AMONIACO LIBERADO ES ARRASTRADO POR DESTILACION Y RECOGIDO EN UNA CANTIDAD DETERMINADA DE ACIDO SULFURICO, VALORANDO EL EXCESO CON SOLUCION DE HIDRIXIDO SODICO.

3.2. MATERIAL Y APARATOS.

3.2.1. MINERALIZADOR Y DESTILADOR KJELDAHL.

3.3. REACTIVOS.

3.3.1. SULFATO DE POTASIO.

3.3.2. CATALIZADOR.- OXIDO DE COBRE (CUO) O SULFATO DE COBRE CRISTALIZADO (SO4CU . 5H2O).

3.3.3. CINC GRANULADO.

3.3.4. ACIDO SULFURICO D = 1,84.

3.3.5. ACIDO SULFURICO 0,1 N.

3.3.6. ACIDO SULFURICO 0,5 N.

3.3.7. INDICADOR DE FENOLFTALEINA.- DISOLVER 100 MG DE FENOLFTALEINA EN 100 ML DE ETANOL DEL 70 POR 100 (V/V).

3.3.8. ROJO DE METILO.- DISOLVER 300 MG DE ROJO DE METILO EN 100 ML DE ETANOL DEL 95-96 POR 100 (V/V).

3.3.9. SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 30 POR 100 (V/P).

3.3.10. SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO 0,1 N.

3.3.11. SOLUCION DE HIDRIXIDO SODICO 0,25 N.

3.3.12. SOLUCION SATURADA DE SULFURO SODICO.

3.3.13. SOLUCION DE SULFURO POTASICO AL 4 POR 100 (P/V).

3.3.14. SOLUCION DE TIOSULFATO SODICO AL 8 POR 100 (P/V).

3.3.15. PIEDRA POMEZ EN GRANOS, LAVADA CON ACIDO CLORHIDRICO Y CALCINADA. 3.4. PROCEDIMIENTO.

3.4.1. MINERALIZACION.- PESAR CON PRECISION DE 1 MG, APROXIMADAMENTE, 1 DE MUESTRA E INTRODUCIRLA EN EL MATRAZ DE MINERALIZACION. AÑADIR 10 A 15 G DE SULFATO POTASICO, 0,3 A 0,4 G DE CATALIZADOR OXIDO DE COBRE, 0,9 A 1,2 G DE SULFGATO CUPRICO, 25 ML DE ACIDO SULFURICO Y ALGUNOS GRANULOS DE PIEDRA POMEZ. HOMOGENEIZAR. CALENTAR EL MATRAZ INICIALMENTE CON MODERACION, AGITANDO DE VEZ EN CUANDO HASTA CARBONIZACION DE LA MASA Y DESAPARICION DE ESPUMA; CALENTAR MAS INTENSAMENTE HASTA EBULLICION EVITANDO EL SOBRECALENTAMIENTO Y ADHERENCIA DE PARTICULAS ORGANICAS.

CUANDO LA SOLUCION APARECE TRANSPARENTE E INCOLORA (VERDE CLARO EN PRESENCIA DE CATALIZADOR A BASE DE COBRE), MANTENER LA EBULLICION UNA HORA DEJANDO ENFRIAR A CONTINUACION.

3.4.2. DESTILACION.- AÑADIR CON PRECAUCION Y AGITANDO 250 A 350 ML DE AGUA, COMPROBANDO QUE LOS SULFATOS ESTAN DISUELTOS TOTALMENMTE. DEJAR ENFRIAR, AÑADIR ALGUNOS GRANULOS DE CINC Y ALGUNAS GOTAXS DE INDICADOR DE FENOLFTALEINA.

INTRODUCIR EN EL MATRAZ COLECTOR DEL APARATO DEDESTILAR 25 ML, EXACTAMENTE MEDIDOS, DE ACIDO SULFURICO 0,1 N O 0,5 N, SEGUN QUE EL PRODUCTO SEA POBRE O RICO EN MATERIAS NITROGENADAS, Y ALGUNAS GOTAS DEL INDICADOR ROJO DE METILO.

UNIR EL MATRAZ AL REFRIGERANTE DEL APARATO DE DESTILAR, SUMERGIENDO LA PARTE EXTREMA DE ESTE EN EL LIQUIDO DEL MATRAZ COLECTOR, POR LO MENOS, 1 CM.

INTRODUCIR LENTAMENTE EN EL MATRAZ, POR MEDIO DE UN EMBUDO CON LLAVE, 120 ML DE SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 30 POR 100, O MAS CANTIDAD SI FUERA NECESARIO, DEBIENDOSE MANTENER LA COLORACION ROJA HASTA EL FIN DE LA DESTILACION.

CALENTAR EL MATRAZ DE TAL MANERA QUE SE DESTILE 150 ML DE LIQUIDO EN TREINTA MINUTOS. DESPUES DE ESTE TIEMPO, COMPROBAR LA NEUTRALIDAD DEL DESTILADO POR MEDIO DEL PAPEL TORNASOL. SI LA REACCION ES ALCALINA, CONTINUAR CON LA DESTILACION HASTA QUE EL PAPEL DE TORNASOL INDIQUE NEUTRALIDAD EN LA SOLUCION. AL FINAL DE LA DESTILACION, OBSERVAR DE VEZ EN CUANDO LA COLORACION DE LA SOLUCION EN EL COLECTOR. SI VIRA A AMARILLO, AÑADIR INMEDIANTEMENTE UN VOLUMEN EXACTAMENTE MEDIDO DE ACIDO SULFURICO 0,1 N O 0,5 N.

3.4.3. VALORACION.- VALORAR EN EL MATRAZ COLECTOR EL EXCESO DE ACIDO SULFURICO CON LA SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO 0,1 N O 0,25 N, SEGUN LA NORMALIDAD DEL ACIDO SULFURICO UTILIZADO HASTA QUE LA SOLUCION VIRE AL AMARILLO CLARO.

3.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

3.6. OBSERVACIONES.

3.6.1. PARA PRODUCTOS POBRES EN MATERIAS NITROGENADAS, INTRODUCIR EN EL MATRAZ COLECTOR 25 ML DE ACIDO SULFURICO 0,1 N. ESTE VOLUMEN PUEDE SER REDUCIDO, SI ES NECESARIO, A 10 O 15 ML Y COMPLETAR A 25 ML CON AGUA DESTILADA.

3.6.2. PARA LOS PRODUCTOS RICOS EN MATERIAS NITROGENADAS, TALES COMO LAS HARINAS DE CARNE O DE PESCADO, UTILIZAR 25 ML DE ACIDO SULFURICO 0,5 N.

3.7. REFERENCIAS.

1. JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO L 123/9.

4(A). GRASA BRUTA

(SIN HIDROLISIS PREVIA)

4(A). 1. PRINCIPIO.

EXTRACCION POR ETER DIETILICO DE LAS MATERIAS GRASAS.

APLICABLE A TODOS LOS PIENSOS EXCEPTO LOS QUE FIGURA EN 4(B).1.

4(A)2. MATERIAL Y APARATOS.

4(A).2.1. EXTRACTOR TIPO SOXHLET O EQUIVALENTE.

4(A).2.2. APARATO DE CALEFACCION CON TEMPERATURA REGULABLE, ANTIDEFLAGRANTE.

4(A).2.3. ESTUFA DE DESECACION A VACIO (MENOS DE 100 TORR) (1 TORR = 1 MM HG = 1/760 ATM).

4(A) 3. REACTIVOS.

4(A) 3.1. ETER DIETILICO ANHIDRO D = 0,720 P.E. = 34,5 GRADOS C, EXENTO DE PEROXIDOS (4(A).6.1).

4(A).3.2. SULFATO SODICO ANHIDRO.

4(A).3.3. TETRACLORURO DE CARBONO.

4(A). 4. PROCEDIMIENTO.

4(A).4.1. PESAR CON PRECISION DE 1 MG, APROXIMADAMENTE, 5 G DE LA MUESTRA Y MEZCLAR CON 2 O 3 G (O MAS, SI ES NECESARIO) DE SULFATO SODICO ANHIDRO. INTRODUCIR LA MEZCLA EN UN CARTUCHO DE EXTRACCION EXENTO DE MATERIAS GRASAS Y RECUBRIMIENTO DE UN TAPON DE ALGODON DESENGRASADO.

PONER EL CARTUCHO EN UN EXTRACTOR Y EXTRAER DURANTE SEIS HORAS CON EL ETER DIETILICO.

REGULAR EL CALOR PARA OBTENER 15 EXTRACCIONES O MENOS A LA HORA. RECOGER EL EXTRACTO ETEREO EN UN MATRAZ SECO, CONTENIENDO ALGUNOS FRAGMENTOS DE PIEDRA POMEZ Y TARAR. REEMPLAZAR LOS FRAGMENTOS DE PIEDRA POMEZ POR PERLAS DE VIDRIO CUANDO LA MATERIA GRASA DEBE SER OBJETO DE ANALISIS CUALITATIVOS POSTERIORES.

ELIMINAR EL ETER POR DESTILACION E INTRODUCIR EL RESIDUO DURANTE UNA HORA Y MEDIA EN LA ESTUFA DE VACIO A TEMPERATURA DE 75 GRADOS C. ENFRIAR EN DESECADOR Y PESAR. PARA COMPROBAR QUE LAS PESADAS DE MATERIA GRASA SON CONSTANTES, VOLVER A INTRODUCIR EN LA ESTUFA DE VACIO DURANTE TREINTA MINUTOS.

4(A).4.2. PARA LOS PRODUCTOS DE CONTENIDO ALTO EN MATERIAS GRASAS. DIFICILES DETRITURAR O NO APROPIADOS PARA TOMAR UNA PORCION DE UNA VEZ POR NO ESTAR HOMOGENEOS, PROCEDER COMO SIGUE: PESAR CON PRECISION DE 1 MG, APROXIMADAMENTE, 20 G DE MUESTRA Y MEZCLAR CON 10 G, O MAS, DE SULFATO SODICO, ANHIDRO. PROCEDER A LA EXTRACCION CON ETER DIETILICO COMO SE INDICA ANTERIORMENTE. REDISOLVER EL EXTRACTO EN TETRACLORURO DE CARBONO Y LLEVARLO A UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML Y HOMOGENEIZAR. TOMAR 50 ML DE LA SOLUCION Y LLEVARLA A UN PEQUEÑO MATRAZ SECO, AÑADIR UNOS TROZOS DE PIEDRA POMEZ Y TARAR. ELIMINAR EL DISOLVENTE POR DESTILACION, SECAR Y PROSEGUIR LA OPERACION COMO SE INDICA ANTERIORMENTE.

4(A).5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

LA DIFERNCIA ENTRE LOS RESULTADOS DE DOS DETERMINACIONES PARALELAS EFECTUADAS SOBE LA MISMA MUESTRA NO DEBE DIFERENCIARSE EN MAS DEL 0,3 POR 100 DE MATERIA GRASA.

4(A).6. OBSERVACIONES.

4(A).6.1. PARA EL ENSAYO DE LOS PEROXIDOS, VERTER 10 ML DE ETER EN UNA PEQUEÑA PROBETA TAPADA CON TAPON DEVIDRIO, PREVIAMENTE ENJUAGADA CON ETER; AÑADIR 1 ML DE SOLUCION AL 10 POR 100 DE YODURO DE POTASIO RECIEN PREPARADA, AGITAR Y DEJAR REPOSAR DURANTE UN MINUTO. NO DEBE APARECER NINGUN COLOR AMARILLO EN NINGUNA DE LAS CAPAS. EL ETER DIETILICO PODRA MANTENERSE EXENTO DE PEROXIDOS AÑADIENDO UNA LAMINA DE CINC HUMEDA, QUE PREVIAMENTE DEBERA SUMERGIRSE COMPLETAMENTE EN UNA SOLUCION ACIDO DILUIDA DE SULFATO DE COBRE DURANTE UN MINUTO Y DESPUES LAVAR CON AGUA. UTILIZAR POR CADA LITRO DE ETER UNA SUPERFICIE DE 80 CM2, APROXIMADAMENTE, DE LAMINA DE CINC, CORTADA EN BANDAS SUFICIENTEMENTE LARGAS PARA QUE LLEGUEN, POR LO MENOS, HASTA LA MITAD DEL RECIPIENTE.

4(A).7. REFERENCIAS.

1. LA JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO L 279/17.

4(B). GRASA BRUTA

(CON HIDROLISIS PREVIA)

4(B).1. PRINCIPIO.

LA MUESTRA ES HIDROLIZADA EN CALIENTE POR ACIDO CLORHIDRICO, ENFRIADA Y FILTRTADA. EL RESIDUO, LAVADO Y SECADO, ES SOMETIDO A LA EXTRACCION POR EL ETER DIETILICO SEGUN EL PROCEDIMIENTO DESCRITO EN 4(A).

APLICABLE A LOS PRODUCTOS CUYAS MATERIAS GRASAS NO PUEDAN SER TOTALEMNTE EXTRAIDAS POR EL ETER DIETILICO SIN HIDROLISIS PREVIA, COMO LOS PRODUCTOS DE ORIGEN ANIMAL, GLUTEN, PULPA SECA DE PATATAS, RESIDUOS DE MALTERIA Y DESTILERIA, LEVADURA SECA, PAN PRODUCTOS DE DESECHO DE PANADERIA, GALLETERIA Y PASTAS ALIMENTICIAS, PRODUCTOS LACTEOS Y PIENSOS ENRIQUECIDOS.

4(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

COMO EN 4(A).2.

4(B).3. REACTIVOS.

4(B).3.1. COMO EN 4(A).3.1.

4(B).3.2. COMO EN 4(A).3.2.

4(B).3.3. ACIDO CLORHIDRICO 3 N.

4(B).3.4. MATERIAL DE FILTRACION (TIERRA DE DIATOMEAS O SIMILAR).

4(B).4. PROCEDIMIENTO.

PESAR CON PRECISION DE 1 ML, APROXIMADAMENTE, 2,5 G DE LA MUESTRA E INTRODUCIRLOS EN UN VASO DE 400 ML O EN UN ERLEMEYER DE 300 ML. AÑADIR 100 ML DE ACIDO CLORHIDRICO 3 N Y ALGUNOS TROZOS DE PIEDRA POMEZ. TAPAR EL VASO CON UN VIDRIO DE RELOJ O ACOPLAR AL ERLENMEYER UN REFRIGERANTE A REFLUJO. LLEVAR LA MEZCLA A EBULLICION SUAVE, CON AYUDA DE UNA LLAMA PEQUEÑA O DE UNA PLACA CALIENTE Y MANTENERLO DURANTE UNA HORA, EVITANDO QUE EL PRODUCTO SE ADHIERA A LAS PAREDES DEL RECIPIENTE.

ENFRIAR Y AÑADIR UNA CANTIDAD DE MATERIAL DE FILTRACION SUFICIENTE PARA EVITAR CUALQUIER PERDIDA D MATERIA GRASA DURANTE LA FILTRACION. FILTRAR SOBRE UN DOBLE PAPEL DE FILTRO MOJADO, EXENTO DE MATERIA GRASA; LAVAR EL RESIDUO CON AGUA FRIA HASTA LA DESAPARICION DE REACCION ACIDA. VERIFICAR QUE EL FILTRADO NO CONTIENE MATERIA GRASA. LA PRESENCIA DE ESTA EN EL FILTRADO INDICA QUE DEBE EFECTUARSE UN EXTRACCION DE LA MUESTRA POR EL ETER DIETILICO SEGUN SE INDICA EN 4(A).4.

LLEVAR EL DOBLE PAPEL DE FILTRO CONTENIENDO EL RESIDUO SOBRE UN VIDRIO DE RELOJ Y SECAR DURANTE UNA HORA Y MEDIA EN LA ESTUFA A TEMPERATURA DE 95-98 GRADOS C.

INTRODUCIR EL DOBLE FILTRO Y EL RESIDUO SECO EN UN CARTUCHO DE EXTRACCION, EXTRAER POR EL ETER DIETILICO Y PROSEGUIR EL MODO OPERATORIO COMO EN 4(A).4.

4.(B).5. CALCULOS.

COMO EN 4(A).5.

4(B).6. REFERENCIAS.

1. JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO 279/17.

5. CLORUROS

5.1. PRINCIPIO.

LOS CLORUROS SE SOLUBILIZAN EN AGUA, DEFECANDOSE LA SOLUCION SI CONTIENE MATERIAS ORGANICAS, POSTERIOR ACIDIFICACION DE LA MISMA CON ACIDO NITRICO Y PRECIPITACION DE LOS CLORUROS CON NITRATO DE PLATA. EL EXCESO DE NITRATO SE VALORA CON UNA SOLUCION DE SULFOCIANURO DE AMONIO. APLICABLE A TODOS LOS PIENSOS.

5.2. MATERIAL Y APARATOS.

5.2.1. AGITADOR DE 35 A 40 R. P. M.

5.3. REACTIVOS.

5.3.1. SOLUCION DE SULFOCIANURO DE AMONIO 0,1 N.

5.3.2. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA 0,1 N.

5.3.3. SOLUCION SATURADA DE SULFATO AMONICO-FERRICO.

5.3.4. ACIDO NITRICO, D = 1,38.

5.3.5. ETER ETILICO.

5.3.6. ACETONA.

5.3.7. SOLUCION DE CARREZ I.- DISOLVER EN AGUA 24 G DE ACETATO DE CINC ZN (CH3COO)2 2H2O Y 3 G DE ACIDO ACETICO GLACIAL. COMPLETAR HASTA 1.000 ML CON AGUA.

5.3.8. SOLUCION DE CARREZ II.- DISOLVER EN AGUA 10,6 G DE FERROCIANURO DE POTASIO K4 (FE (CN6)6) 3H2O. COMPLETAR A 100 ML CON AGUA.

5.3.9. CARBON ACTIVO, EXENTO DE CLORUROS.

5.4. PROCEDIMIENTO.

5.4.1. PREPARACION DE LA SOLUCION.

5.4.1.1. MUESTRAS SIN MATERIA ORGANICA.- PESAR, CON PRECISION DE 1 MG, DE 0 A 10 G DE LA MUESTRA DE FORMA QUE NO CONTENGA MAS DE 3 G DE CLORO EN FORMA DE CLORURO E INTRODUCIRLA EN UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML CON 400 ML DE AGUA A 20 GRADOS C APROXIMADAMENTE. AGITAR DURANTE TREINTA MINUTOS, ENRASAR, HOMOGENEIZAR Y FILTRAR-.

5.4.1.2. MUESTRAS CON MATERIA ORGANICA (MENOS LOS CITADOS EN 5.4.1.3).- PESAR, CON PRECISION DE 1 MG, APROXIMADAMENTE, 5 G DE MUESTRA E INTRODUCIRLA CON 1 G DE CARBON ACTIVO EN UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML. AÑADIR 400 ML DE AGUA A 20 GRADOS C APROXIMADAMENTE Y 5 ML DE SOLUCION DE CARREZ I. AGITAR Y AÑADIR SEGUIDAMENTE 5 ML DE LA SOLUCION DE CARREZ II. AGITAR DURANTE TREINTA MINUTOS, ENRASAR, HOMOGENEIZAR Y FILTRAR.

5.4.1.3. TORTA Y HARINA DE LINO, PRODUCTOS RICOS EN HARINA DE LINO Y OTROS PRODUCTOS RICOS EN MUCILAGOS O EN SUSTANCIAS COLOIDALES (POR EJEMPLO, ALMIDON HIDROLIZADO).- PREPARAR LA SOLUCION COMO SE INDICA EN 5.4.1.2, PERO SIN FILTRAR. DECANTAR (SI ES NECESARIO CENTRIFUGAR), SEPARAR 100 ML DEL LIQUIDO SOBRENADANTE E INTRODUCIRLOS EN UN MATRAZ DE 200 ML. MEZCLAR CON ACETONA Y ENRASAR CON ESTE DISOLVENTE, HOMOGENEIZAR Y FILTRAR.

5.4.2. VALORACION.- TOMAR DE 25 A 100 ML DE FILTRADO (CON CONTENIDO EN CLORO INFERIOR A 150 MG) OBTENIDO EN 5.4.1.1, 5.4.1.2 O 5.4.1.3 E INTRODUCIRLO EN UN ERLENMEYER, DILUIR SI ES NECESARIO, HASTA 50 ML CON AGUA. AÑADIR 5 ML DE ACIDO NITRICO, 20 ML DE SOLUCION SATURADA DE SULFATO AMONICO FERRICO Y DOS GOTAS DE LA SOLUCION DE SULFOCIANURO AMONICO, AÑADIDAS MEDIANTE UNA BURETA LLENA HASTA EL TRAZO DE CERO. AÑADIR SEGUIDAMENTE MEDIANTE UNA BURETA LA SOLUCION DE NITRATO DE PLATA MEDIANTE LA SOLUCION DE SULFOCIANURO AMONICO HASTA QUE EL VIRAJE A ROJO OSCURO PERSISTA DURANTE UN MINUTO.

(FORMULA OMITIDA)

5.6 OBSERVACIONES.

5.6.1. PARA LOS PRODUZTOS RICOS EN MATERIAS GRASAS, DESENGRASAR PREVIAMENTE MEDIANTE ETER ETILICO SEGUN 4 (A).

5.7. REFERENCIAS.

1. JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO L 155/23.

6. HUMEDAD

6.1. PRINCIPIO.

LA MUESTRA SE DESECA EN CONDICIONES DEFINIDAS, VARIANDO EN FUNCION DE LA NATURALEZA DEL PRODUCTO. LA PERDIDA DE MASA ES DETERMINADA POR PESADA. ES NECESARIO PROCEDER A UNA PREDESECACION CUANDO SE TRATA DE SUSTANCIAS SOLIDAS, CON UN CONTENIDO ELEVADO DE HUMEDAD. NO ES APLICABLE A LOS PRODUCTOS DERIVADOS DE LA LECHE CONSIDERADOS COMO PIENSOS SIMPLES, SUSTANCIAS MINERALES, PIENSOS COMPUESTOS CONSTITUIDOS ESENCIALMENTE DE SUSTANCIAS MINERALES Y SEMILLAS Y FRUTOS OLEAGINOSOS. PARA LOS CEREALES Y SUS PRODUCTOS EXCEPTO PRODUCTOS DE CEREALES HIDROLIZADOS Y RAICILLA DE CEBADA (6.3.2.2), SE APLICARA EL METODO OFICIAL PARA CEREALES Y DERIVADOS.

6.2 MATERIAL Y APARATOS.

6.2.1. MOLINO TRITURADOR, FACIL DE LIMPIAR, QUE PERMITA UNA TRITURACION RAPIDA Y UNIFORME, SIN PROVOCAR CALENTAMIENTOS SENSIBLES, NI CONDENSACIONES, EVITANDO AL MAXIMO EL CONTACTO CON EL AIRE.

6.2.2. BALANZA ANALITICA DE PRECISION 0,5 MG.

6.2.3. RECIPIENTES SECOS DE METAL INOXIDABLE O DE VIDRIO, PROVISTOS DE UNA TAPA QUE ASEGURE UN CIERRE ESTANDO; SUPERFICIE UTIL QUE PERMITA OBTENER UNA DISTRIBUCION DE LA MUESTRA DEL ORDEN DE 0,3 G POR CM2.

6.2.4. ESTUFA ISOTERMICA (+- 1 GRADOS C) DE CALEFACCION ELECTRICA, QUE ASEGURE UNA REGULACION RAPIDA DE TEMPERATURA Y CONVENIENTEMENTE VENTILADA.

6.2.5. ESTUFA DE VACIO, DE CALEFACCION ELECTRICA REGULABLE, PROVISTA DE UNA BOMBA DE ACEITE O DE UN DISPOSITIVO DE INTRODUCCION DE AIRE CALIENTE DESHIDRATADO O DE UN DESHIDRATANTE.

6.2.6. DESDECADOR CON PLACA DE METAL O PORCELANA, QUE CONTENGA UN DESHIDRATANTE EFICAZ.

6.3 PROCEDIMIENTO.

6.3.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

6.3.1.1. TODAS LAS MUESTRAS A EXCEPCION DE LAS MENCIONADAS EN 6.3.1.2.

SEPARAR PREVIAMENTE POR LO MENOS 50 G DE LA MUESTRA, TRITURANDOLA O TRATANDOLA PREVIAMENTE DE FORMA APROPIADA, SI FUERA NECESARIO, PARA EVITAR TODA VARIACION DEL CONTENIDO EN HUMEDAD.

6.3.1.2. ALIMENTOS LIQUIDOS O PASTOSOS, CONSTITUIDOS ESENCIALMENTE POR MATERIAS GRASAS.

SEPARAR PREVIAMENTE Y PESAR, CON APROXIMACION DE 10 MG., ALREDEDOR DE 25 G DE MUESTRA. AÑADIR UNA CANTIDAD APROPIADA DE ARENA ANHIDRA, PESADA CON APROXIMACION DE 10 MG Y MEZCLAR HASTA OBTENER UN PRODUCTO HOMOGENEO.

6.3.2. DESECACION.

6.3.2.1. TODOS LOS ALIMENTOS A EXCEPCION DE LOS MENCIONADOS EN 6.3.2.2.

TARAR, CON APROXIMACION DE 0,5 MG, UN RECIPIENTE PROVISTO DE TAPA. PASAR, CON APROXIMACION DE 1 MG, EN EL RECIPIENTE TARADO UNOS 5 G DE MUESTRA Y REPARTIRLA UNIFORMEMENTE. COLOCAR EL RECIPIENTE, SIN TAPA, EN UNA ESTUFA PREVIAMENTE CALENTADA A 103 GRADOS C. PARA EVITAR QUE LA TEMPERATURA DE LA ESTUFA NO DESCIENDA DEMASIADO, INTRODUCIR EL RECIPIENTE CON RAPIDEZ. DEJAR SECAR DURANTE CUATRO HORAS A PARTIR DEL MOMENTO EN QUE LA ESTUFA ALCANCE DE NUEVO LA TEMPERATURA DE 103 GRADOS C. COLOCAR LA TAPA SOBRE EL RECIPIENTE, RETIRARLO DE LA ESTUFA, DEJAR03 GRADOS C. COLOCAR LA TAPA SOBRE EL RECIPIENTE, RETIRARLO DE ENFRIAR DE 30 A 45 MINUTOS EN UN DESECADOR Y PESAR CON APROXIMACION DE 1 MG.

EN EL CASO DE ESTAR CONSTITUIDOS ESENCIALMENTE POR MATERIAS GRASAS, EFECTUAR UNA DESECACION COMPLEMENTARIA DE TREINTA MINUTOS EN LA ESTUFA A 103 GRADOS C. LA DIFERENCIA ENTRE LAS DOS PESADAS NO DEBE EXCEDER DE 0,1 POR 100 DE HUMEDAD.

6.3.2.2. PIENSOS COMPUESTOS QUE CONTENGAN MAS DEL 4 POR 100 DE SACAROSA O DE LACTOSA, PRODUCTOS DE CEREALES HIDROLIZADOS, RAICILLA DE CEBADA, GARROFA, CABEZA DE REMOLACHA, AZUCARES Y SOLUBLES DE PESCADO Y PIENSOS COMPUESTOS QUE CONTENGAN MAS DEL 25 POR 100 DE SALES MINERALES CON AGUA DE CRISTALIZACION.

TARAR, CON UNA APROXIMACION DE 0,5 MG, UN RECIPIENTE CON TAPA. PESAR, CON UNA APROXIMACION DE 1 MG, EN EL RECIPIENTE TARADO APROXIMADAMENTE 5 G DE MUESTRA Y REPARTIRLA UNIFORMEMENTE. COLOCAR EL RECIPIENTE EN LA ESTUFA DE VACIO PREVIAMENTE CALENTADA A UNA TEMPERATURA DE 80 A 85 GRADOS C, SIN TAPA. PARA EVITAR QUE LA TEMPERATURA DE LA ESTUFA DESCIENDA DEMASIADO, INTRODUCIR EL RECIPIENTE CON RAPIDEZ. LLEVAR LA PRESION A 100 TORRS, Y DEJAR SECAR ESTA PRESION DURANTE CUATRO HORAS, BAJO UNA CORRIENTE DE AIRE SECO Y CALIENTE O CON LA AYUDA DE UN DESHIDRATANTE (300 G APROXIMADAMENTE PARA 20 MUESTRAS). EN ESTE ULTIMO CASO, CORTAR LA CONEXION CON LA BOMBA DE VACIO CUANDO LA PRESION PRESCRITA SE ALCANCE. CONTAR EL TIEMPO DE SECADO A PARTIR DEL MOMENTO EN QUE LA ESTUFA ALCANCE DE NUEVO LA TEMPERATURA DE 80 A 85 GRAD. C. LLEVAR CON PRECAUCION LA ESTUFA A LA PRESION ATMOSFERICA.

ABRIR LA ESTUFA, TAPAR INMEDIATAMENTE EL RECIPIENTE Y SACARLO. DEJAR ENFRIAR DURANTE CUARENTA O CUARENTA Y CINCO MINUTOS EN EL DESECADOR Y PESAR CON UNA APROXIMACION DE 1 MG. PROCEDER A UNA DESECACION COMPLEMENTARIA DE 30 MINUTOS EN LA ESTUFA DE VACIO A LA TEMPERATURA DE 80 A 85 GRADOS C Y PESAR DE NUEVO. LA DIFERENCIA ENTRE LAS DOS PESETAS NO DEBE EXCEDER DE 0,1 POR 100 DE HUMEDAD.

6.3.3. PREDESECACION.- LOS ALIMENTOS SOLIDOS, CUYO CONTENIDO EN HUMEDAD SEA ELEVADO Y HAGAN LA MOLIENDA DIFICIL DEBEN SER PREDESECADOS COMO SE INDICA A CONTINUACION.

PESAR CON UNA APROXIMACION DE 10 MG UNOS 50 G DE MUESTRA NO MOLIDA (SI ES NECESARIO PUEDE HACERSE UNA DIVISION PREVIA EN EL CASO DE GRANULOS O AGLOMERADOS) EN UN RECIPIENTE ADECUADO.

DEJAR SECAR EN UNA ESTUFA, A LA TEMPERATURA DE 60 A 70 GRADOS C, HASTA QUE EL CONTENIDO EN HUMEDAD SEA REDUCIDO A UN VALOR COMPRENDIDO ENTRE 8 Y 12 POR 100.

RETIRAR DE LA ESTUFA, DEJAR ENFRIAR AL AIRE EN EL LABORATORIO DURANTE UNA HORA Y PESAR CON UNA APROXIMACION DE 10 MG TRITURAR INMEDIATAMENTE DESPUES COMO SE INDICA EN 6.3.1 Y EFECTUAR LA DESECACION COMO EN 6.3.2.1.

(FORMULA OMITIDA)

6.5. REFERENCIAS

1. JOURNAL OFFICIEL DEL COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO L 279/8.

7. FIBRA BRUTA

7.1. PRINCIPIO.

LA MUESTRA DESENGRASADA SE TRATA SUCESIVAMENTE CON SOLUCIONES DE ACIDO SULFURICO E HIDROXIDO POTASICO DE CONCENTRACIONES PREFIJADAS. SEPARAR EL RESIDUO FILTRANDO SOBRE AMIANTO, LAVAR, SECAR, PESAR Y CALCINAR A 900 GRADOS C. LA PERDIDA DE PESO RESULTANTE DE LA CALCINACION CORRESPONDE A LA FIBRA BRUTA.

7.2. MATERIAL Y APARATOS.

7.2.1. VASOS DE 600 ML DE CAPACIDAD GRADUADOS DE 200 EN 200 ML.

7.2.2. PLACAS FILTRANTES DE PORCELANA DE 80 MM DE 0, CON UN ESPESOR DE UNOS 4 MM, PERFORADAS CON 32 ORIFICIOS DE 4 MM DE 0 O SIMILAR.

7.2.3. MATRACES AFORADOS DE 2 LITROS DE CAPACIDAD CON TAPON DE GOMA MARCADOS CON TRAZO DE REFERENCIA AL NIVEL DE LOS 800 ML, PROVISTOS DE UN EMBUDO DE VIDRIO DE 120 MM 0.

7.2.4. PLACAS FILTRANTES, DE 40 MM 0 Y 1 CM DE ESPESOR DE 4 MM DE BORDE OBLICUO ADAPTADO AL CONO DEL EMBUDO (7.2.3), PERFORADAS CON 16 ORIFICIOS DE UNOS 4MM DE 0 O SIMILAR Y RECUBIERTAS DE UNA REJILLA METALICA DE 1 MM. LAS PLACAS Y LAS REJILLAS METALICAS DEBEN SER INALTERABLES A LOS ACIDOS Y A LOS ALCALIS.

7.2.5. CRISOLES DE PLATINO O CUARZO PARA LA INCINERACION.

7.2.6. HORNO DE MUFLA CON TERMOSTATO. 7.2.7. DESECADOR.

7.2.8. FILTRO DE AMIANTO.-PONER 2 G DE AMIANTO EN SUSPENSION (7.3.2.) EN 100 ML DE AGUA. FILTRAR SOBRE PLACA FILTRANTE RECUBIERTA DE REJILLA METALICA (7.2.4.) Y CLORADA EN EL EMBUDO DEL MATRAZ AFORADO (7.2.3.). RECOGER EL FILTRADO Y FILTRARLO DE NUEVO EN EL MISMO FILTRO. ELIMINAR EL FILTRADO.

7.2.9. ESTUFA.

7.3. REACTIVOS.

7.3.1. ACIDO SULFURICO 0,26 N.

7.3.2. AMIANTO TRATADO.-AÑADIR AL AMIANTO UNAS CINCO VECES SU PESO EN CLH DILUIDO (1 VOL. DE CIH D = 1,19 + 300 VOL. DE AGUA). HERVIR LA MEZCLA DURANTE UNOS CUARENTA Y CINCO MINUTOS, DEJAR ENFRIAR Y FILTRAR. LAVAR EL RESIDUO CON AGUA HASTA AUSENCIA DE ACIDEZ EN EL FILTRADO. LAVAR A CONTINUACION CON LA ACETONA (7.3.6). SECAR EL AMIANTO EN LA ESTUFA Y CALCINAR DESPUES DURANTE DOS HORAS A 900 GRADOS C. DEJAR ENFRIAR EN DESECADOR Y CONSERVAR EN UN FRASCO CERRADO.

00 GRADOS C. DEJAR ENFRIAR EN DESECADOR Y CONSERVAR EN UN FRASCO 7.3.3. EMULSION ANTIESPUMA.

7.3.4. SOLUCION VALORADA DE KOH 0,23 N.

7.3.5. ACIDO CLORHIDRICO 0,5 N.

7.3.6. ACETONA PURA.

7.3.7. ETER DIETILICO PURO.

7.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR, CON APROXIMACION DE 1 MG, 3 G DE MUESTRA Y 2 G DE AMIANTO, TRATADO EN UN VASO DE 600 ML DE CAPACIDAD. AÑADIR 200 MIL DE ACIDO SULFURICO 0,26 N Y UNAS GOTAS DE EMULSION DE ANTIESPUMA. LLEVAR RAPIDAMENTE A EBULLICION Y DEJARLA HERVIR DURANTE TREINTA MINUTOS EXACTOS. PARA MANTENER EL VOLUMEN CONSTANTE, CUBRIR EL VASO CON UN DISPOSITIVO REFRIGERADOR, TAL COMO UN BALCON DE FONDO REDONDO DE 500 ML SOMETIDO A UNA CIRCULACION DE AGUA FRIA. INTERRUMPIR LA EBULLICION AÑADIENDO 50 ML DE AGUA FRIA Y FILTRAR INMEDIATAMENTE EN UN FILTRO DE AMIANTO.

LAVAR EL RESIDUO CON 100 ML DE AGUA CALIENTE, CINCO VECES, PARA OBTENER UN VOLUMEN FINAL DE FILTRADO DE 800 ML. TRANSFERIR CUANTITATIVAMENTE EL RESIDUO EN EL VASO PROVISTO DE UN DISCO DE PORCELANA PARA REGULAR LA EBULLICION. AÑADIR 200 ML DE SOLUCION DE HIDROXIDO POTASICO 0,23 N. LLEVAR RAPIDO A EBULLICION Y DEJAR HERVIR DURANTE TREINTA MINUTOS EXACTOS. AÑADIR 50 ML DE AGUA FRIA Y FILTRAR SOBRE UN FILTRO DE AMIANTO NUEVO PREPARADO SEGUN 7.2.8. LAVAR EL RESIDUO CON AGUA MUY CALIENTE HASTA LA NEUTRALIDAD DE LAS AGUAS DE LAVADO (CON AYUDA DE PAPEL DE TORNASOL). DESHIDRATAR LAVANDO TRES VECES CON ACETONA USANDO UN VOLUMEN TOTAL DE UNOS 100 ML.

TRANSFERIR CUANTITATIVAMENTE EL RESIDUO EN UN CRISOL, DISGREGARLO SI ES NECESARIO, Y SECARLO A 130 GRADOS C HASTA OBTENER UN PESO CONSTANTE.

DEJAR ENFRIAR UN DESECADOR Y PESAR RAPIDO. INTRODUCIR A CONTINUACION EL CRISOL EN EL HORNO DE MUFLA (7.2.6) Y DEJAR CALCINAR DURANTE TREINTA MINUTOS A 900 GRADOS C. DEJAR ENFRIAR EN DESECADOR Y PESAR RAPIDAMENTE.

HACER UN ENSAYO EN BLANCO APLICANDO EL MISMO METODO OPERATIVO CON AMIANTO TRATADO (7.3.2) EN AUSENCIA DE LA MUESTRA. LA PERDIDA DE PESO RESULTANTE DE LA CALCINACION DE LOS 6 G DE AMIANTO NO DEBE SER SUPERIOR A 6 MG.

(FORMULA OMITIDA)

7.6. OBSERVACIONES.

7.6.1. LAS MUESTRAS CONTENIENDO MAS DE UN 10 POR 100 DE MATERIA GRASA DEBEN DESENGRASARASE CON ETER ETILICO ANTES DEL ANALISIS. PARA ELLO COLOCAR LA MUESTRA (3 G +- 1 MG) SOBRE UN FILTRO DE AMIANTO. AÑADIR UNOS 50 ML DE ETER DIETILICO Y FILTRAR CON VACIO. REPETIR LA OPERACION DOS VECES MAS. TRANSFERIR CUANTITATIVAMENTE LA MUESTRA DESENGRASADA Y EL AMIANTO A UN VASO DE 600 ML, CONTINUANDO EL ANALISIS COMO SE HA DESCRITO ANTERIORMENTE.

7.6.2. LAS MUESTRAS CON CONTENIDO EN MATERIAS GRASAS PROTEGIDAS POR RECUBRIMIENTO DEBER SER DESENGRASADAS COMO SE INDICA EN 7.6.1 Y SER SOMETIDAS, ADEMAS, A UN NUEVO DESENGRASADO DESPUES DEL LAVADO DEL RESIDUO PROVENIENTE DEL ATAQUE DEL ACIDO. PARA ESTO LAVAR EL RESIDUO DE ESTE ATAQUE TRES VECES CON ACETONA (EN TOTAL 100 ML), DESPUES TRES VECES CON 50 ML DE ETER DIETILICO. TRANSFERIR A CONTINUACION CUANTITATIVAMENTE EL RESIDUO A UN VASO DE 600 ML Y PROSEGUIR EL ANALISIS COMO SE HA INDICADO ANTERIORMENTE.

7.6.3. EN EL CASO DE MUESTRAS RICAS EN CALCIO (MAS DE 2 POR 100 DE CALCIO) SUSTITUIR EL TRATAMIENTO DE ACIDO SULFURICO POR EL DE ACIDO CLORHIDRICO. PESAR 3 G +- 1 MG DE MUESTRA EN UN VASO Y 2 G DE AMIANTO CALCINADO INTRODUCIENDOLOS EN UN VASO DE 600 ML. AÑADIR 100 MIL DE CLH 0,5 N Y UNAS GOTAS DE EMULSION ANTIESPUMA. DEJAR REPOSAR DURANTE CINCO MINUTOS. PROCEDER A CONTINUACION COMO SE HA INDICADO ANTERIORMENTE.

7.7. REFERENCIAS.

1. JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO L 83/24.

8. AZUCARES

8.1. PRINCIPIO.

ELIMINACION DE TODAS LAS MATERIAS REDUCTORAS DISTINTAS DE LOS AZUCARES, MEDIANTE DEFECACION A PARTIR DE LAS SOLUCIONES DE CARREZ I, II, PREVIA DISOLUCION DE LOS AZUCARES EN ETANOL DILUIDO. ELIMINACION DEL ETANOL Y VALORACION ANTES Y DESPUES DE LA INVERSION SEGUN EL METODO DE LUFF-SCHOORL.

8.2. MATERIAL Y APARATOS.

8.2.1. AGITADOR MECANICO.

8.2.2. METRACES AFORADOS DE 1.000, 300, 200, 100 Y 50 ML.

8.3. REACTIVOS.

8.3.1. ETANOL AL 40 POR 100 (V/V) D: 0,948 A 20 GRADOS C.

8.3.2. SOLUCION DE CARREZ I.-DISOLVER EN AGUA 24 G DE ACETATO DE CINC Y 3 G DE ACIDO ACETICO GLACIAL Y AÑADIR AGUA DESTILADA HASTA 100 ML.

8.3.3. SOLUCION CARREZ II.-DISOLVER EN AGUA 10,6 G DE FERROCIANURO POTASICO K4 (FECN6) 3H2O Y AÑADIR AGUA DESTILADA HASTA 100 ML.

8.3.4. SOLUCION DE ROJO DE METILO AL 0,1 POR 100 (V/V).

8.3.5. ACIDO CLORHIDRICO 4N.

8.3.6. ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N.

8.3.7. SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO 0,1 N.

8.3.8. SOLUCION DE SULFATO DE COBRE.-DISOLVER 25 G DE SULFATO DE COBRE CUSO2 . 5H4O, EXENTO DE HIERRO, EN AGUA Y ENRASAR A 100 ML.

8.3.9. SOLUCION DE ACIDO CITRICO.-DISOLVER 50 GR DE ACIDO CITRICO C6H8O7 . H2O EN 5O ML DE AGUA.

8.3.10. SOLUCION DE CARBONATO SODICO.-DISOLVER 143,8 G DE CARBONATO DE SODIO ANHIDRO EN 300 ML DE AGUA CALIENTE, DEJAR ENFRIAR Y COMPLETAR A 300 ML.

8.3.11. SOLUCION DE TIOSULFATO SODICO 0,1 N.

8.3.12. SOLUCION DE ALMIDON.-AÑADIR UNA MEZCLA DE 5 G DE ALMIDON SOLUBLE EN 30 ML DE AGUA A UN LITRO DE AGUA HIRVIENDO. DEJAR HERVIR DURANTE TRES MINUTOS. DEJAR ENFRIAR. AÑADIR 10 MG DE IODURO MERCURICO COMO AGENTE CONSERVADO.

8.3.13. ACIDO SULFURICO 6N.

8.3.14. SOLUCION DE IODURO POTASICO AL 30 POR 100 (P/V).

8.3.15. PIEDRA POMEZ LAVADA CON ACIDO CLORHIDRICO Y ACLARADA CON AGUA.

8.3.16. ISOPENTANOL.

8.3.17. REACTIVO DE LUFF-SCHOORL.-MEZCLAR AGITANDO LENTAMENTE 50 ML. DE LA SOLUCION 8.3.10. AÑADIR EN SEGUIDA 100 ML DE LA SOLUCION 8.3.8 Y COMPLETAR A UN LITRO DE AGUA. DEJAR REPOSAR DOCE HORAS Y FILTRAR. VERIFICAR LA NORMALIDAD DEL REACTIVO OBTENIDO (CU 0,1 N; NA2CO32N). EL PH DE LA SOLUCION DEBE SER APROXIMADAMENTE 9,4.

8.4. PROCEDIMIENTO.

8.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.-PESAR CON APROXIMACION DE 1 MG, 2,5 G DE LA MUESTRA, E INTRODUCIRLO EN UN MATRAZ ALFORADO DE 250 ML. AÑADIR 200 ML DE ETANOL AL 40 POR 100 (V/V) Y MEZCLAR DURANTE UNA HORA EN EL AGITADOR. AÑADIR 5 ML DE LA SOLUCION CARREZ I Y AGITAR DURANTE UN MINUTO, ADICIONAR Y AGITAR DURANTE EL MISMO TIEMPO CON 5 ML DE LA SOLUCION CARREZ II.

ENRASAR A 250 ML CON LA SOLUCION DE ETANOL (8.3.1), HOMOGENEIZAR Y FILTRAR. TOMAR 200 ML DEL FILTRADO Y EVAPORAR APROXIMADAMENTE HASTA LA MITAD DEL VOLUMEN, A FIN DE ELIMINAR LA MAYOR PARTE DEL ETANOL. TRANSVASAR EN SU TOTALIDAD EL RESIDUO DE EVAPORACION CON AYUDA DE AGUA CALIENTE A UN MATRAZ AFORADO DE 200 ML Y ENFRIAR, A CONTINUACION ENRASAR CON AGUA Y FILTRAR SI ES NECESARIO. ESTA SOLUCION SERA UTILIZADA PARA LA DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES Y DESPUES DE LA INVERSION PARA LA DETERMINACION DE AZUCARES TOTALES.

8.4.2. DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES.-TOMAR COMO MAXIMO, 25 ML DE LA SOLUCION PREPARADA SEGUN 8.4.1 Y QUE CONTENGA MENOS DE 60 MG DE AZUCARES REDUCTORES, EXPRESADO EN GLUCOSA. SI ES NECESARIO, COMPLETAR EL VOLUMEN HASTA 25 ML CON AGUA DESTILADA Y DETERMINAR LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SEGUN LUFF-SCHOORL. EL RESULTADO SERA EXPRESADO EN TANTOS POR CIENTO DE GLUCOSA.

8.4.3. DETERMINACION DE AZUCARES TOTALES PREVIA INVERSION.-TOMAR 50 ML DE LA SOLUCION 8.4.1 Y LLEVAR A UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML. AÑADIR UNAS GOTAS DE LA SOLUCION ROJO DE METILO Y ADICIONAR LENTAMENTE AGITANDO 15 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO 4 N HASTA VIRAJE A ROJO. AÑADIR 15 ML DE ACIDO CLORHIDRICO 0,1 N Y SUMERGIRLO EN UN BAÑO DE AGUA CALIENTE A EBULLICION DURANTE TREINTA MINUTOS. REFRIGERAR HASTA 20 GRADOS C Y AÑADIR A CONTINUACION 15 ML DE LA SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO 0,1 N (8.3.7). ENRASAR A 100 ML CON AGUA Y HOMOGENEIZAR.

DROXIDO SODICO 0,1 N (8.3.7). ENRASAR A 100 ML CON AGUA Y TOMAR UNA CANTIDAD QUE NO EXCEDA DE 25 ML Y CONTENGA MENOS DE 60 MG DE AZUCARES REDUCTORES EXPRESADO EN GLUCOSA. SI ES NECESARIO, COMPLETAR EL VOLUMEN HASTA 25 ML CON AGUA DESTILADA Y DETERMINAR LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES SEGUN LUFF-SCHOORL. EL RESULTADO SERA EXPRESADO EN TANTOS POR CIENTO DE GLUCOSA. DE EXPRESARLO EN SACAROSA, SE DEBE MULTIPLICAR POR EL FACTOR 0,95.

8.4.4. VALORACION DE LUFF-SCHOORL.-TOMAR 25 ML DEL REACTIVO LUFF-SCHOORL (8.3.17) Y LLEVARLO A UN ERLENMEYER DE 300 ML; AÑADIR 25 ML EXACTAMENTE MEDIDOS DE LA SOLUCION DEFECADA DE AZUCARES, ADICIONAR UN POCO DE PIEDRA POMEZ Y CALENTAR AGITANDO SOBRE LA LLAMA DEL MECHERO. COLOCAR INMEDIATAMENTE EL ERLENMEYER SOBRE UNA TELA METALICA, PERFORADA POR UNA ABERTURA DE 6 CM DE DIAMETRO Y REGULANDO LA LLAMA DE MANERA QUE SOLAMENTE EL FONDO DEL ERLENMEYER SEA CALENTADO. ADOPTAR EN SEGUIDA UN REFRIGERANTE DE REFLUJO SOBRE EL ERLENMEYER; A PARTIR DE ESTE MOMENTO, HACER HERVIR LA SOLUCION Y MANTENER EN EBULLICION DURANTE DIEZ MINUTOS EXACTAMENTE. REFRIGERAR INMEDIATAMENTE AL CHORRO DE AGUA FRIA DURANTE CINCO MINUTOS Y PROCEDER A SU VALORACION.

AÑADIR 10 ML DE LA SOLUCION DE IODURO POTASICO (8.3.14) INMEDIATAMENTE DESPUES Y CON CUIDADO 25 ML DE ACIDO SULFURICO 6 N (8.3.13). VALORAR A CONTINUACION MEDIANTE LA SOLUCION DE TIOSULFATO DE SODIO 0,1 N (8.3.9) HASTA LA APARICION DE COLOR AMARILLO; AÑADIR EN ESE MOMENTO LA SOLUCION DE ALMIDON Y TERMINAR DE VALORAR.

EFECTUAR LA MISMA VALORACION SOBRE UNA MEZCLA QUE CONTENGA 25 ML EXACTAMENTE MEDIDOS DEL REACTIVO DE LUFF-SCHOORL, 25 ML DE AGUA, 10 ML DE LA SOLUCION DE IODURO DE POTASIO (8.3.14) Y 25 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO SULFURICO 6 N (8.3.13), SIN LLEGAR A EBULLICION.

8.5. CALCULOS.

ESTABLECER POR MEDIO DE LA TABLA I LA CANTIDAD DE GLUCOSA EN MG CORRESPONDIENTE A LA DIFERENCIA ENTRE LAS DOS VALORACIONES, SEGUN LOS ML DE TIOSULFATO DE SODIO 0,1 N GASTADOS EN CADA UNA DE LAS VALORACIONES.

EXPRESAR LOS RESULTADOS EN TANTO POR CIENTO DE LA MUESTRA.

8.6. OBSERVACIONES.

8.6.1. EN CASO DE ALIMENTOS MUY RICOS EN MELAZAS Y OTROS ALIMENTOS POCO HOMOGENEOS, PESAR 20 G E INTRODUCIRLOS EN UN MATRAZ AFORADO DE UN LITRO DE 500 ML DE AGUA. MEZCLAR DURANTE UNA HORA EN EL AGITADOR. DEFECAR MEDIANTE LOS REACTIVOS DE CARREZ I Y II (8.3.2 Y 8.3.3), COMO SE DESCRIBE EN 8.4.1, UTILIZANDO DE TODOS LOS REACTIVOS DOSIS CUATRO VECES SUPERIORES. LLENAR A 1.000 ML CON ETANOL AL 40 POR 100 (V/V) (8.3). HOMOGENEIZAR Y FILTRAR; A CONTINUACION, ELIMINAR EL ETANOL SEGUN 8.4.1.

EN AUSENCIA DE ALMIDON EXENTO DE PRODUCTOS DE HIDROLIZADO, ENRASAR A 1.000 ML CON AGUA DESTILADA.

8.6.2. EN EL CASO DE MELAZAS Y ALIMENTOS SIMPLES, RICOS EN AZUCARES Y PRACTICAMENTE EXENTOS DE ALMIDON, PESAR 5 G E INTRODUCIRLOS EN UN MATRAZ AFORADO DE 250 ML, AÑADIR 200 ML DE AGUA DESTILADA Y MEZCLAR DURANTE UNA HORA O MAS EN EL AGITADOR. DEFECAR INMEDIATAMENTE POR MEDIO DE LOS REACTIVOS DE CARREZ I Y II (8.3.2 Y 8.3.3), SEGUN 8.4.1.

LLEVAR A 25O ML CON AGUA, HOMOGENEIZAR Y FILTRAR, PARA DETERMINAR LOS AZUCARES TOTALES; PROSEGUIR COMO 8.4.3.

8.6.3. ES RECOMENDABLE AÑADIR, APROXIMADAMENTE, 1 ML DE ISOPENTANOL (SIN TENER EN CUENTA EL VOLUMEN) ANTES DE LA EBULLICION, CON EL REACTIVO LUFF-SCHOORL PARA EVITAR LA FORMACION DE ESPUMA.

8.6.4. LA DIFERENCIA ENTRE LA CANTIDAD DE AZUCARES TOTALES DESPUES DE LA INVERSION, EXPRESADA EN GLUCOSA, Y LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES, EXPRESADA IGUALMENTE EN GLUCOSA, MULTIPLICADA POR 0,95 DA LA CANTIDAD EN TANTO POR CIENTO DE SACAROSA.

8.6.5. PARA CALCULAR LA CANTIDAD DE AZUCARES REDUCTORES, EXCLUYENDO LA LACTOSA, SE PUEDE DETERMINAR DE LAS SIGUIENTES FORMAS:

8.6.5.1. PARA UN CALCULO APROXIMADO, MULTIPLICAR POR 0,675 LA CANTIDAD DE LACTOSA OBTENIDA, POR DETERMINACION SEPARADA, Y RESTAR EL RESULTADO OBTENIDO DE LA CANTIDAD EN AZUCARES REDUCTORES.

8.6.5.2. PARA EL CALCULO PRECISO DE AZUCARES REDUCTORES, EXCLUYENDO LA LACTOSA, ES NECESARIO PARTIR DE LA MISMA MUESTRA (8.4.1) PARA LAS DOS DETERMINACIONES FINALES. UNO DE LOS ANALISIS ES EFECTUADO A PARTIR DE LA SOLUCION OBTENIDA EN 8.4.1 Y EL OTRO SOBRE UNA PARTE DE LA SOLUCION OBTENIDA PARA LA VALORACION DE LA LACTOSA SEGUN EL METODO PARA LA DETERMINACION DE LACTOSA.

EN LOS CASOS 8.6.5.1 Y 8.6.5.2, LA CANTIDAD DE AZUCARES PRESENTES SE DETERMINAN SEGUN EL METODO DE LUFF-SCHOORL, EXPRESADO EN MG DE GLUCOSA.

LA DIFERENCIA ENTRE LOS DOS VALORES SE EXPRESA EN TANTO POR CIENTO DE LA MUESTRA.

8.7. BIBLIOGRAFIA.

1. JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO L 155/32.

(TABLA OMITIDA)

9. ACIDEZ DE LA GRASA

9.1. PRINCIPIO.

LAS MATERIAS GRASAS SON EXTRAIDAS POR ETER DIETILICO Y SUBSIGUIENTE NEUTRALIZACION CON HIDROXIDO SODICO.

9.2. MATERIAL Y APARATOS.

9.2.1. EXTRACTOR TIPO SOXHLET O EQUIVALENTE.

9.2.2. APARATO DE CALEFACCION A TEMPERATURA REGULABLE, ANTIDEFLAGRANTE.

9.2.3. ESTUFA DE DESECACION A VACIO (MENOS DE 100 TORR) (1 TORR = 1MMHG = 1/760 ATM).

9.3. REACTIVOS.

9.3.1. ETER DIETILICO ANHIDRO D = 0,720, P. E., 34,5 GRADOS C, EXENTO DE PEROXIDOS (4(A). 6.1).

9.3.2. SULFATO SODICO, ANHIDRO.

9.3.3. ACIDO CLORHIDRICO 3 N.

9.3.4. MATERIAL DE FILTRACION; POR EJEMPLO, TIERRA DE DIATOMEAS.

9.3.5. TETRACLORURO DE CARBONO.

9.3.6. ALCOHOL ETILICO.

9.3.7. SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO 0,1 N.

9.4. PROCEDIMIENTO.

9.4.1. PESAR, CON APROXIMACION DE 1 MG, 5 G DE LA MUESTRA Y MEZCLAR CON 2 O 3 G (O MAS, SI ES NECESARIO) DE SULFATO SODICO ANHIDRO. INTRODUCIR LA MEZCLA EN UN CARTUCHO DE EXTRACCION EXENTO DE MATERIAS GRASAS Y RECUBIERTO DE UN TAPON DE ALGODON DESENGRASADO.

PONER EL CARTUCHO EN UN EXTRACTOR Y EXTRAER DURANTE SEIS HORAS CON ETER DIETILICO.

REGULAR EL CALOR PARA OBTENER 15 EXTRACCIONES O MENOS A LA HORA. RECOGER EL EXTRACTO ETEREO EN UN MATRAZ SECO, CONTENIENDO ALGUNOS FRAGMENTOS DE PIEDRA POMEZ Y TARAR. REEMPLAZAR LOS FRAGMENTOS DE PIEDRA POMEZ POR PERLAS DE VIDRIO CUANDO LA MATERIA GRASA DEBE SER OBJETO DE ANALISIS CUALITATIVOS POSTERIORES.

ELIMINAR EL ETER POR DESTILACION Y SECAR SEGUIDAMENTE EL RESIDUO A EVAPORACION DURANTE UNA HORA Y MEDIA EN LA ESTUFA DE DESECACION A VACIO A TEMPERATURA DE 75 GRADOS C. ENFRIAR EN DESECADOR Y PESAR. EFECTUAR UNA SEGUNDA DESECACION DURANTE 30 MINUTOS PARA ASEGURAR QUE LAS PESADAS DE MATERIA GRASA SON CONSTANTES (LA DIFERENCIA DE PESADAS DEBE SER INFERIOR A 1 MG).

9.4.2. PARA LOS PRODUCTOS DE CONTENIDO ALTO EN MATERIAS DE GRASAS, DIFICILES DE TRITURAR O NO APROPIADOS PARA TOMAR UNA PORCION DE UNA VEZ POR NO ESTAR HOMOGENEOS, PROCEDER COMO SIGUE. PESAR, CON LA APROXIMACION DE 1 MG, 20 G DE MUESTRA Y MEZCLAR CON 10 G O MAS DE SULFATO SODICO ANHIDRO. PROCEDER A LA EXTRACCION CON ETER DIETILICO COMO SE INDICA ANTERIORMENTE. REDISOLVER EL EXTRACTO EN TETRACLORURO DE CARBONO Y LLEVARLO A UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML Y HOMOGENEIZAR. TOMAR 50 ML DE LA SOLUCION Y LLEVARLA A UN PEQUEÑO MATRAZ SECO, AÑADIR UNOS TROZOS DE PIEDRA POMEZ Y TARAR. ELIMINAR EL DISOLVENTE POR DESTILACION, SECAR Y PROSEGUIR LA OPERACION COMO SE INDICA ANTERIORMENTE. ELIMINAR EL DISOLVENTE DEL RESIDUO DE EXTRACCION QUE SE ENCUENTRA EN EL CARTUCHO Y MOLER EL RESIDUO CON FINURA DE 1 MM. COLOCAR DE NUEVO EL PRODUCTO EN EL CARTUCHO DE EXTRACCION (NO AÑADIR SULFATO SODICO), EXTRAER CON ETER DIETILICO Y PROSEGUIR LA OPERACION COMO SE INDICA ANTERIORMENTE.

DISOLVER EL EXTRACTO ETEREO CON 15 ML DE UNA MEZCLA A VOLUMENES IGUALES DE ETER Y ALCOHOL DE 96. Y VALORAR CON HIDROXIDO SODICO N/10 DE FACTOR CONOCIDO EMPLEANDO FENOLFTALEINA COMO INDICADOR HASTA COLOR ROSA PERSISTENTE. SE HACE UN TESTIGO EN BLANCO PARA RESTARLE LA ACIDEZ DE LA MEZCLA ALCOHOL-ETEREA.

(FORMULA OMITIDA) 9.6. OBSERVACIONES.

9.6.1. PARA EL ENSAYO DE LOS PEROXIDOS VERTER 10 ML DE ETER EN UNA PEQUEÑA PROBETA TAPADA CON TAPON DE VIDRIO, PREVIAMENTE ENJUAGADA CON ETER, AÑADIR 1 ML DE SOLUCION AL 10 POR 100 DE YODURO DE POTASIO, RECIEN PREPARADA. AGITAR Y DEJAR REPOSAR DURANTE UN MINUTO. NO DEBE APARECER NINGUN COLOR AMARILLO EN NINGUNA DE LAS CAPAS. EL ETER DIETILICO PODRA MANTENERSE EXENTO DE PEROXIDOS AÑADIENDO UNA LAMINA DE CINC HUMEDA, QUE DEBERA SUMERGIRSE COMPLETAMENTE EN UNA SOLUCION ACIDA DILUIDA DE SULFATO DE COBRE DURANTE UN MINUTO Y DESPUES LAVAR CON AGUA. UTILIZAR POR LITRO UNA SUPERFICIE DE 80 CM2 APROXIMADAMENTE DE LAMINA DE CINC, CORTADA EN BANDAS SUFICIENTEMENTE LARGAS PARA QUE LLEGUEN POR LO MENOS HASTA LA MITAD DEL RECIPIENTE.

9.6.2. EN HARINAS DE PESCADO EMPLEESE COMO INDICADOR AZUL ALCALINO 6-B DISUELTO AL 0,5 POR 100 EN ETANOL.

10. CALCIO

10.1. PRINCIPIO.

INCINERACION DE LA MUESTRA Y PRECIPITACION DEL CALCIO MEDIANTE ACIDO CLORHIDRICO EN FORMA DE OXALATO CALCICO Y VALORACION DEL ACIDO OXALICO FORMADO CON UNA SOLUCION DE PERMANGANATO POTASICO PREVIA DISOLUCION DEL PRECIPITADO CON ACIDO SULFURICO. APLICABLE A LOS ALIMENTOS DE ANIMALES.

10.2. MATERIAL Y APARATOS.

10.2.1. MATRAZ AFORADO DE 250 ML DE CAPACIDAD.

10.2.2. ERLENMEYER DE 250 ML DE CAPACIDAD.

10.2.3. CRISOL DE PLATINO, CUARZO O PORCELANA.

10.2.4. CRISOLES FILTRANTES DE VIDRIO, POROSIDAD G4.

10.2.5. HORNO ELECTRICO CON CIRCULACION DE AIRE Y REGULADOR AUTOMATICO, PARA REGULAR A 550 GRADOS C.

10.2.6. BAÑO DE AGUA.

10.3. REACTIVOS.

10.3.1. ACIDO CLORHIDRICO D: 1,14.

1O.3.2. ACIDO NITRICO D: 1,40.

10.3.3. ACIDO SULFURICO D: 1,13.

10.3.4. AMONIACO D:0,98.

10.3.5. SOLUCION SATURADA DE OXALATO AMONICO.

10.3.6. SOLUCION AL 30 POR 100 (P/V) DE ACIDO CITRICO.

10.3.7. SOLUCION AL 5 POR 100 (P/V) DE CLORURO DE AMONIO.

10.3.8. SOLUCION AL 0,04 POR 100 (P/V) DE VERDE DE BROMOCRESOL.

10.3.9. SOLUCION DE PERMANGANATO POTASICO: 0,1 N.

10.4. PROCEDIMIENTO.

PESAR, CON APROXIMACION DE 1 MG, 5 G DE LA MUESTRA A ANALIZAR (O MAS SI ES NECESARIO), CALCINARLA A 550 GRADOS C Y TRANSVASAR LAS CENIZAS A UN ERLENMEYER DE 250 ML. AÑADIR 40 ML DE ACIDO CLORHIDRICO (10.3.1), 60 ML DE AGUA Y ALGUNAS GOTAS DE ACIDO NITRICO (10.3.2). LLEVAR A EBULLICION Y MANTENERLO ASI DURANTE TREINTA MINUTOS. ENFRIAR, TRANSVASAR LA SOLUCION A UN MATRAZ AFORADO DE 25O ML, ENJUAGAR EL ERLENMEYER Y COMPLETAR EL VOLUMEN CON AGUA, HOMOGENEIZAR Y FILTRAR.

TOMAR CON UNA PIPETA SEGUN LA CANTIDAD PRESUMIBLE DE CALCIO, UNA ALICUOTA QUE CONTENGA DE 10 A 40 MG DE CALCIO E INTRODUCIRLA EN UN ERLENMEYER DE 25O ML. AÑADIR 1 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO CITRICO (10.3.6) Y 5 ML DE SOLUCION DE CLORURO DE AMONIO (10.3.7). COMPLETAR EL VOLUMEN A 100 ML APROXIMADAMENTE CON AGUA. LLEVAR A EBULLICION, AÑADIENDO DE 8 A 10 GOTAS DE SOLUCION DE VERDE DE BROMOCRESOL (10.3.8) Y 30 ML DE SOLUCION CALIENTE DE OXALATO DE AMONIO (10.3.5). SI APARECE UN PRECIPITADO, DISOLVER ESTE MEDIANTE LA ADICION DE ALGUNAS GOTAS DE ACIDO CLORHIDRICO (10.3.1).

NEUTRALIZAR EN SEGUIDA MUY LENTAMENTE CON AMONIACO (10.3.4), AGITANDO CONSTANTEMENTE, HASTA OBTENER UN PH 4,4-4,6 (VIRAJE DEL INDICADOR). COLOCAR EL ERLENMEYER EN UN BAÑO DE AGUA HIRVIENDO DURANTE TREINTA MINUTOS, DEJANDO REPOSAR EL PRECIPITADO FORMADO. RETIRARLO DEL BAÑO DEJANDO REPOSAR DURANTE UNA HORA SAR Y FILTRAR EN UN CRISOL FILTRANTE (SIMBOLO OMITIDO). LAVAR EL ERLENMEYER Y EL AR CRISOL CON AGUA HASTA LA TOTAL ELIMINACION DEL EXCESO DE OXALATO DE AMONIO (LA AUSENCIA DE CLORUROS EN EL AGUA DE LAVADO INDICA QUE EL LAVADO ES SUFICIENTE).

DISOLVER EL PRECIPITADO SOBRE EL FILTRO CON 50 ML DE ACIDO SULFURICO CALIENTE (10.3.3), ENJUAGAR EL CRISOL CON AGUA CALIENTE HASTA LLEVAR EL FILTRADO A 10 ML APROXIMADAMENTE. CALENTAR A 70-80 GRADOS C Y VALORAR MEDIANTE LA SOLUCION DE PERMANGANATO POTASICO (10.3.9) HASTA LA OBTENCION DE UNA COLORACION ROSA PERSISTENTE DURANTE UN MINUTO.

10.5. CALCULO.

UN ML DE PERMANGANATO POTASICO 0,1 N CORRESPONDE A 2,004 MG DE CALCIO.

EXPRESAR EL RESULTADO OBTENIDO EN TANTO POR CIENTO DE LA MUESTRA.

10.6. OBSERVACIONES.

10.6.1. PARA PEQUEÑAS CANTIDADES DE CALCIO, PROCEDER COMO EN 10.5. FILTRAR EL PRECIPITADO DE OXALATO DE CALCIO SOBRE UN PAPEL DE FILTRO SIN CENIZAS Y CALCINARLO EN UN CRISOL A 55O GRADOS C. RECUPERAR EL RESIDUO CON ALGUNAS GOTAS DE ACIDO SULFURICO (10.3.3), EVAPORAR A SEQUEDAD, CALCINAR DE NUEVO A 550 GRADOS C Y PESAR.

SI P REPRESENTA EL PESO DE SULFATO CALCICO OBTENIDO, LA CANTIDAD EN CALCIO DE LA ALICUOTA TOMADA SERA IGUAL A P X 0,2944.

10.6.2. SI LA MUESTRA ESTA CONSTITUIDA EXCLUSIVAMENTE POR ACIDO CLORHIDRICO SIN INCINERACION PREVIA. PARA LOS PRODUCTOS TALES QUE LOS FOSFATOS ALUMINICO-CALCICOS . PARA LOS PRODUCTOS TALES QUE LOS FOSFATOS DIFICILES DE DISOLVER EN LOS ACIDOS, PROCEDER A UNA FUSION ALCALINA ANTES DE LA DISOLUCION. MEZCLAR INTIMAMENTE EN UN CRISOL DE PLATINO LA PARTE TOMADA CON CINCO VECES SU PESO DE UNA MEZCLA COMPUESTA EN PARTES IGUALES DE CARBONATO DE POTASIO Y DE CARBONATO DE SODIO. CALENTAR CON PRECAUCION HASTA LA FUSION COMPLETA DE LA MEZCLA, REFRIGERAR Y DISOLVER CON ACIDO CLORHIDRICO.

10.6.3. SI LA CANTIDAD DE MAGNESIO DE LA MUESTRA ES ELEVADA, PROCEDER A UNA SEGUNDA PRECIPITACION CON OXALATO DE CALCIO.

10.7 REFERENCIAS.

1. JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO L 155/17.

11. GRASA

(EN PRODUCTOS LACTEOS REENGRASADOS)

11.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DE LA GRASA POR EL METODO GERBER.

11.2. MATERIAL Y APARATOS.

11.2.1. BUTIROMETROS CONTRASTADOS, CON GRADUACIONES DE O-6 % DE GRASA Y CON DIVISIONES DEL 0,1 %. SE PUEDEN UTILIZAR BUTIROMETROS CON GRADUACIONES DE 0 A 5% Y DIVISIONES DEL 0,1 %, CUANDO LA MUESTRA TENGA UN CONTENIDO EN GRASA INFERIOR AL 5 %.

11.2.2. TAPONES TRONCOCONICOS DE GOMA U OTRO TIPO, APROPIADOS.

11.2.3. PIPETAS CONTRASTADAS DE 1 Y 10 ML.

11.2.4. VIDRIOS DE RELOJ.

11.2.5. BAÑO DE AGUA REGULABLE A 65. +- 1 GRADOS C.

11.2.6. CENTRIFUGA CAPAZ DE ALCANZAR 1.200 R. P. M.

11.2.7. EMBUDO DESPROVISTO DE CUELLO Y VASTAGO PARA LA INTRODUCCION DE LA MUESTRA EN EL BUTIROMETRO.

11.3. REACTIVOS.

11.3.1. ACIDO SULFURICO DE DENSIDAD D = 1,82.

11.3.2. ALCOHOL ISOAMILICO DE DENSIDAD D = 0,815 E INTERVALO DE DESTILACION DE 128. A 132 GRADOS C.

11.4. PROCEDIMIENTO.

11.4.1. PESAR, CON PRECISION DE 0,1 MG, 1.100 G DE PRODUCTO E INTRODUCIRLO EN EL BUTIROMETRO A TRAVES DEL EMBUDO. AÑADIR, A TRAVES DEL EMBUDO, 10 ML DE AGUA TIBIA (40 GRADOS C), ARRASTRANDO LO QUE HAYA PODIDO ADHERIRSE AL MISMO. TAPAR Y AGITAR FUERTEMENTE PARA DISOLVER LA LECHE.

SEGUIDAMENTE AÑADIR 10 ML DE ACIDO SULFURICO HACIENDOLO RESBALAR SUAVEMENTE POR LAS PAREDES DEL BUTIROMETRO. AÑADIR 1 ML DE ALCOHOL ISOAMILICO. ERRAR EL BUTIROMETRO CON EL TAPON DE GOMA, AGITAR SUAVEMENTE Y CENTRIFUGAR A 1.2OO R. P. M. DURANTE TRES A CINCO MINUTOS. SACAR EL BUTIROMETRO DE LA CENTRIFUGA E INTRODUCIR EN EL BAÑO DE AGUA A 65 GRADOS C. DEJAR TRANSCURRIR ALGUNOS MINUTOS Y EFECTUAR LA LECTURA.

11.5. EXPRESION DE LOS RESULTADOS.

LEER EN EL BUTIROMETRO, EN LA ESCALA DIVIDIDA, LA ALTURA QUE HA ALCANZADO LA COLUMNA DE GRASA, HABIENDOSE AJUSTADO A CERO EL LIQUIDO QUE NO CONTIENE GRASA. LOS GRADOS DE LA ESCALA INDICAN LAS DECENAS, Y LAS DECIMAS, LAS UNIDADES POR CIENTO. SE PUEDE APRECIAR PERFECTAMENTE UN 0,5 POR 100.

11.6. OBSERVACIONES.

11.6.1. EN EL CASO DE SUEROS DESPROVISTOS DE CASEINA, PUEDEN PRODUCIR CARBONIZACIONES QUE DIFICULTEN LA LECTURA (DEBIDO A QUE EL ACIDO SULFURICO, DE DENSIDAD D = 1,82, RESULTA DEMASIADO CONCENTRADO). EN ESTE CASO SE PUEDE DILUIR AL 10 POR 100 (V/V) CON AGUA DESTILADA.

11.6.2. EN LOS PRODUCTOS CON GRASA MUY MICRONIZADA CONVIENE REPETIR POR TRES VECES LAS CENTRIFUGACIONES, EL CALENTAMIENTO A 65 GRADOS C Y LAS LECTURAS, HASTA OBTENER RESULTADOS CONSTANTES.

11.7. REFERENCIAS.

1. INSTITUTO DE RACIONALIZACION Y NORMALIZACION DEL TRABAJO. UNA NORMA ESPAÑOLA 64.029.

12. CENIZAS BRUTAS

12.1. PRINCIPIO.

INCINERACION DE LA MUESTRA A 550 GRADOS C Y PESADA DEL RESIDUO HASTA PESO CONSTANTE.

N DE LA MUESTRA A 550 GRADOS C Y PESADA DEL RESIDUO HASTA PESO 12.2. MATERIAL Y APARATOS.

12.2.1. PLACA CALEFACTORA.

12.2.2. HORNO ELECTRICO CON REGULACION DE TEMPERATURA.

12.2.3. CRISOLES DE PLATINO O CUARZO, RECTANGULARES (60 X 40 X 25 MM) O REDONDOS.

12.2.4. NITRATO DE AMONIO.-SOLUCION AL 20 POR 100.

12.3. PROCEDIMIENTO.

PESAR ALREDEDOR DE 5 G DE MUESTRA, CON UNA APROXIMACION DE 1 MG (PARA LOS PRODUCTOS QUE TENGAN TENDENCIA A "ESPONJARSE", PESAR 2,5 G) EN UN CRISOL PREVIAMENTE CALCINADO Y TARADO. COLOCAR EL CRISOL SOBRE LA PLACA CALEFACTORA HASTA CARBONIZACION DE LA MUESTRA. INTRODUCIR EL CRISOL EN EL HORNO REGULADO A 550 +- 5 GRADOS C. MANTENER A ESTA TEMPERATURA HASTA LA OBTENCION DE CENIZAS BLANCAS, GRIS CLARO O ROJIZAS, APARENTEMENTE DESPROVISTAS DE PARTICULAS CARBONOSAS. COLOCAR EL CRISOL EN UN DESECADOR, DEJAR ENFRIAR Y PESAR INMEDIATAMENTE.

CAR EL CRISOL EN UN DESECADOR, DEJAR ENFRIAR Y PESAR (FORMULA OMITIDA)

12.5. OBSERVACIONES.

12.5.1. LAS MATERIAS DIFICILES DE INCINERAR DEBEN SOMETERSE A UNA PRIMERA INCINERACION DE TRES HORAS, SE ENFRIAN Y SE LES ADICIONA ALGUNAS GOTAS DE UNA SOLUCION AL 20 POR 100 DE NITRATO DE AMONIO. CONTINUANDO LA INCINERACION DESPUES DE LA DESECACION EN ESTUFA.

REPETIR EVENTUALMENTE LA OPERACION HASTA LA INCINERACION COMPLETA.

12.5.2. PARA LAS MATERIAS RESISTENTES AL TRATAMIENTO ANTERIOR, OPERAR COMO SIGUE: DESPUES DE UNA INCINERACION DE TRES HORAS, ARRASTRAR LAS CENIZAS CON AGUA CALIENTE Y FILTRAR SOBRE UN PEQUEÑO FILTRO DE CENIZAS CONOCIDAS. INCINERAR EL FILTRO Y SU CONTENIDO EN EL CRISOL INICIAL.

LLEVAR EL FILTRADO AL CRISOL FRIO, EVAPORAR A SEQUEDAD, INCINERAR Y PESAR.

12.5.3. EN EL CASO DE ACEITES Y GRASAS, PESAR 25 G EN UN CRISOL DE CAPACIDAD APROPIADA. CARBONIZAR INFLAMANDO LA MUESTRA POR MEDIO DE UNA MECHA DE PAPEL DE FILTRO SIN CENIZAS. DESPUES DE LA COMBUSTION, HUMEDECER CON LA MINIMA CANTIDAD DE AGUA POSIBLE. DESECAR Y CONTINUAR COMO SE INDICA EN 12.5.

12.6. REFERENCIAS.

1. JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES. NUMERO L 155/20.

ANEJO VIII

METODOS DE ANALISIS DE AGUAS

1. BIOXIDO DE CARBONO LIBRE (CO2)

1.1. PRINCIPIO.

EL PRESENTE METODO ESTA BASADO EN LA REACCION DEL CO2 LIBRE DEL AGUA CON EL HIDROXIDO DE SODIO PARA FORMAR BICARBONATO DE SODIO.

ADEMAS DE ESTE METODO DE VALORACION VOLUMETRICA EXISTE UNO MONOGRAFICO QUE POR EXIGIR GRAN PRECISION EN LA DETERMINACION "IN SITU" DEL PH Y DE LA ALCALINIDAD RESULTA MENOS ACONSEJABLE.

PUEDEN PRODUCIRSE ERRORES POR LA PRESENCIA DE AMONIACO, AMINAS, FOSFATOS, BORATOS, SILICATOS, SULFUROS Y NITRITOS, ASI COMO POR LA EXISTENCIA DE ACIDOS MINERALES O SALES DE ACIDO FUERTE Y BASE DEBIL. TAMBIEN ALTERAN CUANTITATIVAMENTE EL RESULTADO EL ALUMINIO, HIERRO, CROMO Y COBRE.

1.2. MATERIAL Y APARATOS.

1.2.1. FRASCOS PYREX DE 1.000 ML.

1.2.2. PROBETA GRADUADA DE 100 ML.

1.2.3. TUBO DE GOMA.

1.2.4. BURETA NORMAL GRADUADA EN 0,1 ML.

1.2.5. VARILLA DE VIDRIO.

1.3. REACTIVOS.

1.3.1. SOLUCION VALORADA DE HIDROXIDO SODICO 0,02 N.-DILUIR 20 ML DE NAOH 1 N A UN LITRO DE AGUA DESTILADA QUE PREVIAMENTE SE HA HERVIDO NO MENOS DE QUINCE MINUTOS PARA EXPULSAR EL BIOXIDO DE CARBONO Y ENFRIARLO A LA TEMPERATURA AMBIENTE. PREPARAR DIARIAMENTE Y PROTEGER DEL BIOXIDO DE CARBONO ATMOSFERICO EN UN FRASCO PYREX. TITULAR LA SOLUCION CON EL REACTIVO 1.3.3.

1.3.2. SOLUCION INDICADORA DE FENOLFTALEINA. DISOLVER 0,5 G DE FENOLFTALEINA EN 50 ML DE ALCOHOL ETILICO DE 96. Y AGREGAR 50 ML DE AGUA DESTILADA QUE PREVIAMENTE SE HA HERVIDO NO MENOS DE QUINCE MINUTOS PARA EXPULSAR EL BIOXIDO DE CARBONO Y ENFRIARLO A LA TEMPERATURA AMBIENTE. AGREGAR A CONTINUACION EL REACTIVO 1.3.1 A GOTAS HASTA QUE APAREZCA UNA MUY LIGERA COLORACION ROSA.

1.3.3. SOLUCION PATRON ACIDA 0,01 N DE ACIDO CLORHIDRICO O SULFURICO.

1.4. PROCEDIMIENTO.

SIFONAR LA MUESTRA MEDIANTE TUBO DE GOMA, LLENANDO DESDE EL FONDO UNA PROBETA DE 100 ML HASTA QUE DERRAME. EXTRAER EL TUBO DE GOMA Y VERTER EL EXCESO DE AGUA MEDIANTE SACUDIDAS.

AGREGAR CINCO O DIEZ GOTAS DE REACTIVO 1.3.2. SI LA MUESTRA VIRA A ROJO, NO HAY PRESENTE BIOXIDO DE CARBONO LIBRE; SI LA MUESTRA SE MANTIENE INCOLORA, TITULAR RAPIDAMENTE CON EL REACTIVO 1.3.1 AGITANDO SUAVEMENTE CON UNA VARILLA DE VIDRIO HASTA QUE EL COLOR ROSA CARACTERISTICO OBSERVADO A TRAVES DE TODO EL ESPESOR DE LA MUESTRA PERSISTA, POR LO MENOS, TREINTA SEGUNDOS.

(FORMULA OMITIDA)

1.6. REFERENCIAS.

1. METODOS DE ANALISIS RECOMENDADOS. CENTRO DE ESTUDIOS HIDROGRAFICOS, MADRID, 1968.

2. STANDARD METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND WASTEWATER. AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, INC. NEW YORK, 1960.

2. DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (D. B. O.)

2.1. PRINCIPIO.

LA DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO O D.B.O. ES LA CANTIDAD DE OXIGENO EVENTUALMENTE CONSUMIDA POR LOS GERMENES AEROBIOS PARA ASEGURAR LA DESCOMPOSICION, EN CONDICIONES NORMALIZADAS DE INCUBACION, DE LAS MATERIAS ORGANICAS CONTENIDAS EN EL AGUA ANALIZADA.

LA INCUBACION SE EFECTUA EN OSCURIDAD, DURANTE CINCO DIAS, Y A UNA TEMPERATURA DE 20 GRADOS C.

2.2. MATERIAL Y APARATOS.

2.2.1. FRASCOS DE INCUBACION, DE 250-300 ML DE CAPAPACIDAD, AFORADOS Y CON TAPON ESMERILADO MACIZO Y CON BISEL.

2.2.2. ESTUFA DE CULTIVOS CON CONTROL TERMOSTATICO A 20 GRADOS CENTIGRADOS +- 1 GRADOS C.

UFA DE CULTIVOS CON CONTROL TERMOSTATICO A 20 GRADOS CENTIGRADOS +- 1 2.2.3. MATRACES ERLENMEYER DE 500 ML.

2.2.4. PIPETAS DE 1 Y 5 ML.

2.2.5. BURETAS.

2.3. REACTIVOS.

2.3.1. AGUA DESTILADA.

2.3.2. SOLUCION AMORTIGUADORA DE FOSFATO.-DISOLVER 8,5 G DE KH2PO4, 25,75 G DE K2HPO4, 33,4 G DE NA2HPO4 . 7H2O Y 1,7 G DE NH4CL EN UNOS 500 ML DE AGUA DESTILADA Y DILUIR A UN LITRO. EL PH DE ESTA SOLUCION AMORTIGUADORA DEBE SER DE 7,2, SIN AJUSTE ALGUNO.

2.3.3. SOLUCION DE SULFATO DE MAGNESIO.-DISOLVER 22,5 G DE MGSO4 . 7H2O EN AGUA A DESTILADA Y DILUIR A UN LITRO.

2.3.4. SOLUCION DE CLORURO DE CALCIO.-DISOLVER 27,5 G DE CACL2 ANHIDRO EN AGUA DESTILADA Y DILUIR A UN LITRO.

2.3.5. SOLUCION DE CLORURO FERRICO.-DISOLVER 0,25 G DE FECL3 6H2O EN AGUA DESTILADA Y DILUIR A UN LITRO.

2.3.6. SOLUCIONES DE ACIDOS Y ALCALIS 1N.

2.3.7. SOLUCION DE SULFITO DE SODIO 0,025 N.-DISOLVER 1,575 G DE NASO3 ANHIDRO EN 1.000 ML DE AGUA DESTILADA. ESTA SOLUCION NO ES ESTABLE Y SE DEBE PREPARAR EL DIA QUE SE VAYA A EMPLEAR.

2.3.8. SOLUCION DE SULFATO MANGANOSO.-DISOLVER 400 G DE MNSO4 . 2H2O EN AGUA DESTILADA, FILTRAR Y DILUIR A UN LITRO. ESTA SOLUCION NO DEBE LIBERAR MAS QUE TRAZAS DE YODO CUANDO SE AÑADE A UNA SOLUCION ACIDIFICADA DE IODURO POTASICO.

2.3.9. REACTIVO DE ALCALI-IODURO NITRURO.-DISOLVER 500 G DE NAOH Y 135 G DE NAL EN AGUA DESTILADA. MEZCLAR AMBAS SOLUCIONES Y DILUIR A UN LITRO. ESTE REACTIVO NO DEBE PRODUCIR COLORACION CON EL ALMIDON CUANDO SE DILUYE Y ACIDIFICA.

2.3.10. ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO DE DENSIDAD 22. BEAUME = 1,18.

2.3.11. SOLUCION DE ALMIDON.-TRITURAR 5 G DE ALMIDON SOLUBLE Y 5 MG DE I2HG CON UN POCO DE AGUA Y AÑADIR LENTAMENTE LA EMULSION A UN LITRO DE AGUA HIRVIENDO, MANTENIENDO LA EBULLICION UNOS MINUTOS HASTA QUE LA SOLUCION QUEDA CLARA. ENFRIAR Y PASAR A UN FRASCO TOPACIO CON TAPON ESMERILADO.

2.3.12. SOLUCION STOCK DE TIOSULFATO SODICO 0,10 N.-DISOLVER 24,82 G DE NA2S2O3 . 5H2O EN AGUA DESTILADA RECIEN HERVIDA Y ENFRIADA Y DILUIR A UN LITRO. CONSERVAR LA SOLUCION AÑADIENDO 1 G DE NAOH.

2.3.13. SOLUCION VALORADA DE DICROMATO POTASICO 0,025 N.-PESAR 1,226 G DE K3CR2O7, PREVIAMENTE SECADOS DURANTE DOS HORAS A 103 GRADOS C Y DILUIR A UN LITRO EN MATRAZ AFORADO.

2.3.14. SOLUCION VALORADA DE TIOSULFATO SODICO 0,025 N.-DILUIR 250 ML DEL REACTIVO 2.3.12 A UN LITRO DE AGUA DESTILADA RECIENTEMENTE HERVIDA Y ENFRIADA. TITULAR ESTA SOLUCION MEDIANTE EL REACTIVO 2.3.13.

2.4. PROCEDIMIENTO.

2.4.1. PREPARACION DEL AGUA DE DILUCION.

TOMAR DOS LITROS DE AGUA DESTILADA.

OXIGENARLA MEDIANTE AIRE COMPRIMIDO HASTA QUE LA TENSION DEL OXIGENO DISUELTO

ESTE PROXIMA A SU SATURACION.

AÑADIR A DICHA AGUA 1 ML DE CADA UNO DE LOS REACTIVOS 2.3.2., 2.3.3., 2.3.4. Y 2.3.5.

CONSERVAR ESTE AGUA A 20 GRADOS C, TAPADO EL FRASCO CON TAPON DE ALGODON.

2.4.2. ACONDICIONAMIENTO DEL AGUA PROBLEMA.

NEUTRALIZAR EL AGUA PROBLEMA HASTA PH PROXIMO A 7 MEDIANTE EL REACTIVO 2.3.6.

ELIMINAR EL CLORO LIBRE, SI LO HUBIESE, MEDIANTE LA ADICION DEL REACTIVO 2.3.7.

ELIMINAR EL EXCESO DE OXIGENO AGITANDO FUERTEMENTE LA MUESTRA O BIEN MEDIANTE BURBUJEO DE AIRE COMPRIMIDO, SIEMPRE A 20 GRADOS C.

2.4.3. DILUCION DEL AGUA PROBLEMA.

SIFONAR EL AGUA DE DILUCION A UNA PROBETA GRADUADA DE 1.000-2.000 ML DE CAPACIDAD, LLENANDOLA HASTA LA MITAD SIN ARRASTRAR AIRE. AGREGAR EL AGUA DE MUESTRA CUIDADOSAMENTE MEZCLADA EN LA CANTIDAD NECESARIA PARA OBTENER LA DILUCION QUE SE DESEE Y TERMINAR DE DILUIR HASTA EL NIVEL APROPIADO CON AGUA DE DILUCION. MEZCLAR BIEN CON UN AGITADOR, EVITANDO EL ARRASTRE DEL AIRE.

SE ACONSEJA LAS SIGUIENTES DILUCIONES:

EFLUENTES DEPURADOS: DE 5 A 25 POR 100.

AGUAS FLUVIALES: DE 25 A 100 POR 100.

SIFONAR LA DILUCION MEZCLADA A DOS FRASCOS DE INCUBACION, LLENANDOLOS COMPLETAMENTE Y CERRANDOLOS HERMETICAMENTE.

DETERMINAR EL OXIGENO INICIAL EN UNO DE LOS DOS FRASCOS DE FORMA INMEDIATA Y CONSERVAR EL OTRO FRASCO EN INCUBACION DURANTE CINCO DIAS EN OSCURIDAD Y A UNA TEMPERATURA DE 20 GRADOS C, PARA DESPUES DETERMINAR EN EL EL OXIGENO DISUELTO NO CONSUMIDO.

2.4.4. DETERMINACION DEL OXIGENO DISUELTO:

AGREGAR AL FRASCO DE INCUBACION 1 ML DEL REACTIVO 2.3.8 Y DESPUES 1 ML DEL REACTIVO 2.3.9, HACIENDO AMBAS ADICIONES EN EL FONDO DEL FRASCO. TAPAR DE NUEVO EL FRASCO PROCURANDO EXCLUIR LAS BURBUJAS, CON LO QUE SE DERRAMARA UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE LIQUIDO.

MEZCLAR POR INVERSION VARIAS VECES Y ESPERAR QUE SE SEDIMENTE EL PRECIPITADO.

DESTAPAR EL FRASCO Y AÑADIR, MEDIANTE PIPETA, HACIENDO LLEGAR EL ACIDO HASTA EL FONDO, 5 ML DE 2.3.10. CERRAR DE NUEVO EL FRASCO Y AGITAR HASTA QUE SE DISUELVA EL PRECIPITADO.

PASAR TODO EL LIQUIDO A UN MATRAZ ERLENMEYER DE 500 ML, LAVANDO FRASCO Y TAPON CON AGUA DESTILADA.

AÑADIR GOTA A GOTA, CON RAPIDEZ Y AGITANDO EL MATRAZ, EL REACTIVO 2.3.14 HASTA QUE EL LIQUIDO TOME COLORACION PAJA PALIDO.

AGREGAR 1 O 2 ML DEL REACTIVO 2.3.11, CON LO QUE TOMARA EL LIQUIDO COLOR AZUL, Y CONTINUAR VALORANDO CON 2.3.14, GOTA A GOTA, HASTA QUE EL LIQUIDO SE TORNE INCOLORO O GRIS BLANQUECINO.

(FORMULA OMITIDA)

2.6. OBSERVACIONES.

ESTE METODO NO ES APLICABLE A AGUAS NEGRAS O DESECHOS INDUSTRIALES CONCENTRADOS QUE EXIGEN DILUCIONES MUY ELEVADAS Y OBLIGAN A SEMBRAR EL AGUA DE DILUCION CON UN INOCULO.

EN ESTOS CASOS SE PRECISAN COMPROBACIONES DE LA D.B.O. DEL INOCULO Y LOS METODOS Y CALCULOS REQUIEREN TECNICAS LABORIOSAS SOLO PROPIAS DE LOS LABORATORIOS ESPECIALIZADOS.

2.7. REFERENCIAS.

1. STANDARD METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND SEWAGE, AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, NEW YORK, 1960.

2. RODIER, J.: L'ANALYSE CHIMIQUE ET PHISICO-CHIMIQUE DE LyEAU. DUNOD. PARIS.

3. GUTIERREZ CALDERON, E., ET ALT.: ESTUDIO DEL B. O. D. Y PLAN DE TRABAJO PARA SU DETERMINACION. ANALES I.F.I.E. MADRID, 1959.

4. LIVRE DE LEAU. CEBEDOC. LIEJA, 1966.

3. CONDUCTIVIDAD ELECTRICA

3.1. PRINCIPIO.

SE DENOMINA CONDUCTIVIDAD ESPECIFICA DE UN AGUA A LA APTITUD DE ESTA PARA TRANSMITIR LA CORRIENTE ELECTRICA.

LA CONDUCTIVIDAD DEPENDE DE LA ACTIVIDAD Y TIPO DE IONES DISUELTOS Y DE LA TEMPERATURA A LA QUE SE REALIZA LA MEDIDA.

PARA MEDIR LA CONDUCTIVIDAD SE HACE USO DE UN PUENTE DE WHEATSTONE Y UNA CELULA DE CONDUCTIVIDAD APROPIADA, COMPARANDO A LA MISMA TEMPERATURA LA RESISTENCIA ELECTRICA DE LA MUESTRA Y DE UNA SOLUCION VALORADA DE CLORURO POTASICO Y REFIRIENDO EL RESULTADO A 25 GRADOS C.

3.2. MATERIAL Y APARATOS.

3.2.1. PUENTE DE WHEATSTONE APTO PARA ESTE FIN.

3.2.2. CELDA DE CONDUCTIVIDAD ESPECIFICA, BIEN DEL TIPO PIPETA, BIEN DEL TIPO INMERSION, CON ELECTRODOS DE PLATINO PLATINADOS. LA CONSTANTE DE LA CELDA DEBE SER APROXIMADAMENTE DE 1O-1 PARA AGUAS DE CONDUCTIVIDAD BAJA, DE 1 PARA AGUAS DE CONDUCTIVIDAD MEDIA Y DE 10 PARA AGUAS DE CONDUCTIVIDAD ALTA.

3.3. REACTIVOS.

SOLUCION PATRON DE CLK.-PREPARAR UNA SOLUCION DE CLK CUYA CONDUCTIVIDAD DIFIERA POR UN FACTOR DE MENOS DE 5 DE LA CONDUCTIVIDAD DE LA MUESTRA. GENERALMENTE, UNA SOLUCION 0,01 M DE CLK (0,7456 G/L) ES ACEPTABLE. ESTA SOLUCION TIENE UNA CONDUCTIVIDAD DE 1.413 UMHO/CM. DE LA SIGUIENTE TABLA PUEDEN ELEGIRSE OTRAS SOLUCIONES PATRONES QUE NO SE CONSIDEREN NECESARIAS:

(TABLA OMITIDA)

3.4. PROCEDIMIENTO.

DEJAR QUE LA SOLUCION PATRON DE CLK Y LAS MUESTRAS DE AGUA ESTEN A LA MISMA TEMPERATURA. CUALQUIER TEMPERATURA ENTRE 20 Y 30 GRADOS C ES ACEPTABLE, PERO ES IMPORTANTE QUE LAS SOLUCIONES PROBLEMA Y LA PATRON ESTEN A LA MISMA TEMPERATURA. CUANDO SE REQUIERE GRAN PRECISION SE COLOCARAN LAS SOLUCIONES A 25 GRADOS C EN TERMOSTATO.

A CONTINUACION SE ENJUAGA Y SE LLENA SUCESIVAMENTE LA CELDA DE CONDUCTIVIDAD CON LA SOLUCION PATRON Y LAS SOLUCIONES PROBLEMA Y LEYENDO EN EL APARTADO (2-1), DE ACUERDO CON SU MANUAL DE INSTRUCCIONES, LOS VALORES OBTENIDOS.

(FORMULA OMITIDA)

3.6. OBSERVACIONES.

3.6.1. LAS CELULAS NUEVAS DEBEN LIMPIARSE CON MEZCLA SULFOCROMICA, DEBIENDO PLATINARSE LOS ELECTRODOS DE LAS MISMAS CUANDO LOS RESULTADOS SEAN ERRATICOS O CUANDO SE OBSERVE QUE EL PLATINO SE HA DESPRENDIDO TOTAL O PARCIALMENTE. PARA ELLO SE PREPARA UNA SOLUCION DE 1 G DE CLORURO DE PLATINO Y 0,012 G DE ACETATO DE PLOMO EN 100 ML DE AGUA. SE LLENA LA CELDA CON ESTA SOLUCION Y SE CONECTAN LOS TERMINALES DE LOS ELECTRODOS A UNA BATERIA DE 1,5 VOLTIOS, INTERCALANDO UN SHUNT EN LA BATERIA CUANDO SEA NECESARIO AJUSTAR LA CORRIENTE, DE MANERA QUE SE DESPRENDA UNA PEQUEÑA CANTIDAD DE GAS. DAR POR TERMINADO EL PROCESO CUANDO LOS ELECTRODOS ESTEN RECUBIERTOS CON UN DEPOSITO NEGRO DE PLATINO. DRENAR LA CELULA Y RECUPERAR PARA UN FUTURO USO LA SOLUCION PLATINIZANTE. ENJUAGAR BIEN LA CELDA CON AGUA DESTILADA Y DEJARLA LLENA DE AGUA DESTILADA CUANDO NO SE USE.

3.6.2. HASTA 5.000 MICROOHMIOS EXISTE UNA ACEPTABLE CORRELACION ENTRE CONDUCTIVIDAD ELECTRICA Y CONTENIDO SALINO DE LAS AGUAS, DE TAL MODO QUE LOS SIGUIENTES FACTORES DE CONVERSION SE MANEJAN FRECUENTEMENTE:

CONCENTRACION SALINA EN MG/1 = 640 X CE EN MMHOS/CM

CONCENTRACION DE CATIONES EN MEQ/L = 10 X CE EN MMHOS/CM

3.7. REFERENCIAS.

1. BOWER, C.A., Y WILCOX, L. V.: METHODOS OF SOIL ANALYSIS PARTZ, PP. 937-940, 1965.

2. NATIONAL RESEARCH COUNCIL: INTER. CRITICAL TABLAS, 1929.

3. AGRICULTURAL HANDBOCK, NUM. 60. USDA, PP. 137-140, 1954.

4. METODOS DE ANALISIS RECOMENDADOS POR EL INSTITUTO DE HIDROLOGIA DEL C.S.I.C., PAGINAS 30-34, 1968.

(TABLA OMITIDA)

4. SULFATOS

(DETERMINACION TURBIDOMETRICA)

4.1. PRINCIPIO.

EL ION SO4 = SE PRECIPITA CON ION BA 2+, EN CONDICIONES TALES QUE SE FORMEN CRISTALES DE TAMAÑO UNIFORME DE SO4BA, LOS QUE DEBEN MANTENERSE EN SUSPENSION HOMOGENEA DURANTE UN PERIODO DE TIEMPO QUE RESULTE SUFICIENTE PARA MEDIR LA ABSORBANCIA QUE LA MISMA PRODUZCA.

EL CONTENIDO EN SO4 = DE CADA MUESTRA SE OBTENE A PARTIR DE LA CURVA DE CALIBRADO PREVIAMENTE OBTENIDA.

4.2. MATERIAL Y APARATOS.

4.2.1. INSTRUMENTO DE MEDIDA, QUE PUEDE SER UNO DE LOS SIGUIENTES.

4.2.1.1. NEFELOMETRO O TURBIDIMETRO.

4.2.1.2. ESPECTROFOTOMETRO CON MEDIDA A 420-430 NM.

4.2.1.3. FOTOMETRO DE FILTRO, EQUIPADO CON FILTRO DE TRANSMITENCIA 420-430 NM.

4.2.2. TUBOS CILINDRICOS, CALIBRADOS A 50 CM3, CON TAPON.

4.3. REACTIVOS.

4.3.1. SOLUCION DE SO4K2 CONTENIENDO 480 MG (10 MEQ) DE SO4 = POR LITRO (0,8707 GRAMOS DE SO4K2 DISUELTOS EN AGUA DESTILADA HASTA COMPLETAR UN LITRO).

4.3.2. SOLUCION PRECIPITANTE DE BARIO.-SE DISUELVEN 20 GRAMOS DE ACETATO BARICO EN UNA MEZCLA DE 75 CM3 DE ACIDO ACETICO 10 N Y 25 CM3 DE SOLUCION DE GOMA ARABIGA AL 5 POR 100, FILTRANDO LA SOLUCION RESTANTE. EL PH AMORTIGUADO DE ESTA SOLUCION ES DE 3,70.

4.4. PROCEDIMIENTO.

4.4.1. OBTENCION DE LA CURVA DEL CALIBRADO.-EN LOS TUBOS CILINDRICOS 4.2.2 SE INTRODUCEN PARTES ALICUOTAS DE LA SOLUCION 4.3.1. SE LES AÑADE AGUA DESTILADA HASTA UNOS 40 CM3, 1 CC DE REACTIVO 4.3.2 Y SE COMPLETA A 50 CM3 CON AGUA DESTILADA. SE HOMOGENEIZA EL CONJUNTO DURANTE UN MINUTO POR AGITACION SUAVE Y SE DEJA EN REPOSO AL MENOS OTRO MINUTO. A PARTIR DE ESE MOMENTO, Y DENTRO DE LOS QUINCE MINUTOS SIGUIENTES, PUEDEN EFECTUARSE LAS MEDIDAS; PARA ELLO, SE TRASLADA PARTE DE LA SUSPENSION A LAS CUBETAS DEL APARATO, DE MEDIDA QUE SE UTILICE, MIDIENDO LAS CORRESPONDIENTES ABSORBANCIAS, EMPLEANDO COMO BLANCO AGUA DESTILADA SOMETIDA AL MISMO TRATAMIENTO.

CON LOS VALORES OBTENIDOS SE CONSTRUYE LA CURVA DE CALIBRADO, QUE SE ACONSEJA TABULAR.

4.4.2. VALORACION DE LAS MUESTRAS.-SE OPERA EXACTAMENTE IGUAL A COMO SE HA INDICADO EN 4.4.1, EMPLEANDO 5 ML DEL PROBLEMA.

4.5. CALCULO DE LOS RESULTADOS.

EL CONTENIDO EN SO4 = DE LAS MUESTRAS SE OBTIENEN LLEVANDO LAS LECTURAS DE ABSORBANCIAS OBTENIDAS CON LAS MISMAS A LA CURVA DE CALIBRADO 4.1 Y TENIENDO EN CUENTA QUE SE OPERO CON 5 ML DE MUESTRA.

LOS RESULTADOS PUEDEN EXPRESARSE EN MEQ O EN MG DE SO4 = POR LITRO.

4.6. OBSERVACIONES.

4.6.1. SI LA LECTURA DE UNA MUESTRA SOBREPASA LA MAXIMA CONCENTRACION QUE FIGURA EN LA CURVA DE CALIBRADO O INVERSAMENTE DE UN VALOR MUY BAJO EN DICHA CURVA, DEBE REPETIRSE, EL ENSAYO EMPLEANDO MENOS DE 5 ML O MAS DE 5 ML DE PROBLEMA, RESPECTIVAMENTE, LO QUE DEBERA TENERSE EN CUENTA AL EFECTUAR EL CALCULO DEL RESULTADO.

4.6.2. NO SE INDICAN LAS CONCENTRACIONES MINIMA Y MAXIMA, ENTRE LAS QUE ESTE METODO RESULTA VALIDO, PORQUE ELLO DEPENDE EN GRAN MANERA DEL INSTRUMENTO DE MEDIDA QUE SE UTILICE Y DEL PASO DE LUZ DE LA CUBETA EMPLEADA.

4.6.3. EN ESTA TECNICA INTERFIEREN FUNDAMENTALMENTE EL COLOR Y LA TURBIDEZ. ESTA PUEDE ELIMINARSE POR FILTRACION O CENTRIFUGACION. LA INTERFERENCIA DEL COLOR PUEDE SOSLAYARSE UTILIZANDO LA MUESTRA COLOREADA COMO TESTIGO, AL QUE NO SE LE AGREGA REACTIVO 4.3.2 O EMPLEANDO COMO INSTRUMENTO DE MEDIDA UN NEFELOMETRO DE DOBLE POSICION DE CUBETA, CON LO QUE SE ELIMINA LA INFLUENCIA DEL COLOR.

4.7. REFERENCIAS.

1. METODO UTILIZADO EN EL LABORATORIO DE SUELOS Y AGUAS DEL IRYDA. INF. QUIM. ANALITICA. V. PP. 1-6, 1951.

2. METODOS DE ANALISIS RECOMENDADOS POR EL INSTITUTO DE HIDROLOGIA DEL CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS, PP. 11-13, 1968.

5(A) CLORUROS

(INDICADOR)

5(A).1. PRINCIPIO.

LOS PROCEDIMIENTOS CLASICOS PARA DETERMINACION DE CLORUROS SE BASAN EN LA FORMACION DE UNA SAL DE PLATA RELATIVAMENTE INSOLUBLE.

EL PUNTO DE VIRAJE DE LA VALORACION DE CLORUROS CON NITRATO DE PLATA PUEDE SER DETECTADO DE DIVERSAS MANERAS, TAL COMO POR LA APARICION DE UN PRECIPITADO ROJO DE CRO4AG2 (VALORACION DE MOHR) O MIDIENDO EL POTENCIAL QUE SE DESARROLLA EN LA SOLUCION MEDIANTE UNA COMBINACION APROPIADA DE ELECTRODOS (KOLTHOFF Y KURODA, 1951).

5(A).2. MATERIAL Y APARATOS.

5(A).2.1. MICROBURETA DE 10 ML.

5(A).3. REACTIVOS.

5(A).3.1. SOLUCION AL 5 POR 100 DE CROMATO POTASICO.-DISOLVER 5 G. DE CROMATO POTASICO EN 50 ML DE AGUA Y AÑADIR NITRATO DE PLATA 1 N, GOTA A GOTA, HASTA QUE SE FORME UN PRECIPITADO ROJO CLARO PERMANENTE. FILTRAR Y DILUIR HASTA 100 ML.

5(A).3.2. NITRATO DE PLATA, 0,005 N.-DISOLVER 0,8495 G DE SECADO EN ESTUFA DE NITRATO DE PLATA EN AGUA Y DILUIR EXACTAMENTE EN UN LITRO. ALMACENAR LA SOLUCIN EN UN FRASCO COLOR TOPACIO PARA PROTEGERLA DE LA LUZ.

5(A).4. PROCEDIMIENTO.

TOMAR UNA ALICUOTA DE LA SOLUCION PROBLEMA Y VALORAR CON ACIDO SULFURICO HASTA EL PUNTO DE VIRAJE CON NARANJA DE METILO (METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE AGUAS, NUM. 6). SE USARA UNA SOLUCION PATRON DEL ACIDO EN CASO DE QUE INTERESE DETERMINAR CARBONATOS Y BICARBONATOS.

AÑADIR CUATRO GOTAS DE REACTIVO 5(A).3.1. A LA MUESTRA GUARDADA DESPUES DE LA DETERMINACION DE CARBONATOS-BICARBONATOS. VALORAR, AGITANDO AL MISMO TIEMPO BAJO LUZ BRILLANTE, CON EL REACTIVO 5(A).3.2, USANDO UNA MICROBURETA DE 10 ML HASTA QUE APAREZCA EL PRIMER COLOR ROJO (PARDO ROJIZO) PERMANENTE. LAS CORRECCIONES DEL ENSAYO EN BLANCO VARIAN CON EL VOLUMEN DE LA MUESTRA EN EL PUNTO DE VIRAJE, Y GENERALMENTE AUMENTA REGULARMENTE ENTRE 0,03 A 0,20 ML, SEGUN AUMENTA EL VOLUMEN DE 2 A 12 ML.

(FORMULA OMITIDA)

5 (A).6. OBSERVACIONES.

LOS ACIDOS MINERALES QUE DISUELVEN LOS CROMATOS DE PLATA DEBEN ESTAR AUSENTES. POR TANTO, LA CANTIDAD DE ACIDO AÑADIDA DEBE SER LA ESTRICTAMENTE NECESARIA PARA HACER LA SOLUCION DEBILMENTE ACIDA, EVITANDOSE LA ADICION EN EXCESO. LOS IODUROS, BROMUROS Y BICARBONATOS FORMAN PRECIPITADOS CON NITRATO DE PLATA Y DEBEN ESTAR AUSENTES DE LA MUESTRA. GENERALMENTE, LOS FOSFATOS NO INTERFIEREN, PERO TAMBIEN DEBEN DE EVITARSE CANTIDADES ALTAS DE FOSFATO. LOS MATERIALES ORGANICOS TAMBIEN DEBEN DE ELIMINARSE POR SU TENDENCIA A REDUCIR EL NITRATO DE PLATA EN SOLUCIONES NEUTRAS. EL HIERRO, NORMALMENTE, REACCIONA CON EL CROMATO POTASICO, PRODUCIENDO UN CROMATO INSOLUBLE, PERO LA CANTIDAD DE HIERRO QUE GENERALMENTE SE ENCUENTRA EN LAS MUESTRAS NO INTERFIERE. EN CASO DE QUE SE CREA QUE LA CANTIDAD DE HIERRO ES ALTA, AÑADIR UNAS CUANTAS GOTAS MAS DE INDICADOR PARA ASEGURAR EL EXCESO DE CROMATO.

5(A).7. REFERENCIAS.

1. CHAPMAN, H.D., Y PRATT, P.F.: METHODS OF ANALYSIS FOR SOILS, PLANTS AND WATER, PP.98-100, 1961.

2. REITMEIER, R.F.: SEMIMICROANALYSIS OF SALINE OIL SOLUTIONS. IDNS. AND ENGIN CHEM. ANALYT. ED. 15, PP. 393-402, 1943.

3. STOUT, P.R., Y JOHNSON, C.M.: METHODS OF SOIL ANALYSIS. PART 2, PP.1125-1126. AMERICAN SOCIETY OF AGRONOMY, 1965.

5(B) CLORUROS

(POTENCIOMETRIA)

5(B).1. PRINCIPIO.

VER 5(A).1.

5(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

5(B).2.1. POTENCIOMETRO (PH-METRO).

5(B).2.2. ELECTRODOS DE VIDRIO.

5(B).2.3. ELECTRODOS DE PLATA-CLORURO DE PLATA (AG-CLAG).

5(B).2.4. MICROBURETA DE 5 O 10 ML.

5(B).2.5. AGITADOR MAGNETICO.

5(B).3. REACTIVOS.

5(B).3.1. SUSPENSION DE CLORURO DE PLATA (CLAG). PREPARAR UN PRECIPITADO DE CLAG MEZCLANDO SOLUCIONES 0,1 N DE CLNA Y NO3AG; 500 ML DE CADA SOLUCION SERAN SUFICIENTES PARA PRECIPITAR CLAG PARA MUCHAS DETERMINACIONES. DEBE USARSE UN LIGERO EXCESO DE CLORURO O DE NITRATO PARA PROVOCAR UN BUEN PRECIPITADO. LAVAR BIEN EL PRECIPITADO CON AGUA DESTILADA Y TRANSFERIRLO A UN FRASCO TOPACIO. RENOVAR LA SOLUCIN SOBRENADANTE DIARIAMENTE DURANTE DIEZ DIAS, REEMPLAZANDOLA CON AGUA DESTILADA PARA REMOVER LAS TRAZAS DE LOS EXCESOS DE IONES PLATA O CLORURO. FINALMENTE, COMPLETAR EL VOLUMEN CON AGUA HASTA UN LITRO.

5(B).3.2. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA (NO3AG) O,1 N. DISOLVER 8,5 G DE NO3AG EN AGUA DESTILADA, DILUIR LA SOLUCION EN UN VOLUMEN DE 500 ML Y ALMACENAR EN UN FRASCO TOPACIO.

5(B).3.3. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA (NO3AG) O,1 N. DILUIR 10 ML DE REACTIVO 5(B).3.2. EN 100 ML CON AGUA DESTILADA. COMPROBAR ANTES DE USARLA SU NORMALIDAD VALORANDOLA POTENCIOMETRICAMENTE CON LA SOLUCION CLK (REACTIVO 5(B). 3.4),LIDAD SEGUN SE DESCRIBE MAS ADELANTE.

5 (B).3.4. SOLUCION PATRON DE CLORURO POTASICO (CLK) 0,01 N. DISOLVER 0,746 G DE CLK PURO Y DESECADO EN ESTUFA Y DILUIR HASTA UN LITRO. ESTA SOLUCION ES 0,01 N CON RESPECTO AL CLORURO Y SE USA PARA VALORAR LA SOLUCION NO3AG.

5(B).3.5. SOLUCION SOPORTE DE ELECTROLITO. DISOLVER 101 G DE NITRATO POTASICO (NO3K) RECRISTALIZADO (CALIDAD REACTIVO) EN AGUA, AÑADIR 62 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO (NO3H) Y DILUIR LA SOLUCION EN UN LITRO.

5(B).4. PROCEDIMIENTO.

TRANSFERIR UNA ALICUOTA DE LA SOLUCION PROBLEMA PREFERENTEMENTE QUE CONTENGA MENOS DE 0,1 MEQ DE CLORURO AL VASO DE VALORACION. DILUIR EN AGUA DESTILADA HASTA UN TOTAL DE 25 ML, APROXIMADAMENTE. AÑADIR 2,5 ML DE LA SOLUCION DE ELECTROLITO.

PREPARAR LA SOLUCION DE REFERENCIA AÑADIENDO A 25 ML DE AGUA DESTILADA 2,5 ML DE LA SOLUCION SOPORTE DE ELECTROLITO Y DOS GOTAS DE LA SUSPENSION DE CLAG. SUMERGIR EL JUEGO DE ELECTRODOS DE REFERENCIA, AGITANDO LIGERAMENTE, CERRAR EL CIRCUITO DEL PH-METRO Y ANOTAR EL POTENCIAL OBSERVADO EN MILIVOLTIOS. REEMPLAZAR LA SOLUCION DE REFERENCIA POR LA SOLUCION PROBLEMA QUE CONTENGA LA SOLUCION SOPORTE DE ELECTROLITO. VALORAR AGITANDO SUAVEMENTE CON NO3AG 0,01 N HASTA QUE EL POTENCIAL QUE INDIQUE LA ESCALA DEL POTENCIOMETRO O PH-METRO SEA EL MISMO QUE EL ANOTADO PARA LA SOLUCION REFERENCIA. ANOTAR EL VOLUMEN DE SOLUCION DE NO3AG REQUERIDO.

(FORMULA OMITIDA)

5(B).6. OBSERVACIONES.

5(B).6.1. LOS VASOS DE VALORACION NO DEBEN EXPONERSE A LA LUZ SOLAR DIRECTA DURANTE LA VALORACION, LO QUE PODRIA PORVOCAR UN CAMBIO DE POTENCIA FINAL. LA AGITACION EXCESIVAMENTE RAPIDA TAMBIEN PUEDE CAMBIAR EL POTENCIAL FINAL AÑADIENDO UNA COMPONENTE DE POTENCIAL DE CORRIENTE.

5(B).6.2. EL USO DE LA SOLUCION SOPORTE DE ELECTROLITOS DE ALTA FUERZA IONICA DISPENSA DE CONOCER AL VERDADERO POTENCIAL DE EQUIVALENCIA AL MISMO TIEMPO QUE AHORRA LAS CORRECCIONES NECESARIAS POR DIFERENCIA DE FUERZA IONICA DE LA SOLUCION PROBLEMA O CLASE DE ELECTROLITOS DISUELTOS. EL "POTENCIAL APARENTE DE EQUIVALENCIA" QUE SE OBTIENE ES PRACTICAMENTE INDEPENDIENTE DE LAS VARIACIONES NORMALES AL DIFERENTE CONTENIDO DE SALES SOLUBLES DE LA SOLUCION PROBLEMA.

5(B).6.3. EL PROCEDIMIENTO DESCRITO NO DIFERENCIA ENTRE LOS IONES CLORUROS Y BROMUROS.

5(B).6.4. EXISTEN EN EL MERCADO DIVERSOS EQUIPOS DE VALORACION DE CLORUROS EN LOS QUE LA VALORACION QUEDA AUTOMATICAMENTE INTERRUMPIDA CUANDO SE PRODUCE UN CAMBIO BRUSCO DE POTENCIAL O CONDUCTIVIDAD QUE EQUIVALE A LA PRECIPITACION DE TODOS LOS IONES CL- INICIALMENTE PRESENTES COMO CLAG.

SIMULTANEAMENTE SE EXPRESA DIGITALMENTE LA CONCENTRACION DE CLORUROS EN LA ALICUOTA AÑADIDA A LA SOLUCION SOPORTE, EN LA QUE SE REALIZA LA VALORACION.

5(B).7. REFERENCIAS.

1. FISHER, R.B., Y PETER, D.G.: QUANTITATIVES CHEMICAL ANALYSIS. SAUNDERS, 1968.

2. GOLTERMAN, H.L.: METHODS FOR CHEMICAL ANALYSIS OF FRESH WATERS. TBP HB60. BLACKWELL OXFORD, 1970.

3. KOLTHOFF, I.M., Y KUROLA, P.K.: DETERMINATION OF TRACES OF CHLORIDE. ANAL. CHEM. 23: PP. 1034-1306, 1951.

4. STOUT, P.R., Y JOHNSON, C.M.: METHODS OF SOILS ANALYSIS. PAT 2, PP.1127-1129. AMERICAN SOCIETY OF AGRONOMY, 1965.

6. ALCALINIDAD

6.1. PRINCIPIO.

SE DETERMINA POR VALORACION CON UNA SOLUCION VALORADA EN UN ACIDO MINERAL FUERTE A LOS PUNTOS DE EQUIVALENCIA DEL BICARBONATO (PH 8,3) Y ACIDO CARBONICO (ENTRE PH 4,2 Y 5,4), BIEN SEA POTENCIOMETRICAMENTE O POR MEDIO DE INDICADORES. EL SEGUNDO PUNTO DE EQUIVALENCIA INDICA LA ALCALINIDAD TOTAL DE LA MUESTRA, QUE PUEDE SER DEBIDA A LOS SIGUIENTES IONES: HIDROXIDO, CARBONATOS Y BICARBONATOS.

EL PH AL QUE SE PRODUCE DICHA EQUIVALENCIA DEPENDE DE LA CANTIDAD DE CO2 EN SOLUCION. PARA UNA MUESTRA DADA LA ELIMINACION DEL CO2 EN SOLUCION CUANDO LA VALORACION SE REALICE EN ATMOSFERA DE NITROGENO O CUANDO SE HIERVE EN LAS PROXIMIDADES DEL PUNTO DE VIRAJE PARA SUPRIMIR EL CO2, PRODUCE UN CAMBIO MAS BRUSCO DEL POTENCIAL O DEL COLOR, PERO LA POSICION DEL PUNTO DE VIRAJE NO CAMBIA.

SUPONIENDO QUE LAS CANTIDADES PRESENTES EN EL AGUA DE SIO4H3, BO3H2, NH4, SH- Y CO3CA COLOIDAL O EN SUSPENSION SEAN DESPRECIABLES, CON LAS VALORACIONES MENCIONADAS SE PUEDEN DETERMINAR LAS CONCENTRACIONES INDIVIDUALES DE HIDROXIDOS, CARBONATOS Y BICARBONATOS.

6.2. MATERIAL Y APARATOS.

6.2.1. MATRACES ERLENMEYER DE 200 ML.

6.2.2. PIPETA.

6.2.3. BURETA.

6.2.4. POTENCIOMETRO.

6.3. REACTIVOS.

6.3.1. ACIDO SULFURICO O CLORHIDRICO 0,1 N O 0,05 N, SEGUN LA ALCALINIDAD PREVISTA DE LA MUESTRA.

6.3.2. INDICADOR DE FENOLFTALEINA: DISOLVER 0,5 G DE FENOLFTALEINA EN 50 ML DE ETANOL DE 95 POR 100 Y AÑADIR 50 ML DE AGUA. AÑADIR GOTA A GOTA SOLUCION DE NAOH 0,05 N LIBRE DE C02 HASTA QUE EL COLOR SE VUELVA DEBILMENTE ROSADO.

6.3.3. INDICADOR DE ANARANJADO DE METILO AL 0,05 POR 100 DE AGUA.

6.4. PROCEDIMIENTO.

TOMAR UNA ALICUOTA QUE CONTENGA MENOS DE 1 MEQ DE ALCALINIDAD TOTAL Y DILUIR HASTA 50 ML CON AGUA SI FUESE NECESARIO. AÑADIR DOS GOTAS DE 6.3.2. SI SE PRODUCE COLOR; VALORAR CON 6.3.1 HASTA QUE DESAPAREZCA EL MISMO. AÑADIR DOS GOTAS DE 6.3.3 Y CONTINUAR LA VALORACION CON 6.3.2 HASTA EL PUNTO DE VIRAJE DEL ANARANJADO DE METILO. CASO DE QUE EXISTA DIFICULTAD EN APRECIAR EL VIRAJE, DETENER LA VALORACION EN LAS PROXIMIDADES DEL MISMO, HERVIR EL MATRAZ DURANTE UNOS MINUTOS, DEJAR ENFRIAR Y CONTINUAR LA VALORACION.

HACER UN ENSAYO EN BLANCO CON LOS REACTIVOS Y 50 ML DE AGUA Y RESTAR DE LOS ANTERIORES VALORES LOS ENCONTRADOS EN ESTE ENSAYO, CASO DE QUE FUESEN APRECIABLES.

EN CASO DE UTILIZAR POTENCIOMETRO, LA PRIMERA VALORACION DE LA MUESTRA SE HARA HASTA PH = 3,8 Y LA SEGUNDA HASTA PH = 4,0.

(FORMULA OMITIDA)

6.6. OBSERVACIONES.

TODOS LOS REACTIVOS, ASI COMO EL AGUA USADA EN DILUCIONES Y ENSAYOS EN BLANCO, DEBEN OBTENER UN BAJO CONTENIDO EN CO2, PARTICULARMENTE CUANDO SE TRATE DE MUESTRAS CON ALCALINIDAD BAJA. LA ELIMINACION DEL CO2 DISUELTO EN EL AGUA PUDE CONSEGUIRSE MEDIANTE CUALQUIERA DE LOS DOS PROCEDIMIENTOS SIGUIENTES:

1) REDUCIR LA PRESION DURANTE DIEZ A QUINCE MINUTOS CON UNA TROMPA DE AGUA.

2) HERVIR DURANTE DIEZ A QUINCE MINUTOS Y DEJAR ENFRIAR EN UN ERLENMEYER CON TAPON.

6.7. REFERENCIA.

1. GOLTERMAN, H.L.: METHODS FOR CHEMICAL ANALYSIS OF FRESH WATERS. IBP HANDBOOK NO.8, BLACK WELL SCIENTIF. PUBLICATIONS. OXFORD, 1970.

7. CALCIO

7.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DIRECTA POR ABSORCION ATOMICA.

7.2. MATERIAL Y APARATOS.

7.2.1. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

7.2.2. LAMPARA PARA DETERMINAR CALCIO.

7.2.3. MATRACES AFORADOS DE 50, 100 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

7.3. REACTIVOS.

7.3.1. SOLUCION PATRON DE CA DE 0,05 N.

DISOLVER 2,500 G DE OXIDO DE LANTANO EN 300 CC DE CLH (1:1); AÑADIR LENTAMENTE Y CON CUIDADO. COMPLETAR HASTA UN LITRO CON AGUA DESTILADA.

7.4. PROCEDIMIENTO.

7.4.1. OBTENCION DE LA CURVA DE CALIBRADO.

PREPARAR A PARTIR DE 7.3.1 SOLUCIONES DE CA CONTENIENDO 1,0 MEQ, O,2 MEQ. A CADA UNA DE ELLAS SE LES ADICIONA CON 40 CC DE 7.3.2. MEDIR A CONTINUACION, EN EL ESPECTROFONOMETRO DE ABSORCION ATOMICA, LAS SOLUCIONES DE CALIBRADO A 422,7 NM UTILIZANDO LLAMA DE AIRE-ACETILENO. CON LAS LECTURAS OBTENIDAS SE TRAZA LA CORRESPONDIENTE CURVA DE CALIBRADO.

7.4.2. VALORACION.

INTRODUCIR EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML, 25 ML DE LA MUESTRA Y AÑADIR 2 ML DE SOLUCION DE LANTANO 7.3.2. COMPLETAR A 50 ML CON AGUA DESTILADA. CONTINUAR COMO EN 7.4.1.

7.5. CALCULOS.

EXPRESAR LOS RESULTADOS INDISTINTAMENTE EN MEQ O EN MG DE CA POR LITRO DE AGUA LOS QUE SE OBTIENEN A PARTIR DE LA CURVA DE CALIBRADO, TENIENDO EN CUENTA LA ALICUOTA DE MUESTRA UTILIZADA.

8. MAGNESIO

8.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DIRECTA POR ABSORCION ATOMICA.

8.2. MATERIAL Y APARATOS.

8.2.1. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

8.2.2. LAMPARA PARA DETERMINAR MAGNESIO.

8.2.3. MATRACES AFORADOS DE 50, 100 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

8.3. REACTIVOS.

8.3.1. SOLUCION PATRON DE MAGNESIO 0,05 N.

ATACAR 0,600 G DE METAL PURO CON 30 CC DE CLH (1:3), QUE SE AÑADE LENTAMENTE Y CALENTANDO CON SUAVIDAD. UNA VEZ DISUELTO Y FRIO EL CONJUTO, COMPLETAR HASTA UN LITRO CON AGUA DESTILADA.

8.3.2. SOLUCION DE LANTANO AL 6,5 POR 100.

DISOLVER 76,22 G DE OXIDO DE LANTANO EN 300 CC DE CLH (1:1); AÑADIR LENTAMENTE Y CON CUIDADO. COMPLETAR HASTA UN LITRO CON AGUA DESTILADA.

8.4. PROCEDIMIENTO.

8.4.1. OBTENCION DE LA CURVA DE CALIBRADO.

PREPARAR A PARTIR DE 8.3.1 SOLUCIONES DE MAGNESIO CONTENIENDO 1,0 MEQ, 0,5 MEQ. 0,1 MEQ. A CADA UNA DE ELLAS SE LES ADICIONA CON 40 CC DE LA 8.3.2. MEDIR A CONTINUACION EN EL ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA, LAS SOLUCIONES DE CALIBRADO Y 285,2 NM UTILIZANDO LLAMA DE AIRE-ACETILENO. CON LAS LECTURAS OBTENIDAS SE TRAZA LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON.

8.4.2. VALORACION.

INTRODUCIR EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML, 25 ML DE LA MUESTRA Y AÑADIR 2 ML DE SOLUCION DE LANTANO 8.3.2. COMPLETAR A 50 ML CON AGUA DESTILADA. CONTINUAR COMO EN 8.4.1.

8.5. CALCULOS.

EXPRESAR LOS RESULTADOS INDISTINTAMENTE EN MEQ O EN MG DE AGUA, LOS QUE SE OBTINEN A PARTIR DE LA CURVA DE CALIBRADO, TENIENDO EN CUENTA LA ALICUOTA DE MUESTRA UTILIZADA.

9(A) NITRATOS

(METODO COLORIMETRICO)

9(A).1. PRINCIPIO.

REACCION DE LOS NITRATOS CON LA BRUCINA EN MEDIO SULFURICO Y POSTERIOR MEDIDA DEL COLOR PRODUCIDO.

9(A).2. MATERIAL Y APARATOS.

9(A).2.1. ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO APTOS PARA LECTURAS ENTRE 400 Y 425 NM.

9(A).2.2. PIPETA DE SEGURIDAD.

9(A).3. REACTIVOS.

9(A).3.1. SOLUCION PATRON DE NITRATO. DISOLVER 0,1629 G DE NITRATO POTASICO ANHIDRO EN AGUA DESTILADA Y DILUIR A UN LITRO. 1 ML DE ESTA SOLUCION CONTIENE 0,1 MG DE N03-.

9(A).3.2. REACTIVO BRUCINA-ACIDO SULFANILICO. DISOLVER 1,0 DE BRUCINA Y 0,1 G DE ACIDO SULFANILICO EN UNOS 70 ML DE AGUA DESTILADA CALIENTE, AÑADIR 3 ML DE ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO, DEJAR ENFRIAR Y DILUIR HASTA 100 ML CON AGUA DESTILADA.

9(A).3.3. SOLUCION DE ACIDO SULFURICO. AGREGAR CON CUIDADO 500 ML DE ACIDO SULFURICO CONCENTRADO A 75 ML DE AGUA DESTILADA.

9(A).4. PROCEDIMIENTO.

9(A).4.1. CONSTRUCCION DE LA CURVA PATRON. TOMAR PARTES ALICUOTAS DE 9(A).3.1. Y SOMETERLAS AL PROCEDIMIENTO DESCRITO EN 9(A).4.2.

9(A).4.2. DETERMINACION.

INTRODUCIR EN UN MATRAZ AFORADO DE 509 ML, 2,0 ML DE LA MUESTRA. AÑADIR, MEDIANTE PIPETA DE SEGURIDAD, 1,0 ML DE 9(A).3.2, Y A CONTINUACION 10 ML DE 9(A).3.3. MEZCLAR BIEN Y DEJAR EN LA OSCURIDAD 10 +- 1 MINUTOS. PASADO ESTE TIEMPO, AÑADIR, AGITANDO, AGUA DESTILADA HASTA 40 ML Y DEJAR EN LA OSCURIDAD DURANTE 15 +- 1 MINUTOS. A CONTINUACION COLOCAR EL MATRAZ EN UN VASO CON AGUA, DEJANDOLO EN LA OSCURIDAD HASTA QUE ADQUIERA LA TEMPERATURA AMBIENTE (GENERALMENTE QUINCE MINUTOS). ACTO SEGUIDO ENRASAR EL MATRAZ CON AGUA DESTILADA, HOMOGENEIZAR EL CONJUNTO, LLEVAR AL FOTOMETRO Y LEER A 410 NM EN CUBETA DE 1 CM DE PASO DE LUZ. EL VALOR 100 DE TRANSMITANCIA SE OBTIENE CON 2 ML DE AGUA DESTILADA SOMETIDA AL MISMO PROCEDIMIENTO INDICADO.

9(A).5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN NITRATOS MEDIANTE COMPARACION CON LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON, TENIENDO EN CUENTA EL FACTOR DE DILUCION.

9(A).6. OBSERVACIONES.

9(A).6.1. EN LAS CONDICIONES CITADAS SE PUEDEN MEDIR CONCENTRACIONES DE N03- COMPRENDIDAS ENTRE 5 Y 50 MG DE NO3- POR LITRO. SI SE DESEA MEDIR CONCENTRACIONES INFERIORES A LA MINIMA CITADA, PUEDE CONCENTRARSE LA MUESTRA O EMPLEAR CUBETAS DE 2 O 4 CM DE PASO DE LUZ. INVERSAMENTE, SI DE LO QUE SE TRATA ES DE MEDIR CONCENTRACIONES SUPERIORES A LA MAXIMA QUE ADMITE EL PROCEDIMIENTO, SE PUEDE DILUIR LA MUESTRA O EMPLEAR CUBETAS DE 0,5 CM DE PASO DE LUZ.

9(A).6.2. LOS IONES FE++, FE+++ Y MN4+ PUEDEN INTERFERIR LIGERAMENTE SI SU CONCENTRACION E SUPERIOR A 1 MG/1.

9(A).7. REFERENCIAS.

1. STANDARD METHOD, 14. ED., 1975, 427.

2. AOAC METHOD, 12. ED., 1975, 614.

9(B). NITRATOS

(METODO POR ULTRAVIOLETA)

9(B).1. PRINCIPIO.

ABSORCION DE LA RADIACION ULTRAVIOLETA POR EL ION NITRATO.

9(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

9(B).2.1. ESPECTROFOTOMETRO APTO PARA LECTURAS A 220 Y 275 NM.

9(B).2.2. MATRAZ AFORADO DE 50 ML.

9(B).2.3. PIPETA GRADUADA DE 25 ML.

9(B).3. REACTIVOS.

9(B).3.1. AGUA DESIONIZADA Y DESTILADA POSTERIORMENTE EN APARATO DE VIDRIO: SU EMPLEO ES NECESARIO PARA LA PREPARACION DE TODAS LAS SOLUCIONES Y DILUCIONES.

9(B).3.2. SOLUCION PATRON DE NITRATO. DISOLVER 0,7218 G DE NO3 K EN AGUA Y DILUIR A UN LITRO. ESTA SOLUCION CONTIENE 100 MG DE N POR LITRO (SOLUCION A). DILUIR 100 ML DE LA SOLUCION A A 1.000 ML CON AGUA, 1 ML CONTIENE 10 MICROGRAMOS DE N O 44,3 MICROGRAMOS DE NO3-.

9(B).3.3. SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO 1 N.

9(B).3.4. SUSPENSION DE HIDROXIDO DE ALUMINIO. DISOLVER 125 G DE ALUMBRE DE POTASIO EN UN LITRO DE AGUA. CALENTAR A 60 GRADOS C Y AÑADIR 5 ML DE NH3, LENTAMENTE Y CON AGITACION. DESPUES DE DEJAR LA MEZCLA EN REPOSO POR ESPACIO DE UNA HORA, LLEVARLA A UN VASO DE DOS LITROS Y LAVAR EL PRECIPITADO POR SUCESIVAS ADICIONES Y DECANTACIONES CON AGUA, HASTA ELIMINACION DE LOS IONES CLORURO, NITRATO, NITRITO Y AMONIO. FINALMENTE, DESPUES DE LA SEDIMENTACION, DECANTAR TANTO LIQUIDO COMO SEA POSIBLE, RESERVANDO SOLAMENTE LA SUSPENSION CONCENTRADA.

9(B).4. PROCEDIMIENTO.

9(B).4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA. SI SE SOSPECHA QUE LA MUESTRA DE AGUA CONTIENE INTERFERENCIAS ORGANICAS O ES COLOREADA, AÑADIR 4 ML DE LA SUSPENSION DE HIDROXIDO ALUMINICO A CADA 100 ML DE MUESTRA EN UN ERLENMEYER. AGITAR Y DEJAR SEDIMENTAR DURANTE CINCO MINUTOS. PASAR A TRAVES DE UN FILTRO DE MEMBRANA DE 0,45 MICRAS PREVIAMENTE LAVADO CON 200 ML DE AGUA.

A 50 ML DE LA MUESTRA CLARIFICADA COMO SE EXPRESA ANTERIORMENTE O A 50 ML DE LA MUESTRA FILTRADA POR METODOS CONVENCIONALES. AÑADIR 1 ML DE HCL 1 N Y AGITAR.

9(B).4.2. CONSTRUCCION DE LA CURVA PATRON. TOMAR PARTES ALICUOTAS DE 9(B).3.2. Y SOMETERLAS AL PROCEDIMIENTO DESCRITO EN 9(B).4.3. LA CONCENTRACION ESTARA COMPRENDIDA ENTRE O Y 30 MG/1 DE NO3-.

9(B).4.3. DETERMINACION. LEER EN EL ESPECTROFOTOMETRO A 220 NM PARA OBTENER LA LECTURA CORRESPONDIENTE A LOS NITRATOS Y A 275 NM PARA OBTENER LA INTERFERENCIA DEBIDA A LA MATERIA ORGANICA DISUELTA. EL VALOR CERO DE ABSORBANCIA A 100 DE TRANSMITANCIA SE OBTIENE CON AGUA 9(B).3.1. SOMETIDA AL MISMO PROCEDIMIENTO INDICADO.

9(B).5. CALCULOS.

RESTAR LA LECTURA A 275 NM MULTIPLICADA POR DOS DE LA LECTURA A 220 NM PARA OBTENER LA ABSORBANCIA DEBIDA AL ION NITRATO.

CALCULAR EL CONTENIDO EN NITRATO MEDIANTE COMPARACION CON LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON, TENIENDO EN CUENTA EL FACTOR DE DILUCION.

9(B).6. OBSERVACIONES.

9(B).6.1. INTERFIEREN LA MATERIA ORGANICA, CARBONATOS, NITRITOS, CROMO HEXAVALENTE Y DETERGENTES ANIONICOS. LOS CARBONATOS SE ELIMINARON AL AÑADIR HCL; LA MATERIA ORGANICA, AL RESTAR SU ABSORBANCIA DE LA DEL MITRATO. CUANDO SE CONOCEN LAS CANTIDADES PRESENTES EN LA NUESTRA DE NITRITOS, CROMO HEXAVALENTE Y DETERGENTES ANIONICOS HAY QUE CONSTRUIR LAS CORRESPONDIENTES CURVAS DE CORRECCION PARA CADA UNA DE ESTAS SUSTANCIAS POR MEDIDA DE SUS ABSORBANCIAS A 22 NM. EL ION NITRITO SE PUEDE TAMBIEN OXIDAR A NITRATO CON AGUA OXIGENADA DE 110 VOLUMENES, TENIENDOLO EN CUENTA EN LOS CALCULOS.

9(B).7. REFERENCIA.

1. STANDARD METHODS (APHA, AWWA Y WPCF), 13. EDICION, 1971, 237.

10(A) AMONIO

(METODO DEL REACTIVO DE NESSLER)

10(A).1. PRINCIPIO.

EL REACTIVO DE NESSLER (I2HG 2 IK) PRODUCE CON EL AMONIACO UN COMPLEJO AMARILLO-PARDO CUYA INTENSIDAD DE COLOR PUEDE MEDIRSE.

10(A).1. MATERIAL Y APARATOS.

10(A)2.1. ESPECTROFOTOMETRO O FOTOCOLORIMETRO APTO PARA LECTURAS ENTRE 400 Y 425 NM.

10(A)2.2. EQUIPO DE DESTILACION CON CORRIENTE DE VAPOR DE AGUA.

10(A).3. REACTIVOS.

10(A).3.1. OXIDO DE MAGNESIO, EXENTO DE AMONIACO.

10(A).3.2. SOLUCION DE ACIDO BORICO AL 2 POR 100.

10(A).3.3. REACTIVO NESSLER. DISOLVER 100 G DE I2HG ANHIDRO Y 70 G DE IK ANHIDRO EN EL MINIMO VOLUMEN DE AGUA POSIBLE. AGREGAR ESTA DISOLUCION LENTAMENTE Y AGITANDO A UNA SOLUCION FRIA DE 160 G DE NAOH EN 500 ML DE AGUA. DILUIR EL CONJUNTO HASTA UN LITRO CON AGUA. ESTE REACTIVO DEBE DAR EL COLOR AL CARACTERISTICO CON 0,1 MG/1 DE NH3 DENTRO DE LOS DIEZ MINUTOS SIGUIENTES A SU ADICION Y NO PRODUCIR PRECIPITADO CON 1 MG/A DE NH3 EN UN ESPACIO DE TIEMPO DE DOS HORAS.

10.(A).3.4. SOLUCION MADRE DE NH4+. DILUIR 0,367 G DE SULFATO AMONICO EN AGUA HASTA UN LITRO.

10(A).3.5. SOLUCION PATRON DE NH4+. DILUIR 100 ML DE 10(A)3.4. CON AGUA HASTA UN LITRO. 1 ML CONTIENE 0,01 MG DE NH4+.

10(A).4. PROCEDIMIENTO.

10(A)4.1. CONSTRUCCION DE LA CURVA PATRON. TOMAR PARTES ALICUOTAS DE 10(A).3.5. Y SOMETERLAS AL PROCEDIMIENTO DESCRITO EN 10(A).4.2. TENIENDO EN CUENTA LA CANTIDAD DE MUESTRA QUE SE UTILIZO EN LA DESTILACION Y EL VOLUMEN FINAL DEL DESTILADO.

10(A).4.2. DETERMINACION.

PONER EN MARCHA EL EQUIPO DE DESTILACION HACIENDO PASAR POR EL MISMO VAPOR DE AGUA DURANTE CINCO MINUTOS, AL MENOS, PARA ELIMINAR DEL EQUIPO POSIBLES TRAZAS DE AMONIACO. COLOCAR A CONTINUACION EN EL MATRAZ DE DESTILACION UNA CANTIDAD EXACTAMENTE MEDIDA DE LA MUESTRA (250-300 ML), 0,5 G DE MGO (10 (A).3.1.), PONER EN MARCHA EL EQUIPO RECOGIENDO EL DESTILADO EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 100 ML, EN EL QUE SE HAN COLOCADO 5 ML DE SOLUCION DE ACIDO BORICO (10 (A).3.2.). CUANDO HAN DESTILADO ALREDEDOR DE 50 ML, COMPROBAR SI EL DESTILADO ESTA YA LIBRE DE AMONIACO, Y SI ES ASI, SUSPENDER LA OPERACION, LLEVANDO EL DESTILADO A 100 ML CON AGUA DESTILADA EN MATRAZ AFORADO. TOMAR 50 ML, DE LA SOLUCION ANTERIOR, AÑADIR 1 ML DE REACTIVO NESSLER (10(A).3.3.) Y MEZCLAR EL CONJUNTO, PASADOS DIEZ MINUTOS, LLEVAR AL ESPECTROFOTOMETRO DONDE SE LEE LA ABSORBANCIA A 410-425 NM EN CUBETA DE 1 CM DE PASO DE LUZ. COMO PATRON CERO UTILIZAR 50 CM DE AGUA SOMETIDOS AL MISMO TRATAMIENTO QUE LA MUESTRA.

10(A).5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN AMONIACO MEDIANTE COMPARACION CON LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON, TENIENDO EN CUENTA EL FACTOR DE DILUCION.

10(A).6. OBSERVACIONES.

10(A).6.1. EN LAS CONDICIONES CITADAS SE PUEDEN MEDIR CONCENTRACIONES DE AMONIACO COMPRENDIDAS ENTRE 0,05 Y 0,5 MILIGRAMOS DE NH4+ POR LITRO. SI SE DESEA MEDIR CONCENTRACIONES INFERIORES A LA MINIMA CITADA, SE PUEDEN EMPLEAR CUBETAS DE 2 A 4 CM DE PASO DE LUZ. SI SE TRATA DE MEDIR CONCENTRACIONES SUPERIORES A LA MAXIMA QUE ADMITE EL PROCEDIMIENTO, DILUIR LA MUESTRA O EMPLEAR CUBETAS DE 0,5 CM DE PASO DE LUZ.

10(A).7. REFERENCIAS.

1. STANDARD METHODS (APHA, AWWA, WPCF), 14. EDICION, 1975, 412.

2. AOAC METHODS, 12. EDICION, 1975, 614.

10(B). AMONIO

(METODO VOLUMETRICO)

10(B).1. PRINCIPIO.

EL AMONIACO DESTILADO DE LA MUESTRA SE RECOGE SOBRE ACIDO BORICO CON UN INDICADOR ADECUADO Y SE VALORA CON ACIDO SULFURICO DE NORMALIDAD CONOCIDA.

APLICABLE A CONCENTRACIONES SUPERIORES DE 2 MG/1 DEL ION AMONIO

10(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

10(B).2.1. EQUIPO DE DESTILACION CON CORRIENTE DE VAPOR DE AGUA.

10(B).3. REACTIVOS.

10(B).3.1. OXIDO DE MAGNESIO, EXENTO DE AMONIACO.

10(b).3.2. SOLUCION DE ACIDO BORICO AL 2 POR 100.

10(B)3.3. INDICADOR DE TSHIRO TASIRO. DISOLBER 0,125 G DE ROJO DE METILO Y 0,080 G DE AZUL DE METILENO EN 100ML DE ALCOHOL DE 96.

10(B).3.4. ACIDO SULFURICO 0,005 N.

10(B).4. PROCEDIMIENTO.

PONER EN MARCHA EL EQUIPO DE DESTILACION HACIENDO PASAR POR EL MISMO VAPOR DE AGUA DURANTE CINCO MINUTOS AL MENOS, PARA ELIMINAR DEL EQUIPO POSIBLES TRAZAS DE AMONIACO. COLOCAR A CONTINUACION EN EL MATRAZ 250 ML DE MUESTRA, 1 G DE MGO (10(B).3.1.) Y PONER EN MARCHA EL EQUIPO, RECOGIENDO EL DESTILADO EN UN MATRAZ ERLENMEYER DE 250 ML EN EL QUE SE HAN COLOCADO 10 ML DE SOLUCION DE ACIDO BORICO 10(B).3.2. Y DOS GOTAS DEL INDICADOR 10(B).3.3. COMPROBAR, CUANDO HAN DESTILADO ALREDEDOR DE 50 ML, SI EL DESTILADO ESTA YA LIBRE DE AMONIACO, Y SI ES ASI BAJAR EL ERLENMEYER PARA QUE EL PICO DEL DESTILADOR QUEDE POR ENCIMA DEL LIQUIDO YA DESTILADO; CONTINUAR LA OPERACION DOS MINUTOS MAS. ACTO SEGUIDO, VALORAR EL DESTILADO CON ACIDO SULFURICO 10(B).3.4. EL INDICADOR VIRA EN EL PUNTO ESTEQUIOMETRICO DE VERDE A VIOLETA.

10(B).5. CALCULOS.

EL CONTENIDO DE LA MUESTRA, EXPRESADO EN MG DE NH4 POR LITRO, SE OBTIENE APLICANDO LA SIGUIENTE EXPRESION:

NH4+ (MG/L) = A.F.0,09.4

A = VOLUMEN, EN ML, DE ACIDO SULFURICO GASTADO EN LA VALORACION.

F = FACTOR DE CORRECCION DE LA NORMALIDAD DEL ACIDO.

10(B).6. REFERENCIAS.

1. STANDARD METHODS (APHA, AWWA, WPCF), 14. EDICION, 1975, 427.

2. AOAC METHODS, 12. EDICION 1975, 514.

11 NITRITOS

11.1. PRINCIPIO. REACCION CON EL ACIDO SULFANILICO EN MEDIO CLORHIDRICO Y POSTERIOR MEDIDA ESPECTROFOTOMETRICA DEL COLOR DESARROLLADO.

11.2. MATERIAL Y APARATOS.

11.2.1. ESPECTROFOTOMETRO QUE PERMITA LECTURAS A 425 NM.

11.3. REACTIVOS.

11.3.1. REACTIVOS DE ZAMBELLI. DILUIR 260 ML DE ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO CON 500 ML DE AGUA DESIONIZADA. AÑADIR 5,0 GRAMOS DE ACIDO SULFANILICO Y 7,5 G DE FENOL, CALENTANDO SUAVEMENTE HASTA DISOLUCION. DEJAR ENFRIAR Y AGREGAR 135 G DE CLORURO AMONICO. CUANDO TODO ESTA DISUELTO, COMPLETAR HASTA 1 LITRO CON AGUA DESIONIZADA.

11.3.12. AMONICACO CONCENTRADO (D = 0,925).

11.3.3. SOLUCION PATRON DE NITRITOS. DISOLVER 0,345 G DE NO2NA EN AGUA DESIONIZADA HASTA 1 LITRO; 1 ML EQUIVALE A 0,230 MG DE NO2-. ESTA SOLUCION SE CONSERVARA HASTA UN MES AÑADIENDOLE 1 ML DE CLOROFORMO Y MANTENIENDOLA EN REFRIGERADOR. EN CASO CONTRARIO, DEBERA PREPARARSE CADA VEZ QUE SE VAYA A UTILIZAR.

11.4. PROCEDIMIENTO.

11.4.1. CURVA PATRON. PREPARAR LAS SOLUCIONES NECESARIAS A PARTIR DE 11.3.3 MEDIANTE UNA O MAS DILUCIONES LLEVADAS A 50 ML CON AGUA DESIONIZADA Y SOMETIDAS A IGUAL TRATAMIENTO DE LA MUESTRA. COMO BLANCO, USAR 50 ML DE AGUA DESIONIZADA SOMETIDOS A IDENTICO TRATAMIENTO QUE LA MUESTRA.

11.4.2. TOMAR 50 ML DE LA MUESTRA EN UN VASO Y AÑADIR MEDIANTE PIPETA 2 ML DEL REACTIVO 11.3.1. MEZCLAR BIEN Y ESPERAR DURANTE DIEZ MINUTOS. A CONTINUACION AÑADIR CON PIPETA 2 ML DE 11.3.2. HOMOGENEIZAR EL CONJUNTO Y ESPERAR CINCO MINUTOS. LLEVAR LA SOLUCION AL ESPECTROFOTOMETRO Y LEER LA ABSORBANCIA A 425 NM EN CUBETA DE 1 CM DE PASO DE LUZ. EL COLOR ES ESTABLE VEINTICUATRO HORAS.

11.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

PARTIENDO DE LOS VALORES DE ABSORBANCIA OBTENIDOS, HALLAR, MEDIANTE LA CURVA PATRON, LA CONCENTRACION DE NO2-EN LA MUESTRA.

12. SODIO

(POR FOTOMETRIA DE LLAMA)

12.1 PRINCIPIO.

ASPIRACION DIRECTA DE LA MUESTRA A LA LLAMA Y LECTURA A 586 NM.

12.2. MATERIAL Y APARATOS.

12.2.1. ESPECTROFOTOMETRO O FOTOMETRO DE LLAMA, APTOS PARA EFECTUAR LECTURAS A 586 NM.

12.3. REACTIVOS.

12.3.1. SOLUCION DE 1.000 MG NA/L. PESAR 2,542 G DE CLORURO SODICO, PREVIAMENTE DESECADO, Y DISOLVER EN AGUA DESIONIZADA, COMPLETANDO HASTA 1 LITRO.

12.3.2. SOLUCIONES PATRONES DE 10, 20, 40, 60, 80 Y 100 MILIGRAMOS NA/L. DILUIR PARTES ALICUOTAS DE LA SOLUCION ANTERIOR A VOLUMEN CONVENIENTE.

12.3.3. SOLUCIONES PATRONES DE 1, 2, 4, 6, 8, Y 10 MG NA/L. DILUIR PARTES ALICUOTAS DE LAS SOLUCIONES ANTERIORES A VOLUMEN CONVENIENTE.

12.4. PROCEDIMIETO.

DEJAR ESTABILIZAR EL APARATO. SELECCIONAR LA LONGITUD DE ONDA ASPIRANDO A LA LLAMA ADECUADA LA SOLUCION PATRON DE 100 MILIGRAMOS NA/L Y RECORRER CUIDADOSAMENTE LAS PROXIMIDADES DE LA LONGITUD DE ONDA TEORICA DEL SODIO HASTA ENCONTRAR AQUELLA EN QUE SE LOGRA LA MAXIMA RESPUESTA.

OBTENER LAS CURVAS DE CALIBRADO CON LA ESCALA DE PATRONES Y A CONTINUACION ASPIRAR LA MUESTRA Y EFECTUAR LA LECTURA.

12.5. EXPRESION DE LOS RESULTADOS.

EN MG O MEQ DE NA POR LITRO DE AGUA.

12.6. OBSERVACIONES.

12.6.1. PARA REDUCIR LAS POSIBLES INTERFERENCIAS, AÑADIR A LA MUESTRA Y A LAS SOLUCIONES PATRONES LITIO Y OTRO ELEMENTO FACILMENTE IONIZABLE HASTA UNA CONCENTRACION DEL ORDEN DE 1.500 PPM.

12.6.2. CON DETERMINADO INSTRUMENTAL ES NECESARIO UTILIZAR PATRONES MAS DILUIDOS.

12.7. REFERENCIAS.

1. STANDARD METHODS (APHA, AWWA, WPCF), 14. EDICION, 1975.

2. INSTITUTO DE HIDROLOGIA: "NORMAS ANALITICAS DE LAS AGUAS". MADRID, 1975.

13. POTASIO

(POR FOTOMETRIA DE LLAMA)

13.1. PRINCIPIO.

ASPIRACION DIRECTA DE LA MUESTRA A LA LLAMA Y LECTURA A 765 NM.

13.2. MATERIAL Y APARATOS.

13.2.1. ESPECTROFOTOMETRO O FOTOMETRO DE LLAMA, APTO PARA EFECTUAR LECTURAS A 765 NM.

13.2. REACTIVOS.

13.3.1. SOLUCION DE 1000 MG K/L, PESAR 1,907 G DE CLORURO POTASICO, PREVIAMENTE DESECADO, Y DISOLVER EN AGUA DESIONIZADA, COMPLETANDO HASTA 1 LITRO.

13.3.2. SOLUCIONES PATRONES DE 10, 20, 40, 60, 80 Y 100 MILIGRAMOS K/L DISOLVER ALICUOTAS DE LA SOLUCION ANTERIOR A VOLUMEN CONVENIENTE.

13.3.3. SOLUCIONES PATRONES DE 1, 2, 4, 6, 8, Y 10 MG K/L. DILUIR PARTES ALICUOTAS DE LAS SOLUCIONES ANTERIORES A VOLUMEN CONVENIENTE.

13.4. PROCEDIMIENTO.

DEJAR ESTABILIZAR EL APARATO. SELECCIONAR LA LONGITUD DE ONDA ASPIRANDO A LA LLAMA ADECUADA LA SOLUCION PATRON DE 100 MILIGRAMOS K/L Y RECORRER CUIDADOSAMENTE LAS PROXIMIDADES DE LA LONGITUD DE ONDA TEORICA DEL POTASIO HASTA ENCONTRAR AQUELLA EN QUE SE LOGRA LA MAXIMA RESPUESTA.

OBTENER LAS CURVAS DE CALIBRADO CON LA ESCALA DE PATRONES Y A CONTINUACION ASPIRAR LA MUESTRA Y EFECTUAR LA LECTURA.

13.5. EXPRESION DE LOS RESULTADOS.

EN MG O MEQ DE K POR LITRO DE AGUA.

13.6. OBSERVACIONES.

13.6.1. PARA REDUCIR LAS POSIBLES INTERFERENCIAS, AÑADIR A LA MUESTRA Y A LAS SOLUCIONES PATRONES LITIO Y OTRO ELEMENTO FACILMENTE IONIZABLE HASTA UNA CONCENTRACION DEL ORDEN DE 1.500 PPM.

13.6.2. CON DETERMINADO INSTRUMENTAL ES NECESARIO UTILIZAR PATRONES MAS DILUIDOS.

13.7. REFERENCIAS.

1. STANDARD METHODS (APHA, AWWA, WPCF), 14. EDICION, 1975.

2. INSTITUTO DE HIDROLOGIA: "NORMAS ANALITICAS DE LAS AGUAS". MADRID, 1975.

ANEJO IX

METODOS DE ANALISIS DE PRODUCTOS DERIVADOS DE LA UVA

VINOS

42. INVESTIGACION DE DERIVADOS MONOHALOGENADOS DEL ACIDO ACETICO

42.1. PRINCIPIO.

EXTRACION DE LOS DERIVADOS MONOHALOGENADOS DEL ACIDO ACETICO CON ETER SULFURICO PREVIAMENTE ACIDIFICADO. FORMACION DE TIOINDIGO, DE COLOR ROJO, QUE SE EXTRAE CON CLOROFORMO.

EL METODO PERMITE DETECTAR DE 1,5 A 2 MG/L DE ACIDO MONOCLOROACETICO Y LAS CANTIDADES CORRESPONDIENTES DE OTROS DERIVADOS NONOHALOGENADOS.

42.2. MATERIAL Y APARATOS.

42.2.1. ETER SUFURICO.

42.2.2. ACIDO SULFURICO (1+4) (V/V).

42.2.3. SUFATO SODICO ANHIDRO DESECADO EN ESTUFA A 105 GRADOS C.

42.2.4. HIDROXIDO SODICO 0,5 N.

42.2.5. ACIDO TIOSALICILICO (2 MERCAPTOBENZOICO) AL 3 POR 100 (P/V) EN NAOH 1,5 N.

42.2.6. FERRICIANURO POTASICO AL 2 POR 100 (PREPARAR INMEDIATAMENTE ANTES DE USAR).

42.2.7. CLOROFORMO.

42.2.8. BAÑO DE AGUA.

42.2.9. ESTUFA ELECTRICA.

42.2.10. EMBUDOS DE SEPARACION.

42.2.11. CAPSULAS DE PORCELANA 70-80 MM (SIMBOLO OMITIDO).

42.2.12. TUBOS DE 150 X 15 MM CON TAPON ESMERILADO.

42.2.13. TUBOS DE 150 X 15 MM CON LLAVE INFERIOR.

42.3. PROCEDIMIENTO.

INTRODUCIR EN UN ERLENMEYER DE 500 CC Y BOCA ESMERILADA 100 ML DE VINO,5 ML DE ACIDO SULFURICO (1+5) Y, AGITANDO, 100 ML DE ETER SULFURICO, CONTINUANDO EN UN AGITADOR DURANTE UNA HORA. SEPARAR EN EMBUDO DE DECANTACION Y DESCARTAR LA CAPA INTERIOR. AÑADIR 8-10 G DE SUFATO SODICO ANHIDRO AL EXTRACTO ETER, AGITANDO VIGOROSAMENTE. VERTER EL ETER EN OTRO EMBUDO DE 500 ML, AGREGANDO SUCESIVAMENTE: 5,0, 2,5 Y 2,5 ML DE NAOH 0,5 N, AGITANDO UN MINUTO CADA VEZ Y REUNIENDO LAS TRES CAPAS INFERIORES ALCALINAS OBTENIDAS EN UN TUBO CON TAPON ESMERILADO, EN EL CUAL SE HABRA VERTIDO PREVIAMENTE 1 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO TIOSALICILICO. AGITAR ENERGICAMENTE DURANTE TREINTA SEGUNDOS Y TRANSFERIR EL CONTENIDO DEL TUBO A UNA CAPSULA DE PORCELANA, EVAPORANDO DURANTE UNA HORA EN BAÑO DE AGUA (90-100 GRADOS C), TIEMPO QUE HABRA DE RESPETARSE AUN CUANDO EL AGUA SE EVAPORE MUCHO ANTES.

SI SE FORMARA UNA COSTRA SOBRE LA SUPERFICIE, ES CONVENIENTE ROMPERLA CON UNA VARILLA, FINA DE VIDRIO, LO QUE FACILITARALA EVAPORACION. PASADO ESTE TIEMPO, LLEVAR LA CAPSULA CON EL RESIDUO SECO A LA ESTUFA MANTENIDA A 200 GRADOS C DURANTE TREINTA MINUTOS EXACTAMENTE, PASADOS LOS CUALES SE RETIRA Y SE DEJA ENFRIAR A LA TEMPERATURA AMBIENTE. AÑADIR 2 ML DE AGUA DESTILADA QUE DISOLVERA LA MAYOR PARTE DEL EXTRACTO Y RECOGER EN UN TUBO CON LLAVE EN SU PARTE INFERIOR; AGREGAR OTROS 2 ML DE AGUA DESTILADA PARA LAVAR LA LA CAPSULA Y, POR ULTIMO, 3 ML DE SOLUCION DE FERRICIANURO, RECOGIENDO TODO ELLO CON LOS PRIMEROS, AGITANDO BIEN EL TUBO DURANTE TREINTA SEGUNDOS PARA FACILITAR LA OXIDACION. CONVIENE ASEGURARSE DE QUE TODO EL RESIDUO SE DISOLVIO BIEN EN LOS 4 ML DE AGUA DESTILADA ANTES DE AÑADIR LA SOLUCION DE FERRICIANURO. EN PRESENCIA DE UN DERIVADO MONOHALOGENADO SE DESARROLLARA UNA COLORACION ROJO-ANARANJADO (APENAS PERCEPTIBLE PARA CONTENIDOS INFERIORES A 0,1 MG). AGREGAR 3 ML DE CLOROFORMO; AGITAR ALTERNATIVAMENTE TRES-CUATRO VECES Y DECANTAR. SI EL EXTRACTO CLOROFORMICO INFERIOR SE COLOREA DE ROJO-FUCSIA O ROSADO, INDICA LA PRESENCIA DE DERIVADOS MONOHALOGENADOS DEL ACIDO ACETICO.

42.4 REFERENCIAS.

1. RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSE DES VINS. O.L.V.A 35H.

2. CABEZUCO, GOROSTIZA Y GARRIDO: DETERMINACION DE DERIVADOS MONOHALOGENADOS DEL ACIDO ACETICO, INSTITUTO DE FERMENTACIONES (19781, ATA, VOL.II, NUM. 1. PAGINAS 145-151).

43. GRADO ALCOHOLICO EN POTENCIA

43.1. PRINCIPIO.

ES EL VOLUMEN EN LITROS DE ALCOHOL SUSCEPTIBLE DE OBTENERSE POR FEMENTACION TOTAL DE LOS AZUCARES CONTENIDOS EN 100 LITROS DE VINO.

43.2. MATERIAL Y APARATOS. COMO EN 7(A).2 O 7(B).2.

43.3. REACTIVOS.

COMO EN 7(A).3 O 7(B).3.

43.4. PROCEDIMIENTO.

COMO EN 7(A) O 7(B).

43.5. CALCULOS.

(FORMULA OMITIDA)

44. GRADO ALCOHOLICO TOTAL

44.1. PRINCIPIO.

SE CONSIDERA EL GRADO ALCOHOLICO TOTAL COMO LA SUMA DEL GRADO ALCOHOLICO ADQUIRIDO DETERMIANDO SEGUN 5(A) O 5(B), Y DEL GRADO ALCOHOLICO POTENCIAL, DETERMINADO SEGUN 43.

44.2. CALCULO.

GRADO ALCOHOLICO TOTAL = GRADO ALCOHOLICO ADQUIRIDO+GRADO ALCOHOLICO POTENCIAL.

7(C) AZUCARES REDUCTORES

(VALORACION)

7(C).1. PRINCIPIO.

ELIMINACION DE LAS MATERIAS REDUCTORAS DISTINTAS DE LOS AZUCARES REDUCTORES POR DEFECACION, Y POSTERIOR VALORACION BASADA EN LA ACCION REDUCTORA DE LOS AZUCARES SOBRE UNA SOLUCION CUPRO-ALCALINA.

7(C).2. MATERIAL Y APARATOS.

7(C)2.1. ERLENMEYER DE 300 ML CON REFRIGERANTE DE REFLUJO.

7(C)2.2. MATERIAL NECESARIO PARA VOLUMETRIA.

7(C)2.3. BAÑO DE AGUA.

7(C)3. REACTIVOS.

7(C)3.1. SOLUCION CUPRO-ALCALINA:

DISOLVER POR SEPARADO: 25 G DE SULFATO DE COBRE PURO (SO4CU z 5H2O) EN 100 ML DE AGUA:50 G DE ACIDO CITRICO EN 300 ML DE AGUA Y 388 G DE CARBONATO DE SODIO CRISTALIZADO EN 300-400 ML DE AGUA CALIENTE. MEZCLAR LA SOLUCION DE ACIDO CITRICO Y LA DE CARBONATO DE SODIO. AÑADIR A CONTINUACION LA SOLUCION DE SULFATO DE COBRE Y COMPLETAR EL VOLUMEN CON AGUA HASTA UN LITRO.

7(C).3.2. SOLUCION DE IODURO DE POTASIO AL 30 POR 100. CONSERVAR EN FRASCO TOPACIO.

7(C).3.3. SOLUCION DE ACIDO SULFURICO AL 25 POR 100 EN VOLUMEN.

7(C)3.4. SOLUCION DE ENGRUDO DE ALMIDON DE 5G/L; CONTENDRA 200/L DE CLORURO DE SODIO PARA ASEGURAR SU CONSERVACION ESTA SOLUCION DEBE DE SER MANTENIDA DIEZ MINUTOS EN EBULLICION EN EL MOMENTO DE SU PREPARACION.

7(C).3.5. TIOSULFATO DE SODIO N/10.

7(C).4. PROCEDIMIENTO.

PONER EN EL ERLENMEYER DE 300 ML, 25ML DE LA SOLUCION CUPRO-ALCALINA Y 25 ML DEL VINO PREVIAMENTE DEFECADO SEGUN 7(A) O 7(B) ESTE VOLUMEN AÑADIDO NO DEBE CONTENER MAS DE 60 MG DE AZUCARES REDUCTORES.

(TABLA OMITIDA)

AÑADIR ALGUNOS GRANOS DE PIEDRA POMEZ Y LLEVAR A EBULLICION, QUE DEBE DE SER ALCANZADA EN DOS MINUTOS, ADAPTANDO EL ERLENMEYER AL REFRIGERANTE DE REFLUJO Y MANTENER EXACTAMENTE DURANTE DIEZ MINUTOS LA EBULLICION.

ENFRIAR INMEDIATAMENTE BAJO CORRIENTE DE AGUA FRIA. AÑADIR 10 ML DE LA SOLUCION DE IODURO DE POTASIO AL 30 POR 100, 25 ML DE LA SOLUCION DE ACIDO SULFURICO AL 25 POR 100 Y 2 ML DE ENGRUDO DE ALMIDON. A CONTINUACION, VALORAR CON LA SOLUCION 0,1 N DE TIOSULFATO DE SODIO.

EFECTUAR UNA PRUEBA EN BLANCO, SUSTITUYENDO LOS 25 ML DEL VINO PREVIAMENTE DEFECADOS POR IGUAL VOLUMEN DE AGUA DESTILADA Y TRATAR COMO SE HA INDICADO ANTES PARA LA MUESTRA.

7(C).5. CALCULOS.

LA CANTIDAD DE AZUCAR, EXPRESADA EN AZUCAR INVERTIDO CONTENIDA EN LA MUESTRA ANALIZADA, SE OBTIENE EN LA TABLA 7(C).1 EN FUNCION DEL N-N DE ML DE TIOSULFATO UTILIZADO.

SIENDO:

N = VOLUMEN, EN ML, DE SOLUCION DE TIOSULFATO DE SODIO 0,1 N UTILIZADOS EN LA VALORACION DE LA MUESTRA.

N = VOLUMEN, EN ML, DE SOLUCION DE TIOSULFATO DE SODIO 0,1 N UTILIZADOS EN LA PRUEBA EN BLANCO.

EXPRESAR EL CONTENIDO DEL VINO EN G DE AZUCAR INVERTIDO POR LITRO, TENIENDO EN CUENTA LAS DILUCIONES EFECTUADAS EN EL CURSO DE LA DEFECACION DEL VOLUMEN DE LA MUESTRA ANALIZADA.

7(C).6. REFERENCIAS.

1. RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSE DES VINS. O.I.V.A 4E 29-31.

30. CLORUROS

30.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DIRECTA DE CLORUROS POR POTENCIOMETRIA UTILIZANDO EL ELECTRODO AG/AGCL.

30.2. MATERIAL Y APARATOS.

30.2.1. PH-METRO CON ESCALA QUE PERMITA APRECIAR 2MV.

30.2.2. AGITADOR MAGNETICO.

30.2.3. EFECTRODO AG/AFCL, CON UNA SOLUCION SATURADA DE NITRATO DE POTASIO COMO ELECTROLITO.

32.2.4. MICROBURETA GRADUADA EN 1/100 DE ML.

30.3. REACTIVOS.

30.3.1. SOLUCION PATRON DE CLORUROS.-DISOLVER 2,1027 G DE CLORURO DE POTASIO PURO PARA ANALISIS (MAXIMO 0,005 POR 100 DE BROMO) PREVIAMENTE DESECADO, EN AGUA DESTILADA HASTA 1 LITRO. 1 ML DE ESTA SOLUCION CONTIENE 1 MG DE ION CLORO.

30.3.2. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA.-DISOLVER 4,7912 G DE NITRATO DE PLATA EN UNA SOLUCION ALCOHOLICA AL 10 POR 100 (V/V) HASTA 1 LITRO. 1 ML DE ESTA SOLUCION CORRESPONDE A 1 MG DE ION CLORO.

30.3.3. ACIDO NITRICO CONCENTRADO (D = 1,40).

30.4. PROCEDIMIENTO.

30.4.1. DETERMINACION DEL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

INTRODUCIR 5,0 ML DE LA SOLUCION PATRON DE CLORUROS EN UN VASO DE 150 ML. DILUIR APROXIMADAMENTE A 100 ML CON AGUA DESTILADA Y ACIDIFICAR CON 1,0 ML DE ACIDO NITRICO (30.3.3). INTRODUCIR LOS ELECTRODOS. AÑADIR 10 ML DE LA SOLUCION DE NITRATO DE PLATA, AGITANDO MODERADAMENTE: ADICIONAR LOS CUATRO PRIMEROS MILILITROS EN FRACCIONES DE 1 ML Y LEER LAS CORRESPONDIENTES LECTURAS EN MILIVOLTIOS; LOS DOS SIGUIENTES MILILITROS, EN FRACCIONES DE 0,2 ML Y CONTINUAR ADICIONANDO EN FRACCIONES DE 1 MILILITRO HASTA QUE SE HAYAN ALCANZADO UN TOTAL DE 10 ML. DESPUES DE CADA ADICION ESPERAR UNOS TREINTA SEGUNDOS ANTES DE HACER LA CORRESPONDIENTE LECTURA EN MILIVOLITIOS. LLEVAR LOS VALORES ASI OBTENIDOS SOBRE UN PAPEL MILIMETRADO EN FUNCION DE LOS CORRESPONDIENTES MILILITROS DE SOLUCION DE NITRATO DE PLATA Y A PARTIR DEL PUNTO SINGULAR DE LA CURVA OBTENIDA DETERMINAR EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

PARA COMPROBAR EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA, LLEVAR A UN VASO DE 150 ML 5,0 ML DE LA SOLUCION PATRON DE CLORUROS, 95 ML DE AGUA DESTILADA Y 1 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO. INTRODUCIR EL ELECTRODO Y VALORAR AGITANDO, JUSTAMENTE HASTA EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

REPETIR ESTA OPERACION HASTA OBTENER UNA BUENA CONCORDANCIA DE RESULTADOS. ESTE CONTROL DEBE AFECTUARSE ANTES DE DETERMINAR LA CONCENTRACION DE CLORUROS EN CADA SERIE DE MUESTRAS A ANALIZAR.

30.4.2. DETERMINACION.

LLEVAR A UN VASO DE 150 ML 50,0 ML DE VINO. AÑADIR 50 ML DE AGUA DESTILADA Y 1,0 ML DE ACIDO NOTRICO CONCENTRADO. VALORAR A CONTINUACION SIGUIENDO EL PROCEDIMIENTO DESCRITO ANTERIORMENTE HASTA ALCANZAR EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

30.5. CALCULOS.

LA CANTIDAD DE CLORUROS SE DETERMINA MEDIANTE LAS EXPRESIONES:

0,02 N EN GRAMOS DE ION CLORO.

0,5633 N EN MILIEQUIVALENTES POR LITRO DE ION CLORO.

0,0329 M EN GRAMOS DE CLORURO SODICO POR LITRO.

SIENDO:

N = VOLUMEN, EN ML, DE SOLUCION DE NITRATO DE PLATA NECESARIO PARA ALCANZAR EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

30.6. REFERENCIA.

1. RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSE DES VINS. O.I.V.A 15J.

45. COLORANTES SINTETICOS

45.1. PRINCIPIO.

CONCENTRACION MEDIANTE EBULLICION, EXTRACION CON ETER Y FIJACION DE COLORANTES SINTETICOS BASICOS Y ACIDOS SOBRE LANA Y POSTERIOR CONFIRMACION POR CROMATOGRAFIA EN PAPEL.

45.1. MATERIAL Y APARATOS.

45.2.1. HEBRAS DE LANA BLANCA PREVIAMENTE DESENGRASADAS CON ETER.

45.2.2. HEBRAS DE LANA BLANCA MORDENTADAS. DISOLBER 1 G DE SUFATO DE ALUMINIO CRISTALIZADO Y 1,2 G DE TARTRATO ACIDO DE POTASIO EN 500 ML DE AGUA. INTRODUCIR EN ESTA SOLUCION 10 G DE HEBRAS DE LANA BLANCA, PREVIAMENTE DESENGRASADAS CON ETER Y SECAS, AGITAR DURANTE UNA HORA Y DEJAR REPOSAR DE DOS A TRES HORAS; TRANSCURRIDO DICHO TIEMPO, SECAR A TEMPERATURA EMBIENTE.

45.2.3. PAPEL PARA CROMATOGRAFIA WHATMAN NUMERO 1 O SIMILAR.

45.2.4. ERLENMEYER DE 5O ML DE CAPACIDAD.

45.2.5. AMPOLLA DE DECANTACION DE 200 ML DE CAPACIDAD.

45.3. REACTIVOS.

45.3.1. ETER SULFURICO.

45.3.2. HIDROXIDO DE SODIO AL 5 POR 100.

45.3.3. ACIDO ACETICO GLACIAL, D = 1,05.

45.3.4. ACIDO DILUIDO, 1/18 (V/V).

45.3.5. ACIDO CLORHIDRICO DILUIDO 1/10 (V/V).

45.3.6. AMONIACO PURO, D = 0,92.

45.3.7. SOLVENTE NUMERO 1 PARA CROMATOGRAFIA DE COLORANTES DE CARACTER BASICO:

BUTANOL N 50 ML

ETANOL 25 ML

ACIDO ACETICO GLACIAL 10 ML

AGUA DESTILADA 25 ML

45.3.8. SOLVENTE NUMERO 2 PARA LA CROMATOGRAFIA DE COLORANTES DE CARACTER ACIDO:

BUTANOL N 50 ML

ETANO 25 ML

AMONIACO PURO 10 ML

AGUA DESTILADA 25 ML

45.4. PROCEDIMIENTO.

45.4.1. DETERMINACION DE COLORANTES DE CARACTER BASICO.

PONER 200 ML DE VINO EN UN ERLENMEYER DE 500 ML Y LLEVAR A EBULLICION HASTA QUE EL VINO SE REDUZCA A UN TERCIO DE SU VOLUMEN. ENFRIAR Y NEUTRALIZAR CON LA SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 5 POR 100 HASTA CLARO VIRAJE DEL COLOR NATURAL DEL VINO. EXTRAER DOS VECES, CON 30 ML DE ETER CADA VEZ, Y JUNTAR LAS DOS FASES ETEREAS; EN ELLAS SE ENCUENTRAN EVENTUALMENTE LOS COLORANTES BASICOS; EL RESIDUO DE LA EXTRACCION DEBE SER CONSERVADO CON OBJETO DE INVESTIGAR LOS COLORANTES ACIDOS. LAVAR DOS VECES EL ETER EMPLEADO EN LA EXTRACCION CON 5 ML DE AGUA, CON EL OBJETO DE ELIMINAR EL HODRIXIDO SODICO; A CONTINUACION, AÑADIR 5 ML DE ACIDO ACETICO DILUIDO A LA FASE ETEREA; LA PRESENCIA DE UN COLORANTE BASICO COLOREA LA FASE ACIDO-ACUOSA; LA PRESENCIA DE ESTE COLORANTE PUEDA CONFIRMARSE POR SU FIJACION SOBRE LANA MORDENTADA.

LA FASE ACIDO-ACUOSA OBTENIDA SE ALCALINIZA CON AMMONIACO AL 5 POR 100; AÑADIR 0,5 G DE LANA MORDENTADA Y LLEVAR A EBULLICION DURANTE UN MINUTO; ACLARAR LA LAN BAJO EL CHORRO DE AGUA FRIA; DE PERMANECER COLOREADA, EL VINO CONTIENE UN COLORANTE BASICO.

45.4.1.1. CARACTERIZACION POR CROMATOGRAFIA DE PAPEL. A PARTIR DE LA FASE ACETICO-ACUOSA QUE CONTIENE EL COLORANTE BASICO, CONCENTRAR HASTA 0,5 ML. SI EL COLORANTE HA SIDO FIJADO SOBRE LANA, AÑADIR A ESTA 10 ML DE AGUA DESTILADA, 10 GOTAS DE ACIDO ACETICO Y LLEVAR A EBULLICION, Y UNA VEZ RETIRADA LA LANA PREVIAMENTE ESCURRIDA, CONCENTRAR LA SOLUCION HASTA 0,5 ML.

DEPOSITAR SOBRE PAPEL DE CROMATOGRAFIA 20 MICROLITROS DE LA ANTERIOR SOLUCION CONCENTRADA A 3 CM DEL BORDE LATERAL Y A 2 CM DEL BORDE INFERIOR. INTRODUCIR DICHO PAPEL EN UNA CUBETA QUE CONTENGA EL SOLVENTE 45.3.7 DE FORMA QUE SU BORDE INFERIOR ESTE SUMERGIDO EN EL SOLVENTE 1 CM. RETIRAR Y DEJAR SECAR AL AIRE CUANDO SE HAYA ALCANZADO UNA ALTURA DEL FRENTE DEL SOLVENTE COMPRENDIDO ENTRE 20 O 25 CM. IDENTIFICAR EL COLORANTE POR MEDIO DE SOLUCIONES DE COLORANTES SINTETICOS BASICOS DEPOSITADOS SIMULTANEAMENTE SOBRE EL CROMATOGRAMA.

45.4.2. DETERMIANACION DE COLORANTES DE CARACTER ACIDO.

PARTIR DEL RESIDUO DE VINO CONCENTRADO A UN TERCIO Y NEUTRALIZADO DESPUES DE SU EXTRACCION CON ETER; SI NO SE REALIZO LA DETERMIANCION DE COLORANTE DE CARACTER BASICO, PONER 200 ML DE VINO EN UN ERLENMEYER DE 500 ML Y LLEVAR A EBULLICION HASTA QUE EL VINO SE EDUZCA A UN TERCIO DE SU VOLUMEN. EN UNO U OTRO CASO, AÑADIR 3 ML DE ACIDO CLORHIDRICO DILUIDO (45.3.5) Y 0,5 G DE LANA BLANCA; HERVIR DURANTE CINCO MINUTOS, DECANTAR EL LIQUIDO Y LAVAR LA LANA CON AGUA ABUNDANTE. EN EL ERLENMEYER QUE CONTIENE LA LANA, AÑADIR 100 ML DE AGUA Y 2 ML DE ACIDO CLORHIDRICO DILUIDO (45.3.5); HERVIR DURANTE CINCO MINUTOS, DECANTAR EL LIQUIDO ACIDO Y REPETIR ESTA OPERACION HASTA QUE EL LIQUIDO DE LAVADO SEA INCOLORO. DESPUES DE HABER LAVADO BIEN LA LANA, PARA ELIMINAR COMPLETAMENTE EL LIQUIDO ACIDO, AÑADIR 50 ML DE AGUA DESTILADA Y 10 GOTAS DE AMONIACO PURO; LLEVAR A EBULLICION SUAVE DURANTE DIEZ MINUTOS A FIN DE DISOLVER LA MATERIA COLORANTE ARTIFICIAL QUE EVENTUALMENTE SE HAYA FIJADO SOBRE LA LANA. ACONTINUACION, RETIRAR LA LANA DEL ERLENMEYER, LLEVAR EL VOLUMEN DE LIQUIDO A 100 ML Y HERVIR HASTA EVAPORACION COMPLETA DEL AMONIACO; UNA VEZ CONSIGUIDA DICHA EVAPORACION, AÑADIR 2 ML DE ACIDO CLORHIDRICO DILUIDO (45.3.5) (COMPROBAR QUE EL LIQUIDO HAYA ADQUIRIDO REACCION FRANCAMENTE ACIDA, LLEVANDO UNA GOTA DE ESTE SOBRE EL PAPEL INDICADOR). PONER EN EL ERLENMEYER 60 MG DE LANA BLANCA Y LLEVAR A EBULLICION DURANTE CINCO MINUTOS; RETIRAR LA LANA Y ACLARARLA BAJO EL CHORRO DE AGUA FRIA. SI DESPUES DE ESTA OPERACION LA LANA TOMA COLORACION ROJA, CUANDO SE TRATA DE VINO TINTO, O AMARILLA, SI SE TRATA DE VINO BLANCO, CONFIRMA LA PRESENCIA DE MATERIA COLORANTE ORGANICA ARTIFICIAL DE NATURALEZA ACIDA. SI LA COLORACION ADQUIRIDA ES DEBIL O DUDOSA, REPETIR EL TRATAMIENTO CON AMONIACO Y HACER UNA SEGUNDA FIJACION SOBRE UNA HEBRA DE LANA DE 30 MG. SI TRANSCURRIDA ESTA SEGUNDA FIJACION SE OBTIENE UNA COLORACION ROSA, AUNQUE SEA DEBIL, SE DEDUCE LA PRESENCIA DE COLORANTE ACIDO. RECURRIR PARA UN ANALISIS MAS COMPLETO A NUEVAS FIJACIONES-ELUCIONES (HASTA 4 O 5), OPERANDO SIEMPRE DE FORMA IDENTICA A LA EMPLEADA PARA LA SEGUNDA FIJACION HASTA QUE SE OBTENGA UNA COLORACION ROSACEA QUE, AUNQUE SEA PALIDA, NO OFRECE LUGAR A DUDAS.

45.4.2.1. CARACTERIZACION POR CROMATOGRAFIA DE PAPEL.

AÑADIR SOBRE LA HEBRA DE LANA COLOREADA 10 ML DE AGUA DESTILADA, 10 GOTAS DE AMONIACO Y LLEVAR A EBULLICION; RETIRAR LA LANA PREVIAMENTE ESCURRIDA Y CONCENTRAR LA SOLUCION AMONIACAL HASTA 0,5 ML. DEPOSITAR SOBRE PAPEL DE CROMATOGRAFIA 20 MICROLITROS DE LA ANTERIOR SOLUCION CONCENTRADA, A 3 CM DEL BORDE LATERAL Y A 2 CM DEL BORDE INFERIOR; INTRODUCIR DICHO PAPEL EN UNA CUBETA QUE CONTENGA EL SOLVENTE 45.3.8 DE FORMA QUE SU BORDE INFERIOR ESTE SUMERGIDO EN EL SOLVENTE 1 CM. RETIRAR Y DEJAR SECAR AL AIRE CUANDO SE HAYA ALCANZADO UNA ALTURA DEL FRENTE DEL SOLVENTE COMPRENDIDA ENTRE 20 O 25 CM. IDENTIFICAR EL COLORANTE POR MEDIO DE SOLUCIONES DE COLORANTES SINTETICOS ACIDOS DEPOSITADOS SIMULTANEAMENTE SOBRE EL CROMATOGRAMA.

45.5. REFERENCIA.

RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSE DES VINS. A43K, PAGINAS 1-6.

46. MERCURIO

46.1. PRINCIPIO.

OXIDACION DE LA MATERIA ORGANICA CON ACIDO NITRICO Y CROMICO, REDUCCION DE LAS SALES MERCURICAS POR ACCION DE SN++, VOLATILIZACION DEL HG METALICO, ARRASTRE DEL MISMO POR CORRIENTE DE AIRE Y DETERMINACION DE SU ABSORBANCIA A 253,7 NANOMETROS.

ESTE METODO ES APLICABLE A CONCENTRACIONES DE MERCURIO SUPERIORES A 0,05 MG/L.

46.2. MATERIAL Y APARATOS.

46.2.1. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION.

46.2.2. LAMPARA DE MERCURIO.

46.2.3. APARATO PARA LA REDUCCION DEL ION MERCURICO A MERCURIO METAL Y POSTERIOR ARRASTRE DE ESTE CON CORRIENTE DE AIRE (FIGURA 46.1).

46.2.4. MATRACES DE REACCION DE FORMA CONICA DE 100 ML DE CAPACIDAD.

46.2.5. BOMBA PERISTALTICA ACCIONADA CON MOTOR PROVISTO DE VACIADOR DE VELOCIDAD.

46.2.6. LLAVE DE PURGA EN T DE TEFLON.

46.2.7. TUBO FLEXIBLE DE TIGON DE 1/8 PULGADA DE DIAMETRO INTERIOR Y UN METRO, APROXIMADAMENTE, DE LONGITUD.

(GRAFICO OMITIDO)

46.3. REACTIVOS.

46.3.1. ACIDO SULFURICO, EXENTO DE MERCURIO.

46.3.2. OXIDO DE MERCURIO.

46.3.3. CLORURO ESTANNOSO, EXENTO DE MERCURIO.

46.3.4. OXIDO DE CROMO, EXENTO DE MERCURIO.

46.3.5. SOLUCION DE ACIDO CROMICO AL 5 POR 100.-LLEVAR A UN VASO DE 500 ML 25 G DE OXIDO DE CROMO Y DISOLVERLOS EN 25 ML DE AGUA DESTILADA. AÑADIR LENTAMENTE Y AGITANDO ACIDO SULFURICO CONCENTRADO HASTA ENRASAR A 500 ML CUANDO LA SOLUCION ESTE FRIA.

46.3.6. SOLUCION REDUCTORA.-SOLUCION AL 40 POR 100 DE CLORURO ESTANNOSO EN AGUA DESTILADA, ACIDULADA CON SULFURICO.

46.3.7. SOLUCION PATRON.-DISOLVER 1,080 G DE OXIDO DE MERCURIO EN 100 ML. DE ACIDO CLORHIDRICO AL 50 POR 100; ENRASAR CON AGUA A 1.000 ML. MEDIANTE DILUCION 1/1.000 SE OBTIENE LA SOLUCION DE 1 MG/L.

46.4. PROCEDIMIENTO.

46.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.

TOMAR 1 ML DE MUESTRA Y COLOCARLA DENTRO DE UN MATRAZ CONICO. AÑADIR 2 ML DE ACIDO NITRICO. CERRAR CON PELICULA DE PARAFINA Y DEJARLO EN DIGESTION DURANTE SESENTA MINUTOS A TEMPERATURA EMBIENTE. AÑADIR 5 ML DE ACIDO CROMICO AL 5 POR 100, REFRIGERANDO DURANTE LA ADICION EN BAÑO DE HIELO. TAPAR EL MATRAZ Y DEJARLO DURANTE SESENTA MINUTOS, AGITANDO CADA DIEZ MINUTOS. TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO. AÑADIR 15 ML DE AGUA DESTILADA, ENFRIANDO DURANTE LA ADICION CON BAÑO DE HIELO. UNA VEZ FRIOS LOS MATRACES, AÑADIR 2 G, APROXIMADAMENTE, DE SULFATO DE HIDROXILAMINA, AGITAR Y ACOPLAR LOS MATRACES AL APARATO DE MEDIDA. AÑADIR 10 ML DE SOLUCION REDUCTORA. CONTINUAR COMO EN 46.4.3.

46.4.2. CONSTRUCCION DE LA CURVA PATRON.

A PARTIR DE 46.3.7, TOMAR 0,5, 10, 15, 20 Y 25 ML. TRATARLAS A CONTINUACION COMO SE INDICA EN 46.4.1. ESTAS SOLUCIONES CONTIENEN 0, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 Y 0,5 PARTES POR MILLON DE HG. ANOTAR LAS ABSORBANCIAS OBTENIDAS FRENTE A LAS CONCENTRACIONES CORRESPONDIENTES.

46.4.3. DETERMINACION.

EFECTUAR LA LECTURA DE LA ABSORBANCIA DE LA MUESTRA. UNA VEZ PREPARADA SEGUN 46.4.1.

46.5. REFERENCIAS.

1. A. BOUCHARD: "DETERMINATION OF MERCURY AFTER SOON TEMPERATURE DIGESTION BY FLAMALESS ATOMIC ABSORPTION."ATOM. ABSOPRT. NEWSLETTER, VOL. 12, NUMERO 5 BY (115-117), 1973.

2. A. GARCIA DE JALON Y J. FRIAS: "UN METODO PARA LA DETERMINACION DE MERCURIO EN VINOS MEDIANTE ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA SIN LLAMA". MINISTERIO DE AGRICULTURA. ABRIL 1972.

47. PLOMO

47.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DEL PLOMO POR A. A. DESPUES DE UNA CONCENTRACION PREVIA CON OBJETO DE CONSEGUIR RESULTADOS SUFICIENTEMENTE PRECISOS.

47.2. MATERIAL Y APARATOS.

47.2.1. ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

47.2.2. LAMPARA DE PLOMO.

47.2.3. CAPSULA DE PLATINO DE 100 ML DE CAPACIDAD O SIMILAR.

47.2.4. BAÑO DE ARENA.

47.2.5. MUFLA CON CIRCULACION DE AIRE.

47.2.6. MATRACES DE 10, 100 Y 1.000 ML DE CAPACIDAD.

47.3. REACTIVOS.

47.3.1. ACIDO SULFURICO DEL 96 POR 100 (D=1,835).

47.3.2. ACIDO NITRICO DEL 70 POR 100 (D=1,413).

47.3.3. ACIDO NITRICO AL 1 POR 100 EN AGUA DESTILADA (V/V).

47.3.4. SOLUCION PATRON DE 1.000 PPM DE PLOMO. DISOLVER 1,598 GRAMOS DE (NO3)2PB ENRASANDO A 1.000 ML CON ACIDO NITRICO AL 1 POR 100.

47.4. PROCEDIMIENTO.

47.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA -PONER 100 ML DE LA MUESTRA EN UNA CAPSULA DE PLATINO Y LLEVARLA A EVAPORACION HASTA CONSISTENCIA SIRUPOSA EN BAÑO DE ARENA. AÑADIR A CONTINUACION 2 ML DE ACIDO SULFURICO Y CARBONIZAR EL RESIDUO EN EL BAÑO DE ARENA. SEGUIDAMENTE INTRODUCIR LA CAPSULA EN LA MUFLA Y MANTENERLA DURANTE DOS HORAS A 450 GRADOS C; TRANSCURRIDO DICHO TIEMPO, SACARLA Y DEJARLA ENFRIAR. AÑADIR 1 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO, EVAPORAR EN EL BAÑO DE ARENA E INTRODUCIR EN LA MUFLA, REPITIENDO ESTA OPERACION HASTA OBTENER CENIZAS BLANCAS. DISOLVER A CONTINUACION LAS CENIZAS CON 1 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO Y 2 ML DE AGUA DESTILADA, UNA VEZ DISUELTAS FILTRAR Y RECOGER EL FILTRADO EN UN MATRAZ DE 10 ML, LAVANDO LA CAPSULA Y EL FILTRO CON AGUA DESTILADA HASTA EL ENRASE.

47.4.2. CONSTRUCCION DE LA CURVA PATRON.-A PARTIR DE LA SOLUCION PATRON 46.3.4, TOMAR ALICUOTAS DE 0,2; O,4; 0,6; 0,8, Y 1 ML, Y LLEVAR A 100 ML CON ACIDO NITRICO AL 1 POR 100 (V/V).

EL CONTENIDO EN PLOMO DE ESTAS SOLUCIONES ES, RESPECTIVAMENTE, 2, 4, 6, 8 Y 10 P.P.M. ANOTAR LAS ABSORBANCIAS OBTENIDAS FRENTE A LAS CONCENTRACIONES CORRESPONDIENTES.

47.4.3. DETERMINACION.-EFECTUAR LA LECTURA DIRECTA DE LA MUESTRA PREPARADA SEGUN 47.4.1 A 283,3 NM.

47.5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN PLOMO, EXPRESADO EN P.P.M. MEDIANTE COMPARACION CON LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON Y TENIENDO EN CUENTA EL FACTOR DE DILUCION.

39 (B). FLUOR

39 (B).1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DIRECTA DEL FLUOR TOTAL POR POTENCIOMETRIA UTILIZANDO UN ELECTRODO IONICO ESPECIFICO.

PARA ELIMINAR LAS POSIBLES CAUSAS DE ERROR SE LE ADICIONA AL VINO UNA SOLUCION TAMPON.

39 (B).2. MATERIAL Y APARATOS.

39 (B).2.1. PH-METRO CON ESCALA QUE PERMITA APRECIAR 0,1 MV.

39 (B).2.2. ELECTRODO SELECTIVO DE FLUOR.

39 (B).2.3. ELECTRODO DE REFERENCIA DE CALOMELANOS.

39 (B).2.4. MICROBURETA GRADUADA EN 1/100 DE ML.

39 (B).2.5. RECIPIENTES DE PLASTICO DE 50-100 ML DE CAPACIDAD PARA MEZCLAS Y MATRACES EN MATERIAL DE PLASTICO PARA CONSERVAR LAS SOLUCIONES PATRON.

39 (B).2.6. PIPETAS DE PRECISION GRADUADAS EN MICROLITROS.

39 (B).2.7. AGITADOR MAGNETICO.

39 (B).3. REACTIVOS.

39 (B).3.1. SOLUCION PATRON DE FLUORUROS 1/100 M CONTENIENDO 190 MG DE F- POR LITRO. PESAR 0,4198 G DE FNA (DESECADO DURANTE CUATRO HORAS A 106 GRADOS C ANTES DE SU UTILIZACION), DISOLVER Y ENRASAR A UN VOLUMEN DE 1.000 ML.

39 (B).3.2. SOLUCION TAMPON DE PO4H3 0,75 M.

39 (B).4. PROCEDIMIENTO.

39 (B).4.1. VERIFICACION DEL ELECTRODO Y DETERMINACION DE SU PENDIENTE.

A PARTIR DE LA SOLUCION 3.1 PREPARAR, MEDIANTE DILUCIONES, SOLUCIONES DE CONCENTRACIONES CONOCIDAS DE 1/1000 M, 1/10000 M Y 1/100000 M, QUE CONTIENEN RESPECTIVAMENTE 19, 1,9 Y 0,19 MG DE F- POR LITRO.

TOMAR DOS VASOS DE PRECIPITADOS; EN UNO DE ELLOS COLOCAR 25 ML DE LA DISOLUCION 1/1000 M DE F-, ADICIONAR 5 ML DE SOLUCION TAMPON DE PO4H3 Y DETERMINAR SU POTENCIAL AGITANDO DE FORMA MODERADA MIENTRAS DURE LA MEDIDA. EN EL OTRO VASO, PONER 25 ML DE DISOLUCION 1/10000 M DE F-, 5 ML DE SOLUCION TAMPON DE PO4H3 Y DETERMINAR SU POTENCIAL, AGITANDO COMO ANTERIORMENTE. LA DIFERENCIA ENTRE LOS DOS POTENCIALES ES LA PENDIENTE DEL ELECTRODO (S) Y CUYO VALOR DEBE SER, APROXIMADAMENTE, 59 MV.

39 (B).4.2. DETERMINACION.

TOMAR 25 ML DE VINO, ADICIONAR 5 ML DE LA SOLUCION TAMPON Y DETERMINAR SU POTENCIAL (E1). A CONTINUACION, Y EN EL MISMO VASO, ADICIONAR UN ML DE DISOLUCION 1/1000 M DE F- Y DETERMINAR SU POTENCIAL (E2).

SI EL SALTO DE POTENCIAL ES PEQUEÑO, INDICA QUE LA CONCENTRACION DE F ES MUY ALTA Y HAY QUE DILUIR LA MUESTRA HASTA QUE EL SALTO ALCANZADO ESTE COMPRENDIDO ALREDEDOR DE 20-40 MV.

LOS VOLUMENES DE MUESTRA Y SOLUCION TAMPON PUEDEN SER MODIFICADOS EN FUNCION DE LA FORMA Y DISPOSICION DE LOS ELECTRODOS UTILIZADOS.

39 (B).5. CALCULOS.

LA CANTIDAD DE FLUOR, EXPRESADA EN MG/L, NOS VIENE DETERMINADA POR LA FORMULA:

(FORMULA OMITIDA)

39 (B).6. OBSERVACIONES.

39 (B).6.1. TODAS LAS SOLUCIONES DEBEN CONSERVAR UNA TEMPERATURA PROXIMA A 25 GRADOS C +- 1 GRADO C DURANTE LA MEDIDA.

39 (B).7. REFERENCIAS.

1. H. E. HALLER Y C. H. JUNGE, 1974, O. I. V. 317/FV/518 Y 133/FV/439.

2. DESCHREIDER, A., Y MME R. MEAUX, 1974. DETERMINATION DES FLUOR DANS LES VINS ET EAUX MINERALES NATURELLES AU MOYEN D'UNE ELECTRODE IONIQUE SPECIFIQUE.

48. RELACION (FORMULA OMITIDA)

48.1. PRINCIPIO.

ESTIMACION DE LOS CONTENIDOS RELATIVOS DE GLUCOSA Y FRUCTOSA, EN MOSTOS, VINOS DULCES Y MISTELAS, MEDIANTE EL ESTABLECIMIENTO DE LA RELACION ENTRE AZUCARES REDUCTORES Y DESVIACION POLARIMETRICA A 20 GRADOS C.

48.2. MATERIAL Y APARATOS.

48.2.1. COMO EN 7(A).2; 7(B).2, O 7(C).2.

48.2.2. POLARIMETRO CON LUZ MONOCROMATICA AMARILLA (LAMPARA VAPOR DE SODIO) Y TUBO DE 20 CM.

48.3. PROCEDIMIENTO.

48.3.1. DETERMINAR EL CONTENIDO EN AZUCARES REDUCTORES SEGUND EL METODO 7(A), 7(B) O 7(C).

48.3.2. MEDIDA DE LA DESVIACION POLARIMETRICA.

UNA VEZ VERIFICADO EL CORRECTO REGLAJE DEL POLARIMETRO, COMPROBANDO LA CORRESPONDENCIA DEL VALOR "CERO" CON LA EXISTENCIA DE UN CAMPO LUMINOSO UNIFORME, AJUSTANDOLO SI ES NECESARIO, INTRODUCIR EN EL TUBO DEL POLARIMETRO EL LIQUIDO DE DEFECACION, SIN DILUIR, INCOLORO Y LIMPIO, UTILIZANDO PARA LA DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES, EVITANDO LA FORMACION DE BURBUJAS DE AIRE. ANOTAR LA TEMPERATURA DEL LIQUIDO QUE DEBE SER LO MAS PROXIMA POSIBLE A 20 GRADOS C.

EFECTUAR LA LECTURA DE LA DESVIACION POLARIMETRICA VARIAS VECES SUCESIVAS, TOMANDO LA MEDIA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS.

(TABLA OMITIDA)

VINAGRES

9. METANOL, METODO DEL ACIDO CROMOTROPICO

9.1. PRINCIPIO.

COMO EN 37.1 DE LOS METODOS OFICIALES DE ANLISIS DE VINOS.

9.2. MATERIAL Y APARATOS.

COMO EN 37.2 DE LOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE VINOS.

9.3. REACTIVOS.

9.3.1. COMO 37.3.1. DE LOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE VINOS.

9.3.2. IDEM.

9.3.3. IDEM.

9.3.4. ETANOL DE 96. (V/V).

9.3.5. MATRAZ AFORADO DE 25 ML.

9.4. PROCEDIMIENTO.

TOMAR 25 ML DE VINAGARE, DESTILAR EN DESTILADOR SIMPLE Y RECOGER 15 ML DE DESTILADO EN MATRAZ AFORADO DE 25 ML SUMERGIDO EN BAÑO DE HIELO. AÑADIR EL ETANOL SUFICIENTE PARA QUE UNA VEZ ENRASADO A 25 ML CON AGUA DESTILADA LA CONCENTRACION DEL ETANOL SEA DEL 5-6 POR 100 (9.6.1). CONTINUAR COMO EN 37,4 DE LOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE VINOS.

9.5. CALCULO.

COMO EN 37.5. DE LOS METODOS OFICIALES DE ANLISIS DE VINOS.

9.6. OBSERVACIONES.

9.6.1. EN VINAGRES NORMALES SUELE SER SUFICIENTE AÑADIR 1,5 POR 100 DE ALCOHOL DE 96 POR 100.

9.7. REFERENCIAS.

1. ASSOCIATION OF OFFICIAL AGRICULTURAL CHEMISTS OFFICIAL METHODOS OF ANALYSIS, 1965, PAGINA 138.

10(A) ACIDO TARTARICO

(METODO CUALITATIVO)

10(A).1. PRINCIPIO.

PRECIPITACION DEL ACIDO TARTARICO EN FORMA DE BITARTRATO POTASICO.

10(A).2. MATERIAL Y APARATOS.

10(A).2.1. CENTRIFUGA.

10(A).3. REACTIVOS.

10(A).3.1. ACIDO ACETICO CONCENTRADO PURO.

10(A).3.2. SOLUCION DE PRECIPITACION.

DISOLVER 300 G DE CLORURO DE POTASIO PURO, 5,75 G DE TARTRATO DE SODIO Y POTASIO (SAL DE SEIGNETTE) Y 1,25 G DE OXALATO DE POTASIO Y ENRASAR A 1.000 ML CON AGUA DESTILADA.

A BAJA TEMPERATURA LA SOLUCION DEPOSITA PEQUEÑOS CRISTALES, POR LO QUE SE DEBE CALENTAR LIGERAMENTE ANTES DE EMPLEARSE.

10(A).3.3. ETANOL DE 96.

10(A).4. PROCEDIMIENTO.

PONER EN UN TUBO DE CENTRIFUGA 10 ML DE VINGRE, 0,4 ML DE ACIDO ACETICO 7,5 ML DE LA SOLUCION DE PRECIPITACION Y 2 ML DE ETANOL. AGITAR CON UNA VARILLA DE VIDRIO HASTA QUE APAREZCA UN ENTURBIAMIENTO CRISTALINO APROXIMADAMENTE A LOS DIEZ SEGUNDOS. MANTENER EL TUBO DURANTE UNA HORA A 8 GRADOS C APROXIMADAMENTE. AL CABO DE ESTE TIEMPO AGITAR ENERGICAMENTE DEL CONTENIDO DEL TUBO CON UNA VARILLA DE VIDRIO, CON LA PRECAUCION DE MEZCLAR BIEN CON LA SOLCUION QUE SOBRENADA. DEJAR EN REPOSO APROXIMADAMENTE A 8 GRADOS C DURANTE UNA HORA. TRANSCURRIDO ESTE TIEMPO CENTRIFUGAR.

10(A).5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

LA APARICION DE PRECIPITADO INDICA LA PRESENCIA DE ACIDO TARTARCIO EN LA MUESTRA.

10(A).6. REFERENCIAS.

1. RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSE DES VINS. O.I.V.A-12-H.

10(B). ACIDO TARTARICO

(METODO CUANTITATIVO)

10(B).1. PRINCIPIO.

AISLAMIENTO DEL ACIDO TARTARICO MEDIANTE COLUMAN DE RESINAS CAMBIADORAS DE ANIONES Y POSTERIOR VALORACION CLORIMETRICA.

10(B).2. MATERIAL Y APARATOS.

10(B).2.1. RESINAS ANIONICAS DE BASICIDAD FUERTE (III MERCK O EQUIVALENTE). LAS RESINAS DEBEN DE ENCONTRARSE EN FORMA DE ACETATO. PARA ELLO DEBEN ESTAR AL MENOS VEITICUATRO HORAS EN CONTACTO CON UNA SOLUCION DE ACIDO ACETICO AL 30 POR 100.

10(B).2.2. COLUMNAS DE VIDRIO DE 10-11 MM DE DIAMETRO Y 30 CM DE LONGITUD CON LLAVE EN LA PARTE INFERIOR.

10(B).3. REACTIVOS.

10(B).3.1. ACIDO ACETICO AL 30 POR 100 (V/V).-INTRODUCIR 300 MILILITROS DE ACIDO ACETICO GLACIAL EN UN MATRAZ AFORADO Y COMPLETAR A 1.000 ML CON H2O DESTILADA.

10(B).3.2. ACIDO ACETICO AL 0,5 POR 100 (V/V).-INTRODUCIR 5 MILILITROS DE ACIDO ACETICO GLACAIL EN UN MATRAZ AFORADO Y COMPLETAR HATA 1.000 ML CON H2O DESTILADA.

10(B).3.3. SOLUCION DE SULFATO DE SODIO AL 7,1 POR 100 (O,5 N).-DISOLVER 71 G DE SULFATO DE SODIO ANHIDRO (NA2SO4) Y COMPLETAR CON AGUA DESTILADA HASTA 1.000 ML.

10(B) 3.4. REACTIVO VANADICO.-DISOLVER 10 G DE METAVANADATO DE AMONIO EN 150 ML DE UNA SOLUCION DE NAOH N. PASAR ESTA SOLUCION A UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML, AÑADIR SEGUIDAMENTE 200 ML DE UNA SOLUCION DE ACETATO DE SODIO AL 27 POR 100 Y LLEVAR LUEGO A 500 ML CON H2O DESTILADA.

10(B).3.5. SOLUCION DE SO4H2 2 N.

10(B) 3.6. SOLUCION DE SO4H2 0,1N.

10(B) 3.7. SOLUCION DE ACIDO PERYODICO 0,1 N (0,05 M). INTRODUCIR 10,696 G DE PERYODATO DE SODIO EN UN MATRAZ AFORADO DE 1.000 LITROS, AÑADIR 50 ML. DE SO4H2 Y COMPLETAR HASTA 1.000 MILILITROS CON H20 DESTILADA.

10(B).3.8. SOLUCION DE GLICEROL AL 10 POR 100.-PESAR 10 G DE GLICEROL MUY PURO BIDESTILADO Y LLEVARLO A 100 ML CON H20 DESTILADA.

10(B).3.9. SOLUCION DE ACIDO TARTARICO DE 1 G POR LITRO.-EN UN MATRAZ AFORADO DE 500 ML DISOLVER 500 MG DE ACIDO TARTARICO (PURO) EN 6,6 ML DE SOSA N Y ENRASAR CON SOLUCION DE SULFATO DE SODIO AL 7,1 POR 100 A 500 ML.

10(B).4. PROCEDIMIENTO.

10(B).4.1. PREPARACION DE LAS COLUMNAS DE RESINAS ANIONICAS. COLOCAR EN EL FONDO DE LA COLUMNA (10(B).2.2) LANA DE VIDRIO FORMANDO TAPON DE 2-3 MM DE ALTURA, APROXIMADAMENTE, Y AÑADIR AGUA HASTA UNA ALTURA DE UNOS 5 MM SOBRE EL TAPON DE LANA DE VIDIRO. AÑADIR DESPUES LA RESINA CAMBIADORA DE ANIONES, CONSERVADA EN ACIDO ACETICO AL 30 POR 100, AGITAR ESTA SUSPENSION Y AGREGAR RAPIDAMENTE UN VOLUMEN DE UNOS 10 ML, EVITANDO LA FORMACION DE BURBUJAS DE AIRE, DEPOSITANDO EN LA SUPERFICIE UN TAPON DE LANA DE VIDRIO, QUE SE CONDUCE CON UNA VARILLA DE VIDRIO, CON EL FIN DE NO REMOVER LAS RESINAS EN LOS SUCESIVOS LAVADOS ANTERIORES EN SU SUPERFICIE. LAS RESINAS SOLAMENTE PUEDEN SERVIR PARA UNA SOLA VEZ.

10(B).4.2. AISLAMIENTO DEL ACIDO TARTARICO.-ABRIR LA LLAVE INFERIOR DE LA COLUMNA Y DAR SALIDA AL ACIDO ACETICO DILUIDO HASTA UNOS 2-3 ML POR ENCIMA DEL TAPON DE LANA SUPERIOR. AÑADIR SEGUIDAMENTE UNOS 10 ML DE ACIDO ACETICO AL 0,5 POR 100 Y VACIAR HASTA IGUAL ALTURA; EFECTUAR ESTOS LAVADOS CUATRO VECES.

DESPUES DEL ULTIMO LAVADO Y CON LA LLAVE CERRADA, ADICIONAR 10 ML DE VINAGRE A ANALIZAR Y SEÑALAR LA ALTURA ALCANZADA CON UN LAPIZ GRASO, ABRIR A CONTINUACION LA LLAVE Y DEJAR SALIR VINAGRE GOTEANDO A RAZON DE 1-1,5 GOTAS POR SEGUNDO ION (25-30 ML POR MINUTO) HASTA UN POCO POR ENCIMA DEL TAPON SUPERIOR DE LANA VIDRIO. LLENAR DE NUEVO LA COLUMNA CON ACIDO ACETICO AL 0,5 POR 100 HASTA LA SEÑAL DEL LAPIZ GRASO Y DEJAR SALIR A LA MISMA VELOCIDAD QUE LA VEZ ANTERIOR Y LAVAR DESPUES EN LA MISMA FORMA SIETE VECES CON 10 ML DE AGUA DESTILADA.

AL TERMINAR EL ULTIMO LAVADO, CERRAR LA LLAVE CUANDO EL NIVEL DEL LIQUIDO SE ENCUENTRE UN POCO MAS ARRIBA DEL TAPON DE LANA DE VIDRIO SUPERIOR.

COLOCAR UN MATRAZ RECEPTOR AFORADO DE 100 ML. ELUIR LOS ACIDOS FIJADOS EN EL CAMBIADOR DE ANIONES, MEDIANTE ADICIONES DE SOLUCION DE SULFATO DE SODIO (10(B).3.3) HASTA LA SEÑAL TRAZADA EN EL TUBO.

PARA HACER ESTA OPERACION RESULTA PRACTICO COLOCAR UN FRASCO CON SOLUCION DE SULFATO UNIDO POR EL CUELLO A LA COLUMNA MEDIANTE UN MANGUITO DE CAUCHO Y CON UNAS PINZAS PARA REGULAR LA CAIDA DEL LIQUIDO EN LA BURETA O TUBO. PUESTO ASI EN COMUNICACION LOS DOS APARATOS (FRASCO Y BURETA O TUBO), ABRIR LAS PINZAS DEL CAUCHO DE UNION Y LA LLAVE INFERIOR, DEJANDO CAER EL LIQUIDO A LA BURETA HASTA UNOS 10 CM DE ALTURA Y SIN QUE QUEDEN HUECOS VACIOS. REGULAR LA SALIDA DEL LIQUIDO EN LA PROPORCION DE 2-3 GOTAS POR SEGUNDO, PARA LLENAR EL MATRAZ RECEPTOR HASTA EL ENRASE.

10 (B).4.3. DETERMINACION DEL ACIDO TARTARICO.-EN DOS MATRACES CONICOS DE 100 ML (A) Y (B) INTRODUCIR 20 ML DEL ELUIDO. EL MATRAZ (A) SIRVE PARA LA MEDIDA Y EL MATRAZ (B) EN EL CUAL EL ACIDO TARTARICO ES DESTRUIDO POR EL ACIDO PERYODICO, CONSTITUYE EL TESTIGO.

AÑADIR AL MATRAZ (A) 2 ML DE SO4H2 2N, 5 ML DE SO4H2 0,1 N Y 1 ML DE GLICEROL AL 10 POR 100.

EN EL MATRAZ (B), AÑADIR 2 ML DE S04H2 2N, 5 ML DE ACIDO PERYODICO 0,1 N, ESPERAR QUINCE MINUTOS Y AÑADIR 1 ML DE SOLUCCION DE GLICEROL AL 10 POR 100 PARA DESTRUIR EL EXCESO DE ACIDO PERYODICO. ESPERAR DOS MINUTOS.

VERTER A CONTINUACION, AGITANDO, PRIMERO EN EL MATRAZ (B) E INMEDIATAMENTE DESPUES EN EL MATRAZ (A), 5 ML DEL REACTIVO VANADICO. DISPARAR INMEDIATAMENTE UN CRONOMETRO E INTRODUCIR EL CONTENIDO DE DICHOS MATRACES EN LAS CUBETAS DE CARAS PARALELAS DE 10 MM DE ESPESOR DEL ESPECTROFOTOMETRO. AL CABO DE UN MINUTO Y TREINTA SEGUNDOS MEDIR LA DENSIDAD OPTICA 490 NM DEL LIQUIDO PROCEDENTE DEL MATRAZ (A) (MEDIDA) DESPUES DE HABER REGLADO EL APARATO PARA OBTENER LA TRANSMISION AL 100 POR 100 CON LA CUBETA CONTENIENDO EL LIQUIDO TESTIGO (B).

10(B).5. CALCULO.

10(B).5.1. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.-TOMAR 10, 20, 30. 40 Y 50 ML DE LA SOLUCION 10(B).3.9. E INTRODUCIR UNA ALICUOTA EN UN MATRAZ AFORADO DE 100 ML. ENRASAR CON SOLUCION DE SULFATO DE SODIO AL 7,1 POR 100. LAS DIFERENTES DILUCIONES CORRESPONDEN A ELUIDOS DEL VINAGRE CONTENIENDO 1, 2, 3, 4 Y 5 G DE ACIDO TARTARICO POR LITRO.

EN DOS MATRACES (A) Y (B) DE 100 ML PONER 20 ML DE CADA UNA DE ESTAS SOLUCIONES Y TRATARLAS IDENTICAMENTE IGUAL A LOS ELUIDOS DEL VINAGRE ANTERIORMENTE DESCRITO.

LA REPRESENTACION GRAFICA DE LAS DENSIDADES OPTICAS DE ESTAS SOLUCIONES ESTA EN FUNCION DE LA CANTIDAD DE ACIDO TARTARICO. PARA ELLO ES RECOMENDABLE Y MAS PRECISO PARTIR DE CONCENTRACIONES 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 Y 1 G/L DE ACIDO TARTARICO.

10(B).5.2. COMPROBAR LOS VALORES OBTENIDOS EN EL ENSAYO CON LOS CORRESPONDIENTES DE LA CURVA PATRON.

10(B).6. REFERENCIAS.

1. RECUEIL DES METHODES D'ANALYSE DES VINS A12H.

11. COBRE

11.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DIRECTA POR ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA.

11.2 MATERIAL Y APARATOS.

ESPECTROFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA, CON LAMPARA ESPECIFICA DE COBRE.

11.3 REACTIVOS.

11.3.1. SOLUCION PATRON DE 1.000 MG/L DE CU.-DISOLVER 1.000 G DE COBRE PURO EN EL MINIMO VOLUMEN NECESARIO DE NO3H (1 + 1) Y DILUIR A 1 LITRO CON NO3H AL 1 POR 100 (V/V).

11.3.2. SOLUCIONES QUE CONTENGAN DE 1 A 10 MG/L DE CU.-DILUIR PARTES ALICUOTAS DE LA SOLUCION PATRON CON ACIDO ACETICO AL 5 POR 100

11.4. PROCEDIMIENTO.

11.4.1. CALIBRADO DEL APARATO.-AJUSTAR EL APARATO CON UNA LONGITUD DE ONDA DE 324,7 NM EN CONDICIONES TALES QUE SE OBTENGA UNA RESPUESTA LINEAL AL INTRODUCIRSE LAS SERIES DE PATRONES PREPARADOS.

11.4.2. DETERMINACION.-EFECTUAR LA LECTURA DIRECTA DE LA ABSORBANCIA.

11.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

PARTIENDO DE LOS VALORES DE ABSORBANCIA OBTENIDOS, HALLAR MEDIANTE LA CURVA PATRON LAS CONCENTRACIONES DE COBRE DE LA MUESTRA.

11.6 REFERENCIAS.

1. G. CHARLOT ET D. BEZIER: "ANALYSE QUANTITATIVE MINERALE". EL MASSON PARIS (1955), 749-752.

2. H.E. PARKER:"ATOMIC ABSORPTION NEWLETTE" (1963), 13.

3. STANDART CONDITIONC FOR ZN AND CU. ANALYTICAL METHODS FOR ATOMIC ABSORPTION SPECTROPHOTOMETRY "PERKIN-ELMER".

4. F. ROUSELET: "SPECTROPHOTOMETRIE PAR ABSORPTION ATOMIQUE BOUDIN". ED PARIS (1968), PAGS. 59-144.

12. CLORUROS

12.1 PRINCIPIO.

DETERMINACION DIRECTA DE CLORUROS POR POTENCIOMETRIA UTILIZANDO EL ELECTRODO AG/AGCL.

12.1 MATERIAL Y APARATOS.

12.2.1. PH-METRO CON ESCALA QUE PERMITA APRECIAR 2 MV.

12.2.2. AGITADOR MAGNETICO.

12.2.3. ELECTRODO AG/AGCL CON UNA SOLUCION SATURADA DE NITRATO DE POTASIO CON ELECTROLITRO.

12.2.4. MICROBURETA GRADUADA EN 1/100 DE MILILITRO.

12.3 REACTIVOS.

12.3.1. SOLUCION PATRON DE CLORUROS.-DISOLVER 2,1027 G DE CLORURO DE POTASIO PURO PARA ANALISIS (MAXIMO 0,005 POR 100 DE BROMO), PREVIAMENTE DESECADO, EN AGUA DESTILADA HASTA 1 LITRO; 1 ML DE ESTA SOLUCION CONTIENE 1 MG DE ION CLORO.

12.3.2. SOLUCION DE NITRATO DE PLATA.-DISOLVER 4,7912 G DE NITRATO DE PLATA EN UNA SOLUCION ALCOHOLICA AL 10 POR 100 (V/V) HASTA 1 LITRO; 1 ML DE ESTA SOLUCION CORRESPONDE A 1 MG DE ION CLORO.

12.3.3. ACIDO NITRICO CONCENTRADO (D=1,40).

12.4. PROCEDIMIENTO.

12.4.1. DETERMINACION DEL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.-INTRODUCIR 5,0 ML DE LA SOLUCION PATRON DE CLORUROS EN UN VASO DE 150 ML. DILUIR APROXIMADAMENTE A 100 ML CON AGUA DESTILADA Y ACIDIFICAR CON 1,0 ML DE ACIDO NITRICO (12.3.3). INTRODUCIR LOS ELECTRODOS. AÑADIR LA SOLUCION DE NITRATO DE PLATA AGITANDO MODERADAMENTE.

LOS CUATRO PRIMEROS MILILITROS SE ADICIONAN EN FRACCIONES DE 1 ML Y SE LEEN LAS CORRESPONDIENTES LECTURAS EN MILIVOLTIOS; LOS DOS SIGUIENTES MILILITROS, EN FRACCIONES DE 0,2 ML Y SE CONTINUA ADICIONANDO EN FRACCIONES DE 1 ML HASTA QUE SE HAYAN ALCANZADO UN TOTAL DE 10 ML. DESPUES DE CADA ADICION SE DEBE ESPERAR UNOS TREINTA SEGUNDOS ANTES DE HACER LA CORRESPONDIENTE LECTURA EN MILIVOLTIOS. LOS VALORES ASI OBTENIDOS SE LLEVAN SOBRE UN PAPEL MILIMETRADO EN FUNCION DE LOS CORRESPONDIENTES MILILITROS DE SOLUCION DE NITRATO DE PLATA, Y A PARTIR DEL PUNTO SINGULAR DE LA CURVA OBTENIDA, DETERMINAR EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

PARA COMPROBAR EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA, LLEVAR A UN VASO DE 150 ML, 5,0 ML DE LA SOLUCION PATRON DE CLORUROS, 95 ML DE H20 DESTILADA Y 1 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO. INTRODUCIR EL ELECTRODO Y VALORAR AGITANDO, JUSTAMENTE HASTA EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

REPETIR ESTA OPERACION HASTA OBTENER UNA BUENA CONCORDANCIA DE RESULTADOS.

ESTE CONTROL DEBE DE EFECTUARSE ANTES DE DETERMINAR LA CONCENTRACION DE CLORUROS EN CADA SERIE DE MUESTRAS A ANALIZAR.

12.4.2. DETERMINACION.-LLEVAR A UN VASO DE 150 ML 50,0 ML DE VINAGRE. AÑADIR 50 ML DE H20 DESTILADA Y 1 ML DE ACIDO NITRICO CONCENTRADO. VALORAR A CONTINUACION, SIGUIENDO EL PROCEDIMIENTO DESCRITO ANTERIORMENTE, HASTA ALCANZAR EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

12.5 CALCULOS.

LA CANTIDAD DE CLORUROS SE DETERMINA MEDIANTE LAS EXPRESIONES:

0,02 N EN GRAMOS DE ION CLORO.

0,5633 N EN MILIEQUIVALENTES POR LITRO DE ION CLORO.

0,0329 N EN GRAMOS DE CLORURO SODICO POR LITRO.

SIENDO:

N = VOLUMEN, EN ML DE SOLUCION DE NITRATO DE PLATA NECESARIO PARA ALCANZAR EL POTENCIAL DEL PUNTO DE EQUIVALENCIA.

12.6 REFERENCIAS.

1. RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSE DE VINS. OIV A-15J.

13. GRADO ALCOHOLICO

13.1 PRINCIPIO.

SEPARACION DEL ALCOHOL POR DESTILACION, OXIDACION DEL MISMO POR DICROMATO POTASICO Y DETERMINACION DEL CONTENIDO POR VALORACION DEL EXCESO DE DICROMATO.

13.2 MATERIAL Y APARATOS.

COMO EN LOS APARTADOS 5(A).2.1; 5(A).2.1.1; 5(A).2.1.2; 5(A).2.1.3; 5(A).2.1.4. DE LOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE VINOS.

13.3. REACTIVOS.

13.3.1. SOLUCION DEL DICROMATO POTASICO.-DISOLVER 33,608 G DE DICROMATO POTASICO PURO EN UNA CANTIDAD SUFICIENTE DE AGUA DESTILADA Y COMPLETAR HASTA 1 LITRO A 20 GRADOS C. ESTA SOLUCION CORRESPONDE AL GRADO ALCOHOLICO INTERNACIONAL O.I.V.

1 ML DE ESTA SOLUCION OXIDA 7,8934 MK DE ALCOHOL.

13.3.2. SOLUCION DE SULFATO DE HIERRO Y DE AMONIO. DISOLVER 135 G DE SULFATO FERROSO AMONIACAL Y 20 ML DE ACIDO SULFURICO PURO EN UNA CANTIDAD DE AGUA SUFICIENTE Y COMPLETAR HASTA 1 LITRO, UN VOLUMEN DE ESTA SOLUCION CORRESPONDE A MEDIO VOLUMEN DE SOLUCION DE DICROMATO POTASICO CUANDO ESTA RECIENTEMENTE PREPARADA. ESTA SOLUCION SE OXIDA LENTAMENTE, POR LO QUE DEBE SER VALORADO FRECUENTEMENTE EN LA MISMA QUE SE REALIZA LA DETERMINACION DEL ALCOHOL, SUSTITUYENDO LA DISOLUCION ALCOHOLICA POR AGUA DESTILADA.

13.3.3. SOLUCION DE PERMANGANATO SODICO.-DISOLVER 1,088 GRAMOS DE PERMANGANTO POTASICO EN UNA CANTIDAD SUFICIENTE DE AGUA Y COMPLETAR HASTA 1 LITRO.

13.3.4. SOLUCION DE ACIDO SULFURICO DILUIDO.-A 5OO MIL DE AGUA DESTILADA AÑADIR, POCO A POCO Y AGITANDO, 500 ML DE ACIDO SULFURICO PURO. DESPUES DE ENFRIADO, COMPLETAR HASTA 1 LITRO CON AGUA DESTILADA.

13.3.5. REACTIVO DE ORTOFENANTROLINA FERROSA.-DISOLVER 0,695 GRAMOS DE S04FE 7H20 EN 100 ML DE AGUA, AÑADIR 1,485 GRAMOS DE MONOHIDRATO DE ORTOFENANTROLINA. CALENTAR PARA FAVORECER LA DISOLUCION.

13.3.6. LECHADA DE CAL 4N.

13.4. PROCEDIMIENTO.

13.4.1. DESTILACION.-MEDIR 200 ML DE VINAGRE EN METRAZ AFORADO Y ANOTAR LA TEMPERATURA. INTRODUCIR EL VINAGRE EN EL MATRAZ DE DESTILACION QUE CONTENGA UNOS FRAGMENTOS DE MATERIAL POROSO. LAVAR EL MATRAZ CUATRO VECES CON 5 ML DE AGUA. ALCALINIZAR CON UN LIGERO EXCESO DE LECHADA DE CAL 4N. RECOGER EL DESTILADO EN MATRAZ AFORADO DE 100 ML. ENRASAR CON AGUA A LA MISMA TEMPERATURA QUE SE MIDIO EL VINAGRE INICIALMENTE.

13.4.2. EN UN MATRAZ ERLENMEYER, CON TAPON ESMERILADO, DE 250 ML, PONER 20 ML DE SOLUCION VALORADA DE DICROMATO POTASICO, 20 ML DE ACIDO SULFURICO DILUIDO Y AGITAR. AÑADIR 10 ML DE DESTILADO EXACTAMENTE MEDIDOS. TAPAR EL ERLENMEYER, AGITAR Y ESPERAR POR LO MENOS TREINTA MINUTOS, AGITANDO DE VEZ EN CUANDO.

13.4.3. VALORACION.-VALORAR EL EXCESO DE DICROMATO CON LA SOLUCION DE SULFATO FERROSO AMONICO. CUANDO LA COLORACION VERDE DE LA SOLUCION VIRE O VERDE AZULADO, AÑADIR CUATRO GOTAS DE REACTIVO DE ORTOFENANTROLINA. DETENER LA ADICION DE SOLUCION DE FERROSA CUANDO EL LIQUIDO VIRE A MARRON.

A MENUDO SE PUEDE LLEGAR A PASAR EL VIRAJE, SIENDO ENTONCES NECESARIO VOLVER AL PUNTO PRECISO ADICIONANDO SOLUCION DE PERMANGANATO POTASICO. UN DECIMO DEL VOLUMEN EMPLEADO DE ESTA SOLUCION SE RESTA DEL VOLUMEN EMPLEADO DE SULFATO FERROSO.

HACER UNA PRUEBA EN BLANCO SUSTITUYENDO LOS 10 ML DE DESTILADO POR AGUA.

13.5 CALCULOS.

GRADO ALCOHOLICO = N' - N / N'

SIENDO:

COHOLICO = N' - N / N'

N = VOLUMEN, EN ML, GASTADOS EN LA VALORACION.

N' = VOLUMEN, EN ML, GASTADOS EN LA PRUEBA EN BLANCO.

13.6. OBSERVACIONES.

SI EL GRADO ALCOHOLICO DEL VINAGRE ES SUPERIOR A 0,8., REPETIR LA OXIDACION UTILIZANDO 10 ML DE DESTILADO DILUIDO A 1/2.

13.7. REFERENCIAS.

1. RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYSE DES VINS. O.I.V. A-2-16.

14. ARSENICO

14.1. PRINCIPIO.

REDUCCION DEL ARSENICO A ARSENAMINA GASEOSA QUE REACCIONA CON DIETILDITIOCARBAMATO DE PLATA (DISUELTO EN PIRIDINA), DANDO UN COMPLETO DE COLOR ROJO.

14.2 MATERIAL Y APARATOS.

(FIGURA OMITIDA)

14.2.2. ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO QUE PERMITA LECTURAS A 538 NM.

14.3 REACTIVOS.

14.3.1. SOLUCION DE DIETILDITIOCARBAMATO DE PLATA.-DISOLVER 1.000 G DE ESTE REACTIVO EN 200 ML DE PIRIDINA PARA CROMATOGRAFIA.

ESTA SOLUCION PUEDE CONSERVARSE ALGUNAS SEMANAS.

14.3.2. ACETATO DE PLOMO EN ALGODON.-IMPREGNAR EL ALGODON HIDROFILO EN SOLUCION ACUOSA DE ACETATO DE PLOMO AL 10 POR 100, ESCURRIR EL LIQUIDO EN EXCESO Y DESECAR AL VACIO.

14.3.3. SOLUCION ACUOSA DE IODURO POTASICO AL 15 POR 100.

14.3.4. SOLUCION ACUOSA DE SULFATO DE COBRE AL 2 POR 100.

14.3.5. SOLUCION DE CLORURO ESTANNOSO.-DISOLVER 0,33 G DE CLORURO ESTANNOSO EN 100 CC DE CLH AL 32 POR 100 (D = 1,16).

14.3.6. ZN PURO GRANULADO, EXENTO DE ARSENICO.

14.3.7. ACIDO NITRICO (D = 1,40).

14.3.8. ACIDO SULFURICO (D = 1,84).

14.3.9. SOLUCION DE 100 MG/L DE ARSENICO.

14.4. PROCEDIMIENTO.

14.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.- EN UN MATRAZ KJELDAHL DE 500 ML INTRODUCIR 100 ML DE VINAGRE CON 100 ML DE NO3H (D = 1,40), PARA EVITAR LAS PERDIDAS DE AS. LLEVAR A EBULLICION HASTA REDUCIR EL VOLUMEN A 10 ML, AÑADIR 5 ML DE ACIDO SULFURICO (D = 1,84) Y CONTINUAR LA EBULLICION ADICIONANDO NO3H GOTA A GOTA HASTA LA TOTAL DECOLORACION. DESPUES DE LA EXPULSION DE LOS VAPORES NITROSOS DEJAR ENFRIAR, DILUIR CON 10 ML DE AGUA DESTILADA Y CALENTAR HASTA CASI SEQUEDAD. UNA VEZ FRIO EL MATRAZ, TRANSVASAR EL RESIDUO EL MATRAZ DE VALORACION UTILIZANDO 40 ML DE AGUA DESTILADA.

14.4.2. VALORACION.-PONER EN EL TUBO EN U, 3 ML DE LA SOLUCION DE DIETILDITIOCARBAMATO DE PLATA. COLOCAR EN LA PARTE SUPERIOR DEL TUBO INTERMEDIO DEL APARATO DE ALGODON IMPREGNADO DE ACETATO DE PLOMO CON OBJETO DE RETENER EL SULFHIDRICO Y LA FOSFAMINA QUE PUEDAN DESPRENDERSE AL MISMO TIEMPO QUE LA ARSENAMINA.

INTRODUCIR LA MUESTRA PREPARADA EN EL ERLENMEYER DE 100 ML DEL APARATO DESCRITO Y AÑADIR SUCESIVAMENTE 10 ML DE LA SOLUCION DE CLORURO ESTANNOSO, 5 ML DE LA SOLUCION DE IODURO POTASICO Y 1 ML DE LA SOLUCION DE SULFATO DE COBRE. DESPUES DE QUINCE MINUTOS AÑADIR 5 GRAMOS DE ZN GRANULADO Y CERRAR RAPIDAMENTE EL APARATO. COLOCARLO EN LA OSCURIDAD Y DEJAR PASAR LOS VAPORES POR LO MENOS DURANTE UNA HORA.

14.4.3. PREPARACION DE LA CURVA PATRON.-A PARTIR DE UNA SOLUCION 14.3.9., PREPARAR SOLUCIONES QUE CONTENGAN 0,5,1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 (SIMBOLO OMITIDO) DE ARSENICO POR LITRO.

14.5. CALCULOS.

CALCULAR EL CONTENIDO DEL ARSENICO UTILIZANDO LA CORRESPONDIENTE CURVA PATRON.

14.6. OBSERVACIONES.

14.6.1. INTERFIERE EN LA DETERMINACION DEL ANTIMONIO CUYO COMPLEJO ABSORBE A 510 NM.

14.6.2. LA LEY DE LAMBERT-BEER SE CUMPLE ENTRE LAS CONCETRACIONES DE 0 Y 15 MICROGRAMOS DE AS.

14.6.3. ESTE METODO TIENE UN LIMITE DE DETECCION DE 0,2 MICROGRAMOS.

14.7. REFERENCIAS.

1. VASAK V Y SEDIVEC V (1952) CHEM. LISTY 46, 341, CITADO POR M.D. GARRIDO, M. L. GIL Y C LLAGUNO. AN. BROMATOLOGIA XXVI-2 (1974), 167-176.

2. RECUEIL DES METHODES INTERNATIONALES D'ANALYS DES VINS. O.I.V. A-34 F.

15. CINC

15.1. PRINCIPIO.

DETERMINACION DIRECTA POR ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA.

15.2. MATERIAL Y APARATOS.

15.2.1. ESPECTOFOTOMETRO DE ABSORCION ATOMICA.

15.2.2. LAMPARA DE CINC.

15.3. REACTIVOS.

15.3.1. SOLUCION PATRON DE 1.000 PPM DE ZN.-DISOLVER 1.000 GRAMOS DE ZN PURO EN EL MINIMO VOLUMEN NECESARIO DE ACIDO NITRICO (1 + 1) Y DILUIR A 1 LITRO CON ACIDO NITRICO AL 1 POR 100 (V/V).

15.4 PROCEDIMIENTO.

15.4.1. PREPARACION DE LA MUESTRA.-NO SE NECESITA PREPARACION ESPECIAL. EN CASO DE ELEVADA CONCENTRACION, REALIZAR UNA O VARIAS DILUCIONES HASTA QUEDAR DENTRO DEL RANGO DE MEDIDA.

15.4.2. DETEMINACION.-DILUIR PARTES ALICUOTAS DE LA SOLUCION (15.3.1) CON ACIDO ACETICO AL 5 POR 100 PARA OBTENER SOLUCIONES DE 0, 0,5, 1, 1,5, Y 2 PPM. ASPIRAR LAS SOLUCIONES PATRON Y A CONTINUACION LA MUESTRA, ANOTANDO LAS ABSORBANCIAS OBTENIDAS A 213,8 NM.

15.5. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS.

PARTIENDO DE LOS VALORES DE ABSORBANCIA OBTENIDOS, HALLAR LAS CONCENTRACIONES DE CINC DE LA MUESTRA.

15.6. REFERENCIAS.

1. H.E. PARKER, ATOMIC ABSORPTION NEWLETTER (1963), 13.

2. STANDAR CONDITIONS FOR ZN AND CU. ANALYTICAL METHODS FOR ATOMIC ABSORPTION SPECTROPHOTOMETRY "PERKIN-ELMER".

6. ACETILMETILCARBINOL (ACETOINA)

6.1 PRINCIPIO.

DETERMINACION CUANTITATIVA DE LA ACETOINA POR CROMATOGRAFIA DE GASES.

6.2. MATERIAL Y APARATOS.

6.2.1. EQUIPO DE CROMATOGRAFIA DE GASES COMPUESTO POR:

6.2.1.1. DETECTOR DE IONIZACION DE LLAMA.

6.2.1.2. HORNO CON TEMPERATURA REGULABLE.

6.2.1.3. REGISTRADOR.

6.2.1.4. GASES: AIRE-NITROGENO.

6.2.1.5. COLUMNA: FFPA 2,5 POR 100 SOBRE CHROMOSORB G (HP), AÑADIENDOSE UN 0,5 DE UN REDUCTOR DE COLAS (P. E., CARBOWAX 1.500) Y DE DIMENSIONES 2 METROS DE LONGITUD Y 1/8 DE PULGADA DE DIAMETRO EXTERNO DE LA COLUMNA.

6.2.2. MICROJERINGA DE 1 A 10 (SIMBOLO OMITIDO)

6.3. REACTIVOS.

6.3.1. ACETOINA.

6.3.2. PENTANOL-1.

6.3.3. ALCOHOL ETILICO ABSOLUTO.

6.3.4. HIDROXIDO CALCICO.

6.4. PROCEDIMIENTO.

6.4.1. DISOLUCIONES PATRON.

6.4.1.1. DE ACETOINA: A PARTIR DE ACETOINA PURIFICADA DE SU POSIBLE CONTENIDO EN DIACETILO MEDIANTE DESTILACION, OBTENER SOLUCIONES DE ACETOINA QUE CUBRAN UN RANGO DE CONCENTRACIONES DE 10 A 500 MG/L EN AGUA DESTILADA.

6.4.1.2. DE PATRON INTERNO: AÑADIR 2 ML DE PENTANOL-1 EN 100 ML DE SOLUCION HIDROALCOHOLICA AL 50 POR 100.

6.4.2. DETERMINACION.

6.4.2.1. CONDICIONES CROMATOGRAFICAS.

GAS PORTADOR: NITROGENO (FLUJO DE 12,5 MG/MIN).

TEMPERATURA HORNO: 70 GRADOS C.

TEMPERATURA INYECTOR: 180 GRADOS C.

INYECCION: 4 O 2 (SIMBOLO OMITIDO).

PATRON INTERNO: PENTANOL-1.

6.4.2.2. METODO OPERATORIO.

A CADA UNA DE LAS SOLUCIONES PATRON DE ACETOINA PREPARADAS EN 6.4.1.1. AÑADIR SOLUCION DE PENTANOL-1, DE TAL FORMA QUE LAS SOLUCIONES QUE CONTENGAN DE 10 A 50 MG/L DE ACETOINA SE LE AÑADAN 15 (SIMBOLO OMITIDO) Y A LAS QUE CONTENGAN DE 50 A 500 MG/L SE LE AÑADAN 35 (SIMBOLO OMITIDO), E INYECTARLAS A CONTINUACION, OBTENIENDO LA CURVA DE CALIBRADO (SE DEBEN EFECTUAR DOS CURVAS DE CALIBRADO, UNA QUE CUBRA EL RANGO DE 0-50 MG/L DE ACETOINA Y OTRA DE 50 A 300 MG/l).

LA INYECCION DE LA MUESTRA PUEDE EFECTUARSE DIRECTAMENTE DEL VINAGRE UNA VEZ AÑADIDO EL PATRON INTERNO, PERO TENIENDO EN CUENTA QUE EL TIEMPO DE RETENCION ES ELEVADO Y LA CONCENTRACION DEL ACETICO ES MUY GRANDE, OBLIGA A ESPERAR UN LARGO PERIODO DE TIEMPO ENTRE DOS INYECCIONES SUCESIVAS. PARA EVITAR ESTA DIFICULTAD, DEBEN NEUTRALIZARSE A PH = 7 LAS MUESTRAS, PREFERIBLEMENTE CON CA(OH)2 SOLIDO PARA EVITAR VARIACIONES DE VOLUMEN. TENGASE EN CUENTA QUE LA CONCENTRACION DE ACETOINA EN EL MEDIO NEUTRO PUEDE VARIAR CON EL TIEMPO, POR LO QUE LA NEUTRALIZACION DEBE HACERSE INMEDIATAMENTE ANTES DE INYECTAR EN EL CROMATOGRAFO.

6.5. CALCULOS.

LOS CROMATOGRAMAS OBTENIDOS DE LAS DISTINTAS SOLUCIONES PATRON PERMITEN REPRESENTAR GRAFICAMENTE LA RELACION EXISTENTE ENTRE EL COCIENTE:

(FORMULA OMITIDA)

6.6. REFERENCIAS.

1. E. F. GOROSTIZA, M. L. GIL DE LA PEÑA Y M. C. GOMEZ CORDOBES. INSTITUTO DE FERMENTACIONES INDUSTRIALES.

16. PROLINA

16.1 PRINCIPIO.

DETERMINACION CUANTITATIVA DE LA PROLINA POR REACCION CON NINHIDRINA EN MEDIO ACIDO.

16.2. MATERIAL Y APARATOS.

16.2.1. TUBOS DE ENSAYO CON TAPON DE ROSCA.

16.2.2. ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO QUE PERMITA EFECTUAR LECTURAS A 517 NM.

16.3. REACTIVOS.

16.3.1. NINHIDRINA AL 3 POR 100 EN ETER MONOMETILICO DEL ETILENGLICOL.

16.3.2. ACIDO FORMICO.

16.3.3. ISOPROPANOL-AGUA 1:1 (V/V)

16.4 PROCEDIMIENTO.

DILUIR LA MUESTRA HASTA QUE CONTENGA DE 0,05 A 0,50 MILIMOLES/ML DE PROLINA.

TOMAR 1/2 ML DE MUESTRA DILUIDA A INTRODUCIRLA EN UN TUBO DE ENSAYO CON TAPON DE ROSCA, AÑADIR 0,25 ML DE ACIDO FORMICO Y 1 ML DE SOLUCION DE NINHIDRINA AL 3 POR 100. CERRAR HERMETICAMENTE EL TUBO E INTRODUCIRLO EN UN BAÑO DE AGUA HIRVIENDO DURANTE CATORCE O QUINCE MINUTOS. ENFRIARLO A UNOS 20 GRADOS C DE CINCO A DIEZ MINUTOS, AÑADIENDO MIENTRAS SE ENFRIA 5 ML DE SOLUCION DE ISOPROPANOL-AGUA 1:1 (V/V).

A CONTINUACION EFECTUAR LA LECTURA DE LA ABSORCION A 517 NM DESPUES DE CINCO MINUTOS Y ANTES DE TREINTA MINUTOS.

EFECTUAR UN BLANCO SIGUIENDO EL PROCEDIMIENTO ANTERIOR, PERO USANDO 0,5 ML DE AGUA DESTILADA EN VEZ DE LA SOLUCION PROBLEMA.

16.5. INTERPRETACION DE RESULTADOS.

CALCULAR EL CONTENIDO EN PROLINA POR COMPARACION CON UNA CURVA PATRON QUE COMPRENDA CONCENTRACIONES ENTRE 0,05 Y 0,50 MILIMOLES/ML.

16.6. REFERENCIAS.

1. C.S. OUGH J. OF FOOD SCIENCE 34(3), PAG. 228 (1969).

ORUNOS, HECES Y LIAS

1. CONTENIDO ALCOHOLICO EN ORUJOS, HECES Y LIAS

1.1. PRINCIPIO.

SE DETERMINA POR DESTILACION DE LA MUESTRA ALCALINIZADA Y MEDIDA DEL CONTENIDO ALCOHOLICO POR ALCOHOMETRIA.

1.2. MATERIAL Y APARATOS.

1.2.1. APARATO DE DESTILACION.-CONSTA DE LAS SIGUIENTES PARTES:

1.2.1.1. MATRAZ DE DESTILACION DE 1.000 ML CON RODAJE ESMERILADO. SE PUEDE UTILIZAR DE BOCA ANCHA O DE BOCA ESTRECHA.

1.2.1.2. COLUMNA DE RECTIFICACION DE 20 CM DE LARGO.

1.2.1.3. DISCO METALICO O DE AMIANTO CON UN ORIFICIO DE 8 CM DE DIAMETRO.

1.2.1.4. REFRIGERANTE DE WEST DE 40 CM DE LONGITUD CON CIRCULACION RAPIDA DE AGUA.

1.2.2. EQUIPO DE MEDIDA.

1.2.2.1. ALCOHOMETROS.

1.2.2.2. TERMOMETROS.-GRADUADOS EN GRADOS Y DECIMAS DE GRADO Y COMPRENDIENDO EL INTERVALO DE O-30.

1.2.2.3. PROBETA CILINDRICA DE 36 MM DE DIAMETRO Y 320 MM DE ALTURA.

1.2.3. GRANATORIO.

1.2.4. MATRAZ AFORADO DE 200 ML.

1.2.5. VASO DE PRECIPITADOS.

1.3. REACTIVOS.

1.3.1. LECHADA DE CAL-SOLUCION DE 120 G DE CAO EN 1.000 ML DE AGUA.

1.3.2. ACIDO SULFURICO AL 10 POR 100.

1.4. PROCEDIMIENTO.

EL PRODUCTO A ANALIZAR ES VERTIDO EN UN VASO DE PRECIPITADOS DONDE ES AGITADO PARA SU HOMOGENEIZACION Y AL MISMO TIEMPO PARA FAVORECER LA EXPULSION DE CO2 QUE PUEDA CONTENER.

EN EL CASO DE ORUJOS, EL MUESTRO SE REALIZA DE FORMA QUE LA MUESTRA SEA LO MAS HOMOGENEA POSIBLE.

PESAR 200 G DE MUESTRA HOMOGENEIZADA Y VACIAR EN EL MATRAZ DE DESTILACION AÑADIENDO 200 ML DE AGUA, PARTE DE LOS CUALES SE UTILIZAN PARA ENJUAGAR EL VASO QUE HA CONTENIDO LA MUESTRA, Y A CONTINUACION SE AÑADE LECHADA DE CAL HASTA NEUTRALIZAR EN EXCESO (10 ML APROXIDAMENTE).

DESTILAR A CONTINUACION RECOGIENDO 200 ML, O BIEN LAS TRES CUARTAS PARTES DE ESTE VOLUMEN (150 ML).

AÑADIR AL DESTILADO MAS GOTAS DE UNA DISOLUCION ACUOSA DE TORNASOL Y COMPROBAMOS QUE EL DESTILADO TOMA COLOR AZUL, DE FRANCA ALCALINIDAD, DEBIDA AL NH3 QUE CONTIENE.

SEGUIDAMENTE, CON UNA PIPETA SE ADICIONA ACIDO SULFURICO AL 10 POR 100 EN CANTIDAD SUFICIENTE PARA EL DESTILADO VIRE AL ROJO, AÑADIENDO UN POCO MAS (O,5 ML) PARA QUE EL MEDIO QUEDE FRANCAMENTE ACIDO. COMPLETAR CON AGUA DESTILADA EL CONTENIDO DE LOS 200 ML DEL MATRAZ Y SE PROCEDE A UNA SEGUNDA DESTILACION, COMO SI DE UN VINO SE TRATASE.

EL DESTILADO RECOGIDO DE ESTA SEGUNDA DESTILACION ESTA YA EN CONDICIONES PARA DETERMINAR SU GRADO ALCOHOLICO POR AEROMETRIA Y EFECTUAR LA CORRECCION A 20. C.

1.5. EXPRESION DE LOS RESULTADOS.

EL RESULTADO SE PUEDE EXPRESAR:

(FORMULA OMITIDA)

1.6. REFERENCIAS.

2. DE BERNARDI, P.; GARCIA VIANA, E. 1969. "DETERMINACION DE GRADO ALCOHOLICO DE HECES Y LIAS". ESTACION ENOLOGICA DE REQUENA.

(FIGURA OMITIDA)